在非选择性生长条件下，大多数大肠杆菌/酵母菌穿梭载体的丟失频率大约1%，采用本方案不易分离除去的一个质粒是内源性2 μm 质粒，2 μm DNA自发丢失的频率约为每代10-4。

操作方法

基本方案

材料与仪器

酵母
YPD
接种针 培养瓶 摇床

步骤

1.  挑取几个含质粒的酵母宿主菌菌落，接种于10 ml 非选择性培养基，于30℃培养过夜。   2.  在非选择性平板上于30℃培养2天以得到单菌落，大多数情况下，可以得到约200~300个单菌落（约每平板100个菌落）。 
3.  通过影印到选择性平板上以确定丢失了质粒选择标志的菌落，于30℃培养过夜，那些可在主平板上生长的但不能在选择性平板上生长的菌落丢失了质粒。

注意事项

如果没有其他的选择，可以用YPD培养基，如果要保留其他不稳定遗传标志或质粒，可以用添加了与可能丢失的选择标志相应的营养成分的确定成分培养基。

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