病毒RNA提取可以：

（1）用于RNA病毒复制机制研究；（2）用于反向遗传学研究；

（3）用于分子病毒学其他研究。

操作方法

TE-饱和酚/氯仿提取法

原理

大多植物病毒RNA 为单链RNA ，并且其极性与mRNA 极性相同，植物病毒RNA 提取较为简单，一般使用酚氯仿即可获得满意结果。

材料与仪器

TMV病毒液
TE-饱和酚:氯仿 氯仿 NaAc 乙醇 TE缓冲液 双菌水
冷冻台式离心机 低温真空干燥仪 电泳仪 电泳槽

步骤

一、实验材料准备

1.  材料
  提纯TMV病毒液（10 mg/ml）。
  2.  设备
  冷冻台式离心机，低温真空干燥仪，电泳仪，电泳槽。
  3.  试剂
  TE-饱和酚:氯仿（1:1），氯仿，3 M NaAc(pH5.2)，乙醇(100%和70%)，TE缓冲液，无RNA 酶的双菌水。
 二、操作步骤
  1.  取一eppendorf管加入提纯TMV（10 mg/ml)400 ml，再加入等体积酚/氯仿，盖紧管盖后用手充分振荡1分钟，4℃下12 000 g离心10分钟。
  2.  吸取水相于一新eppendorf管，再用酚/氯仿抽提，直至水相和有机相交界面无蛋白为止。
  3.  吸取水相于新eppendorf心管，加入等体积氯仿，用手倒置离心管数十秒，4℃下12 000 g离心10分钟。
  4.  取水相，加入1/10倍体积的3 mol/L NaAc(pH5.2)，2.5倍体积的冰冷乙醇，混匀，-20℃30分钟。
  5.  4℃下12 000 g离心15分钟，小心弃去上清液，用70%乙醇洗涤沉淀，4℃下12 000 g离心5分钟。
  6.  小心弃去上清液，沉淀真空干燥5分钟或空气干燥10分钟，并溶于无RNA 酶的双菌水或TE缓冲液中。
  7.  取10 ml进行电泳分析。

注意事项

1.  整个操作应尽可能在低温下进行。

2.  由于病毒RNA 镶嵌于外壳蛋白里面，因此要充分剥去病毒外壳蛋白，一般需要多次进行酚/氯仿的抽提。

如需了解更多产品详情，请前往阿拉丁官网查询。

https://www.aladdin-e.com