皮层星形胶质细胞的原代培养可应用于：

（1）细胞保种；（2）皮层星形胶质细胞功能研究。

操作方法

贴附差异法

原理

利用星形胶质细胞、少突胶质细胞和小胶质细胞生长存在时间上的差异、细胞生长方式及细胞对培养层黏附性不同等特性，用37℃恒温摇床从培养的皮层来源的混合胶质细胞中去除少突胶质细胞和小胶质细胞，其中星形胶质细胞的贴附力最强。用这种方法获得的星形胶质细胞纯度很高(95%以上），且细胞具有较好的增殖能力。

材料与仪器

新生2-3d的SD大鼠仔鼠
含10%胎牛血清的DMEM培养基 D-PBS液 消化液(0.25%胰蛋白酶+0.04%的EDTA)
37℃恒温摇床

步骤

1.培养少突胶质细胞，待10天后细胞分层，且星形胶质细胞已经完全铺满底层，开始纯化。

2在37℃恒温摇床上，固定好培养瓶，以280r/min的速度能摇过夜，约20h。

3.次日，在显微镜下观察上层细胞脱落情况，若上层细胞基本去除干净，而下层细胞仍完好贴壁，就可终止纯化。弃培养液后按照细胞传代的方法将细胞从培养瓶中分离出来并再次接种。分离培养成功的细胞，没有污染，状态好，细胞增殖较快，1周左右能进行传代，而且没有太多的杂细胞。

注意事项

1.摇床过夜纯化细胞时注意用封口膜将瓶口封死，避免污染和漏气。

2.如果下层细胞在震摇过夜后开始成片脱壁，应及时终止震摇并开始传代分离培养。

3.硝化后重新接种的星形胶质细胞最好接种在多聚赖氨酸处理过的介质上，否则细胞容易聚团生长，状态不好。

常见问题

1.选择原代培养用的动物时，最好是新生2-3d的仔鼠，此时的皮层星形胶质细胞数最较多，且易存活。

2.原代培养的星形胶质细胞可以传代培养，但应确保每次实验使用的细胞为同一代次的。

来源《神经生物学实用实验技术》第四军医大学出版社

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