掌握植物根系伤流液中氨基酸总量测定的原理和方法。

操作方法

植物根系伤流液中氨基酸总量的测定实验

原理

氨基酸与水合茚三酮作用后，能产生二酮茚－二酮茚胺的取代盐等蓝紫色化合物，其颜色的深浅与氨基酸的含量成比例。测定反应产物在520nm波长处的吸光度值 ，即可计算出样品中氨基酸的含量。

材料与仪器

根系伤流液
95﹪乙醇 谷基酸氮标准母液 水合茚三酮
分光光度计 加热设备 试管 试管架 移液管 洗耳球

步骤

一、材料仪器设备及试剂

1.材料：根系伤流液。

2.仪器设备：分光光度计，加热设备，试管，试管架，移液管，洗耳球。

3.试剂及配制：95﹪乙醇。

50μg· ml－1谷基酸氮标准母液：准确称取谷氨酸52.52 mg ，溶于100 ml 10﹪异丙醇溶液中。

3﹪水合茚三酮：称取水合茚三酮3g, 溶于100 ml 95﹪乙醇中。

二、实验步骤

1. 谷氨酸氮标准曲线制作

（1）取6支试管，编号，按下表配制每管含量为0～25μg的谷氨酸氮标准液。

加入表中试剂后，摇匀，置于沸水浴中准确加热10min，溶液变为蓝色，表示有氨基酸存在，取出后各管立即加入5 ml 95％乙醇，摇匀，冷却后以0号管溶液作空白对照，于520nm波长下测定吸光度（A）值。

（2）标准曲线绘制

以1～5号管谷氨酸氮含量为横坐标，吸光度（A）值为纵坐标，绘制标准曲线。

2. 伤流液中氨基酸含量的测定

取3支试管（三个重复），编号，各加入伤流液0.5 ml，蒸馏水1 ml，3﹪水合茚三酮溶液0.5 ml，摇匀，置于沸水浴中准确加热10min后，取出各管立即加入5 ml 95％乙醇，摇匀，冷却后以标准曲线0号管溶液作空白对照，于520nm波长下测定吸光度（A）值。

三、结果计算

根据样品管的吸光度值，从标准曲线上查出相应的谷氨酸氮含量，三个重复求平均值代入下列公式计算伤流液中氨基酸含量。

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