骨骼肌细胞的培养实验是指在体外条件下对骨骼肌细胞进行培养。

原理

骨骼肌细胞的培养实验的基本原理是在体外培养时，在培养基中加入胎牛血清并将细胞接种于明胶上，可使肌肉组织中的骨骼肌单核前体细胞在发生增殖的基础上，进一步向成熟骨骼肌细胞发生分化，即细胞间进行大量的融合、细胞内有横纹形成、细胞可发生自发性的收缩等，由此可得到大量的骨骼肌细胞。

操作方法

骨骼肌细胞的培养实验

原理

骨骼肌细胞的培养实验的基本原理是在体外培养时，在培养基中加入胎牛血清并将细胞接种于明胶上，可使肌肉组织中的骨骼肌单核前体细胞在发生增殖的基础上，进一步向成熟骨骼肌细胞发生分化，即细胞间进行大量的融合、细胞内有横纹形成、细胞可发生自发性的收缩等，由此可得到大量的骨骼肌细胞。

材料与仪器

器材：
① 新生 1～2d 的大鼠
② 培养瓶
③ 吸管和胶帽
④ 培养皿
⑤ 解剖剪
⑥ 眼科剪
⑦ 眼科镊
⑧ 无菌的沙网
⑨ 离心机
⑩ 倒置显微镜
⑪ 超净工作台
⑫ CO2 培养箱
⑬ 离心管
试剂:
① D-Hanks 液
② DMEM 培养基（含 10% 胎牛血清）
③ 胶原酶液
④ 0.01% 明胶等。

步骤

骨骼肌细胞的培养实验基本过程可分为以下几步：
(1) 取材
A. 取新生 1～2 d 的大鼠 1 只，采用脱颈椎法将其处死。
B. 用 70% 的乙醇擦拭大鼠全身 3 遍。
C. 在无菌条件下，用解剖剪剪开大腿皮肤，剥去皮毛。
D. 用眼科剪取下大腿肌肉，将其置于盛有 D-Hanks 液的培养皿中。
E. 除去肌肉组织上粘连的脂肪组织，并将肌肉中的骨骼剔除。
F. 将上述肌肉组织用 D-Hanks 液再反复清洗 3 遍，然后置于含用培养基的培养皿中。
(2) 消化
A. 用眼科剪将肌肉组织剪成大小为 1 mm³ 的小块，放入盛有胶原酶液（2000 U/ml）的锥形瓶中，于 37 ℃ 消化 24 h 左右。
B. 吸管用力吹打消化后的肌肉组织块，用无菌的沙网将吹打后残余的组织碎块加以滤过，收集细胞悬液于 10 ml 离心管中。
C. 800 r/min 离心 5 min，弃上清。
D. 加入含 10% 胎牛血清的培养基，吹打沉淀的细胞，制备细胞悬液。
E. 将细胞接种于覆盖有 0.01% 明胶的培养皿中，接种量可增大到 2 x 10⁶ 个细胞/皿。
F. 将培养皿置于 37 ℃ 培养箱中进行培养，4～5 d 后即可得到大量的骨骼肌细胞。

注意事项

1. 因生长中的肌肉组织中，骨骼肌单核前体细胞数量较多，因此，为提高培养的成功率，培养所用的组织材料应尽量取自动物的幼体或胚胎。

2. 因成肌细胞比非成肌细胞贴壁慢，可采用反复贴壁的方法，减少原代培养中非成肌细胞的污染。

3. 良好的培养条件，如向培养基中加入胎牛血清、将细胞接种于明胶上等，可避免培养的成肌细胞发生去分化的现象，促使其向成熟骨骼肌细胞转变，即：细胞间大量融合形成多核细胞、细胞发生自发性收缩等。

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