本实验方法来源于第四军医大官方网站

操作方法

DNA荧光染色的样品制备实验

材料与仪器

PBS
DNA荧光染料 流式细胞仪

步骤

DNA是细胞内含量比较恒定的参量，随着细胞增殖周期的各时相而发生变化。荧光染料（如PI）可选择性地定量嵌入核酸（DNA/RNA）的双螺旋碱基之间，与细胞特异性结合，DNA含量与荧光染料的结合量成正比，因此通过测定荧光强度可获知细胞的增殖情况。

1． 将固定过的细胞离心（500～1000rpm，5min）弃上清液，再用PBS洗涤2次。

2． 用PBS调整细胞浓度，每份为1×106个细胞/100μl。

3． 加入1000μl DNA 荧光染料（通常用Coulter公司提供的DNA染色试剂盒），室温下避光染色15 min。

4． 上流式细胞仪检测。

样品的制备可分析细胞周期各时相的百分比，同时可粗略观察有无凋亡细胞现象，如果用对照液（鸡红细胞）作参照标准，可进行细胞DNA倍体分析，通过DNA指数（DNA index，DI）衡量DNA的相对含量，DI可用下式计算：

DI＝样品G0/G1期的均值／正常二倍体细胞G0/G1期均值

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