上皮细胞易存在纤维细胞污染，其污染程度能够采用特异的中等纤维蛋百亚基波形蛋内（vimentin，作为成纤维细胞的标记）和角蛋白（作为上皮细胞的标记）抗体进行双重免疫荧光染色。关于如何降低污染的方法前面已述及；另一种用来降低贴壁上皮细胞群屮成纤维细胞数量的方法是采用不同浓度的胰蛋白酶化。本实验来源于细胞实验指南（上册)，作者：黄培堂。

操作方法

降低上皮细胞培养过程中的污染

原理

上皮细胞易存在纤维细胞污染，其污染程度能够采用特异的中等纤维蛋百亚基波形蛋内（vimentin，作为成纤维细胞的标记）和角蛋白（作为上皮细胞的标 记）抗体进行双重免疫荧光染色。关于如何降低污染的方法前面已述及；另一种用来降低贴壁上皮细胞群屮成纤维细胞数量的方法是采用不同浓度的胰蛋白酶化。

步骤

过程

1) 用含 0.53 mmol/LEDTA,0.05% 胰蛋白酶的 HBSS 洗涤培养物一次。

2) 加入同样浓度的新配制的胰蛋白酶于培养物中，室温放置 4 分钟。

3) 用吸管吸取胰蛋白酶上下吹打细胞以清洗培养物。
在吹打过程中变圆的成纤维细胞渐被去除，只留下的上皮细胞。

4) 再加人新鲜培养液以灭活残留的胰蛋白酶。

注意事项

注意事项若有必要，上述培养液中可补加杀真菌试剂如 2.5ug/ml 两性霉素 B。遗憾的足，杀真菌剂有可能阻止细胞的生长，尽可能不用杀真菌剂。

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