实验方案(Protocols)

火箭电泳实验

简介

定量的抗原加入到含有一定量的相应抗体的琼脂糖凝胶中,在电场作用下,引起抗原抗体的迁移和相互反应,当比例合适时形成肉眼可见的沉淀峰,由于电泳继续进行,样品孔不断有抗原移向抗原抗体复合物的沉淀峰,因抗原过剩使沉淀溶解而在前面又形成新的抗原抗体复合物的沉淀峰。

操作方法

火箭电泳

原理

在电场作用下,抗原在含定量抗体的琼脂介质中泳动,二者比例在合适时在较短时间内形成状似火箭或锥形的沉淀线,而此沉淀线的高度常与抗原量成正比关系,因此本法可以测定样品中抗原的含量。

材料与仪器

待检血清
巴比妥缓冲液 琼脂粉
微量进样器 打孔器 玻璃板 电泳仪

步骤

1.  抗体琼脂板的制备:同单向扩散法,但注意稀释液应用pH8.6离子强度0.05 M 的巴比妥缓冲液。
2.  打孔见下图 图1 火箭电泳抗原孔位置图 3.  将用缓冲液稀释的适宜浓度的参考血清及适当稀释的抗原(人血清)分别加入各孔中,每孔10或20微升,要求加量准确而不外溢。
4.  把加完样的免疫琼脂板放入电泳槽中进行电泳,电压4~6伏/厘米,电泳时间1~5小时,直到大部分抗原孔前端出现顶端尖窄而完全闭合的火箭状沉淀线,关闭电源。
5.  取下琼脂板,以抗原孔中心为起点,量出各火箭状沉淀线的高度。同单向琼脂扩散法绘制标准曲线,查出待检血清中Ig含量。


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Da — 若无特别说明,分子量单位默认为道尔顿。   Mw — 重均分子量。   Mn — 数均分子量。

产品仅供科研与开发使用,不用于人体、动物、诊断或治疗。

引用本文

阿拉丁科学.《火箭电泳实验》. 阿拉丁知识库,更新于 2024年12月23日。 https://www.aladdin-e.com/zh_cn/faqs/rocket-electrophoresis-experiment.html
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