冻存细胞的复苏可以用于：

（1）在细胞的实验操作中，冻存的细胞要进行复苏，再培养传代。（2）持久地保留细胞系

操作方法

冻存细胞的复苏

原理

冻存细胞应在流水中快速融化并加入生长培养液。实验者应配戴护目镜和手套，因为曾浸没在液氮中的冻存管中可能漏人液氮，而当融化冻存液时冻存管中的气体温度上升可导致爆炸。

材料与仪器

冻存细胞
乙醇 细胞培养液
冻存管、水浴锅

步骤

1) 调整水龙头温度为 40°C，在龙头下放置一广口烧杯。

2) 从液氮中取出冻存细胞的冻存管。

3) 将冻存管置于 40°C 流水中直至完全融化，一旦冰块消失即将冻存管从水浴中取出。

该步骤的目的是尽可能快地融化细胞，但不允许细胞温度升到 37°C 以上而且一旦其融化细胞便不应再保存在冻存液中。

4) 用 70% 乙醇擦洗冻存管外部以降低污染机会。

5) 吸取冻存管内容物于 T-25 细胞培养瓶或培养皿中，缓慢加人 4 ml 生长培养液，并混匀。

6)37°C 孵育细胞，在 24 小时内更换培养液以滋养细胞。

注意事项

- 某些类型细胞呈现较好的复苏效果，如果缓慢加入培养液于冻存液中以使冻存液被去除，然后细胞离心后重悬于新鲜培养液中。- 冻存记录：保存冻存细胞的精确记录是很重要的。需建立细胞生长史、名称、传代次数、冻存日期、复苏次数、生长培养液和在冻存器中的位置都是应记录的项目。- 冻存液：应用补充 10%~20%FBS 的生长培养液和 10% 甘油或 DMSO。大多数悬浮细胞釆用 DMSO。最佳冻存液配方在比较 FBS 浓度（10%~20%)，DMSO(5%~20%) 或甘油（10%~15%) 浓度后决定。在低温状态保存数天后进行复苏效率的比较。小心：甘油；DMSO

常见问题

将细胞放在低温环境，减少细胞代谢，以便长期储存。

来源《细胞实验指南（上册)》作者：黄培堂。

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