蛋白激酶的分析是使用标记的供体底物，当酶样品中含有磷酸转移酶活性时，蛋白 质或多肽受体底物中标记物的积累就很容易被检出。内容来源于《精编分子生物学实验指南（第五版）》

操作方法

基本方案

材料与仪器

有 PKC 活性的酶样品
[γ-32P] ATP 溶液 PKC 反应缓冲液 TCA SDS - PAGE 样品缓冲液
30℃ 水浴 P81 磷酸纤维素膜 离心管

步骤

1. 每个分析反应按以下比例将各反应组分加入 1.5 ml 微量离心管中：

4 μl 5 × PKC 反应缓冲液

1 μl 10 mg/ml 组蛋白 H1

1 [γ-³²P] ATP 溶液（ATP 终浓度为 5 mmol/L，放射活性为 5 μCi/μl）

0～14 μl 水

盖好离心管，放入 30℃ 水浴温育 10 min。

三个反应为一组设立无底物和酶的对照。每个反应的容积为 20 μl。在步骤 2 中加入水的量取决于所用酶样品的多少。

2. 加入 1～14 μl 有 PKC 活性的酶样品到预热的反应混合液中，开始反应。

3. 30℃， 温育 10 min。

4. 按不同的分析方法加入适当的试剂停止反应：加入 20 μl 10 % 预冷的 TCA 进行 TCA沉淀，10 μl 或 20 μl 预冷的 2 × SDS - PAGE 样品缓冲液进行电泳分析。可用 10 μl 的反应产物点膜，使样品吸附在 P81 磷酸纤维素膜上。用那些方法中的一种继续进行分析。

常见问题

有 PKC 活性的酶样品（见辅助方案 1）

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