HiFi Hotstart PCR Mix

Name: HiFi Hotstart PCR Mix
SKU: FP1508888
Availability: InStock

概述规格名称和识别符技术文档高级数据质检证书（CoA,COO,BSE/TSE 和分析图谱) 技术文档和文章溶液计算器常见问题

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为什么选择此级别

BioReagent,for DNA and RNA applications,PCR试剂,UltraBio™,分子生物学级,无DNA酶和RNA酶级，适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。

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储存与运输

-20°C储存,避免反复冻融。超低温运输。请查阅批次 COA 获取详细规格。

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质量文档

SDS、COA、产品数据表及规格说明书均可下载。可通过批号查询获取批次 COA。

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文献证明

在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。

概述

HiFi Hotstart PCR Mix中的核心酶HiFi Seq Hotstart DNA polymerase是通过基因工程改造的工程酶，在无需辅助蛋白及额外的DNA结合功能域的条件下提高了对DNA模板的亲和力。相比于其他野生型的B族DNA聚合酶，该酶强大的持续合成能力能够显著的提高扩增产物量、扩增速率以及灵敏度，同时长片段模版和复杂结构模板（如：高AT或者高GC模板）的扩增能力也有明显的提高。
此外，Hotstart DNA polymerase有5’→3’聚合酶活性和3’→5’外切酶活性（校对活性），无5’→3’外切酶活性。强大的3’→5’外切酶活性保证了DNA扩增过程中的准确率，其保真性是野生型Taq DNA聚合酶的100倍，是其他B族DNA聚合酶的10倍。
本试剂盒提供了简便、灵敏的PCR反应系统，可对低至1ng起始模板进行富集。核心试剂包含HiFi Seq Hotstart DNA polymerase (1U/50 μl)、经过优化的缓冲液、dNTPs和MgCl₂等，使用者只需加入适量的引物和模板，即可进行PCR反应。

HiFi Hotstart PCR Mix 适用于 NGS DNA 文库的富集、基因表达克隆、基因定点突变、细胞内基因点突变的分析。

产品号	组分	24T	96T	存储温度
FP1508888	HiFi Hotstart PCR Mix	600 μL	4×600 μL	-20℃

自备材料
仪器：PCR 板、PCR 仪、涡旋仪、微型离心机；
试剂：Primer Pair、无核酸酶水；
耗材：移液枪头、0.2 ml PCR 管

使用说明

PCR 扩增操作流程
1、提前取出 HiFi Hotstart PCR Mix 置于冰上融化，如果有沉淀析出，请彻底混匀溶解后使用。
2、按照下表配制 PCR 体系，注意此步骤需于冰上操作。

组分	体积/50 μl 反应
HiFi Hotstart PCR Mix	25 μl
Primer Pair (each 5 μM)	2~5 μl
DNA 模板	x
无核酸酶水	Up to 50 μl

注意：
1）反应体系可以设置在 10~50 μl 之间，Mix 使用量可以按照比例调整，不推荐使用>50 μl 体系；
2）50 μl 反应体系中，每个反应包含 2.5 mM Mg²⁺ ，0.2 mM dNTP和 1U HiFi Seq Hotstart DNApolymerase；如体系需要更高浓度的Mg²⁺ 和 dNTP ，可根据实际情况额外添加；
3）在初次测试时，50 μl 反应体系建议基因组模板使用量为10~100ng。

3、使用移液器轻轻吹打混匀，并短暂离心将反应液收集至管底。
4. 将上述 PCR 管置于 PCR 仪，开启热盖，温度设置为 105 ℃，运行以下程序：

注：
1）预变性时间 95 ℃ 3 min 对于常规模板是足够的，对于GC≧70%模板建议将预变性时间延长至 5 min；
2）体系中高盐离子浓度会影响 DNA 溶解，为保证复杂 GC 模板能够完全变性，建议将变性温度调整到 98 ℃。高盐 buffer 同时也会影响引物的退火，优化后的退火温度要略高于常规的 PCR 体系，初次反应建议使用 56 ℃为退火温度，若反应不理想,则可以每调整 3℃测试一次的方法来确定最适的退火温度；
3）两步法扩增程序，建议退火/延伸范围 65~68℃，延伸时间按30~60 sec/kb 计算；
4）常规条件下目的片段≦1 kb，延伸时间按 15 sec/kb 计算，当目的片段>1 kb，或者要提高产物量，延伸时间按 30 sec/kb 计算；
5）为获得较高的保真性，建议扩增循环数≦25 cycles，扩增循环数越高，错配率越高。

The HiFi Hotstart PCR Mix features an engineered HiFi Seq Hotstart DNA polymerase that significantly enhances DNA template affinity without requiring auxiliary proteins or additional DNA-binding domains. Compared to wild-type B-family DNA polymerases, this enzyme demonstrates:
✔ Superior processivity: Higher amplicon yield, faster amplification speed, and enhanced sensitivity
✔ Robust performance: Efficient amplification of long fragments (≥15 kb) and complex templates (e.g., high-AT/GC content)
✔ Proofreading activity: Powerful 3’→5’ exonuclease function (error rate 100× lower than wild-type Taq, 10× lower than other B-family polymerases)
✔ Minimal side activity: 5’→3’ polymerase activity with no 5’→3’ exonuclease activity

The kit provides an optimized system for sensitive PCR amplification (down to 1 ng template) and includes:

HiFi Seq Hotstart DNA polymerase (1 U/50 μL)
Pre-optimized buffer
dNTPs
MgCl₂

Simply add primers and template for high-fidelity amplification.

Catalog	Component	24T	96T	Storage
FP1508888	HiFi Hotstart PCR Mix	600 μL	4×600 μL	-20℃

Applications:

NGS DNA library enrichment
Gene expression cloning
Site-directed mutagenesis
Intracellular gene mutation analysis

User-Supplied Materials

Instruments: PCR plates, thermal cycler, vortex mixer, microcentrifuge
Reagents: Primer pair (5 μM each), nuclease-free water
Consumables: Pipette tips, 0.2 mL PCR tubes

Protocol

I. Reaction Setup

Thaw HiFi Hotstart PCR Mix on ice. Vortex thoroughly if precipitates are visible.
Prepare the reaction mix on ice as follows:

Component	Volume per 50 μL Reaction
HiFi Hotstart PCR Mix	25 μl
Primer Pair (each 5 μM)	2~5 μl
DNA Template	x
Nuclease-free water	Up to 50 μl

Notes:
Total volume: 10–50 μL (scale mix proportionally; >50 μL not recommended).
Default concentrations: 2.5 mM Mg²⁺, 0.2 mM dNTPs, 1 U polymerase. Adjust Mg²⁺/dNTPs if needed.
For initial testing: Use 10–100 ng genomic DNA per 50 μL reaction.

3. Mix gently by pipetting; centrifuge briefly.

II. Thermal Cycling

Optimization Notes:
* Pre-denaturation:

Standard: 3 min at 95°C
For GC-rich templates (≥70% GC): Extend to 5 min or use 98°C.

** Annealing Temperature:

Start at 56°C (higher than conventional PCR due to optimized buffer).
Adjust in 3°C increments if amplification fails.

*** Extension Time:

≤1 kb: 15 sec/kb
>1 kb or higher yield needed: 30–60 sec/kb
Two-step PCR: Combine annealing/extension at 65–68°C.

**** Cycle Number:

≤25 cycles recommended for highest fidelity (more cycles increase error rates).

规格

规格或纯度

BioReagent,无DNA酶和RNA酶,PCR试剂,UltraBio™,分子生物学级,for DNA and RNA applications,25μL/T

稳定性与储存

Store at -20℃ long term (12 months). Avoid freeze/thaw cycle. Upon receipt, it is recommended to aliquot.

英文名称

HiFi Hotstart PCR Mix

储存条件

-20°C储存,避免反复冻融

运输条件

超低温运输

产品线

生物产品

名称和识别符

分子类型

生物试剂/缓冲液

技术文档

📋 安全数据表 (SDS)

全面的危险、操作、储存及法规合规文件。

下载 SDS →

✅ 分析证书 (COA)

批次质量数据。输入批号以获取对应 COA。

查询 COA →

📊 产品数据表

产品规格和应用的快速参考摘要。

查看数据表 →

🔬 规格说明书

该级别的完整质量属性和验收标准。

查看规格说明 →

高级数据

质检证书（CoA,COO,BSE/TSE 和分析图谱)

C of A & Other Certificates(BSE/TSE, COO):

输入批号以搜索分析图谱:

通过匹配包装上的批号来查找并下载产品的 COA，每批产品都进行了严格的验证，您可放心使用！

找到2个结果

批号(Lot Number)	证书类型	货号
ZJ26F0333672	分析证书	FP1508888
ZJ26F0333673	分析证书	FP1508888

技术文档和文章

fp1508888 hifi hotstart pcr mix 中文说明书.pdf

fp1508888 hifi hotstart pcr mix manual.pdf

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溶液计算器

摩尔浓度计算器

计算溶液所需的质量、体积或浓度。

质量

浓度

体积

分子量

g/mol

稀释计算器

计算配制储备溶液所需的稀释度。

浓度1（C1）

体积 1 (V1)

浓度 2 (C2)

体积 2 (V2)

复溶计算器

复溶计算器允许您快速计算试剂的体积，以复溶小瓶。只需输入试剂的质量和目标浓度，计算器将确定其余部分。

体积（添加到小瓶中）

质量（小瓶）

所需的复溶浓度

常见问题

什么是「BioReagent」？

「BioReagent」表示该产品经过加工和检测，适用于生物和生化应用。规格可能包括内毒素限值、微生物控制、无菌性、低 DNase/RNase/蛋白酶活性，以及在相关情况下的生物活性验证。

什么是「无DNA酶和RNA酶」？

「无DNA酶和RNA酶」表示该产品经过加工和检测，适用于敏感的核酸和蛋白质工作流程。典型规格包括：低或不可检测的核酸酶/蛋白酶活性、低内毒素、受控的微生物限度，以及高批间重现性。

本产品应如何储存？

请于?20 °C条件下保存。避免反复冻融。建议按单次用量分装保存。

本产品如何运输？

本产品采用保温箱配冰袋运输。收货后请立即拆包，并按上述储存条件保存。

如何获取批次专用COA？

每个订单都会随附分析证书（COA），您也可以从账户订单历史中下载。如需订购前的COA，请联系您的客户代表，或使用PDP上的"申请COA"按钮——我们将提供代表性批次的COA。

需要帮助选择级别？

我们的级别选择指南涵盖了目录中所有的变体的纯度、稳定剂状态和应用适用性。

查看 BioReagent 级别指南 → 查看 DNase, RNase free 级别指南 → 查看 PCR Reagent 级别指南 → 查看 UltraBio™ 级别指南 → 查看 Suitable for molecular biology 级别指南 → 查看 for DNA and RNA applications 级别指南 →

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HiFi Hotstart PCR Mix

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概述

User-Supplied Materials

Protocol

I. Reaction Setup

II. Thermal Cycling

规格

技术文档

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高级数据

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