将 RNA 保存于甲酰胺中比储存于水中或乙醇中有更多好处：

（1）甲酰胺将保护 RNA 不受 RNA 酶的降解，以这种方式保存的 RNA 是相当稳定的，可以在 4℃ 保存过夜，或在一 20°C 保存相当长的一段时间。样品甚至可以置于室温过夜而不用担心其降解；（2）样品可被高度浓缩，其终浓度甚至可以达到 4 mg/ml；

（3）由于有了高度浓缩的 RNA 样品，在进行反转录实验时效率提高。

操作方法

RNA在甲酰胺中的溶解保存

原理

甲酰胺具有活泼的反应性和特殊的溶解能力，可用作有机合成原料，纸张处理剂，纤维工业的柔软剂，动物胶的软化剂，还用作测定大米中氨基酸含量的分析试剂。在有机合成中，医药方面的用途居多，在农药、染料、颜料、香料、助剂方面也有很多用途。也是优良的有机溶剂，主要用于丙烯腈共聚物的纺丝和离子交换树脂中，以及塑料制品的防静电涂饰或导电涂饰等。此外，还用于分离氯硅烷、提纯油脂等。甲酰胺可发生多种反应，除了由三个氢参与反应外，还可以进行脱水，脱CO，引入氨基，引入酰基和环合等反应。

材料与仪器

RNA
无水乙醇 异丙醇 的乙醇 甲酰胺 3mol L 的乙酸钠
高速离心机 紫外分光光度计

步骤

一材料与设备

所有的试剂配制均需采用经过蒸馏并消毒的去离子水。

1) 无水乙醇

2) 异丙醇

3)75% 的乙醇

4)100% 甲酰胺

5)3mol/L 的乙酸钠

6) 高速离心机

7) 紫外分光光度计

二操作方法

1) 使用 CsCl 法，酸-苯酚法，TRIol 法或 RNaolB 法进行 RNA 的一步提取。

2) 用无水乙醇 (CsCl 法）或异丙醇 (其他方法）沉淀 RNA, 离心获得 RNA 沉淀。

3) 用 75% 的乙醇清洗 RNA 沉淀以除去多余的盐分。

4) 晾干，尽量吸去乙醇，并确保 RNA 中没有多余的乙醇存在。

5) 用保存的 100% 甲酰胺重悬 RNA。甲酰胺的用量应视 RNA 沉淀的多少而定，通常用量在 10ul 到 1000ul 之间。

6) 大部分的 RNA 可立即溶解，可以在室温放置 15 min，并用吸头不时的上下吹打液体，以促进 RNA 的溶解。如果 RNA 的浓度很高，可以在 4℃ 放置过夜，以促进其完全溶解。

7) 定量时，将 1ul RNA 溶液稀释到 500ul 水中，测量其 OD₂₆₀ 值

8) 如果样品被过分稀释了，可以像水溶的 RNA 样品一样进行乙醇沉淀浓缩，加水溶解后使用。

注意事项

1. 当使用 CsCl 法进行 RNA 的提取时，更应注意 RNA 多余盐分的去除。

2. 操作方法第4)步中，RNA 不要过分干燥。

3. 测量 RNA 的 OD 值时，应在空内对照中加入 1ul 甲酰胺，以消除 RNA 产物中由于甲酰胺的加入而带来的可能的背景，

常见问题

测量 RNA 的 OD 值时，应在空内对照中加入 1ul 甲酰胺，以消除 RNA 产物中由于甲酰胺的加入而带来的可能的背景，

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