本实验来源「实用流式细胞术彩色图谱」 王书奎、周振英主编。

操作方法

新鲜实体组织样本的制备（酶消化法）

原理

对实体组织分散的作用原理主要有3个方面：① 可以破坏组织间的胶原纤维、弹性纤维等；② 可以水解组织间的黏多糖等物质；③ 可以水解组织细胞间的紧密联结装置的蛋白质物质。

材料与仪器

组织 酶
试管 离心管 尼龙网

步骤

1. 将适合于酶消化的组织置于离心管中。

2. 将选好的酶溶掖 1~2 ml 加入盛有被消化组织的试管中。

3. 一般消化 20~30 min ( 恒温 37℃ 或室温)，消化期间要间断振荡或吹打。

4. 终止消化，收集细胞悬液，以 300 日尼龙网过滤，除去细胞团块，以低速离心除去细胞部片。

5. 将制备好的单细胞悬液进行荧光染色后上机检测，或保存备用。

注意事项

1. 酶需要溶解于适当的酶液中，而这些溶液不至于造成酶效价降低。

2. 要注意酶的使用浓度和消化时间。

3. 要注意酶活性的 pH 值，胃蛋白酶在碱性环境中会失去活性，而胰蛋白酶在中性溶剂中活性不佳。

4. 要随时注意影响酶活性的其他因素，如酶的生产批号等。

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