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小鼠CD3/CD28 T细胞激活磁珠
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为什么选择此级别
，适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。
储存与运输
2-8°C储存,禁止冷冻。低温运输,禁止冷冻 。请查阅批次 COA 获取详细规格。
质量文档
SDS、COA、产品数据表及规格说明书均可下载。可通过批号查询获取批次 COA。
文献证明
在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。
概述
小鼠CD3/CD28 T细胞激活磁珠可以简单快捷的活化及扩增 T 细胞，无需饲养层细胞（抗原递呈细胞）和抗原。磁珠为直径5 µm的惰性超顺微球，同时共价偶联抗 CD3 和抗 CD28 抗体，模拟抗原呈递细胞的作用。细胞培养过程中可使用重组人IL-2 刺激 T 细胞扩增。细胞活化或扩增后，磁珠可以通过磁力架去除。
适用范围
小鼠脾细胞或 T 细胞亚群：包括CD3⁺ T 细胞、CD4⁺ T 细胞或CD8⁺ T 细胞。
实验试剂
1. 清洗 buffer
含有 2 mM EDTA 和 2% 胎牛血清（FBS）的 PBS，或者含有 2 mM EDTA 和 0.5% BSA 的 PBS，需预先通过 0.22 μm 滤膜过滤除菌。
2. 细胞培养基
RPMI1640 + 10% FBS + 50 μM β-巯基乙醇（可选加入 100 U/mL 青链霉素双抗）。当需要扩增 T 细胞时，向培养基内加入 30 U/mL 重组人 IL-2。此外，商品化 T 细胞培养基同样适用，培养基内添加的生长因子可根据实验要求进行调整。
注意事项
取用 T 细胞激活磁珠前彻底重悬磁珠（如涡旋 >30 秒，或置于旋转仪 5 分钟），吹打时避免产生气泡。
进行流式检测前，使用磁力架去除磁珠（可以通过轻柔吹打释放结合在细胞上的磁珠），收集上清液，进行下一步的流式检测。
操作流程（以分选后小鼠 CD3⁺ T 细胞为例）：
1. 清洗磁珠
a. 彻底重悬试管中的磁珠（如涡旋 >30 秒，或置于旋转仪 5 分钟）。
b. 吸取目标体积的磁珠至流式管中，加入同等体积的清洗 Buffer。若使用的磁珠体积不足 1 mL，添加 1 mL 的清洗 Buffer，涡旋 5 秒，或使用移液器吹打混匀，注意避免产生气泡（此处也可直接使用细胞培养基清洗）。
c. 将流式管置于磁力架上 3 分钟，弃上清。
d. 重复步骤 b‑c，本次使用细胞培养基对磁珠再次清洗。共清洗磁珠两次。
e. 使用细胞培养基重悬磁珠（例如：吸取 25 μL 磁珠进行清洗，25 μL 磁珠可用于 96 孔板的 10 个孔进行 T 细胞激活实验。清洗后用 1 mL 细胞培养基进行重悬，进行细胞激活时，每 100 μL 磁珠悬液加至 96 孔板的一个孔中）。
2. 小鼠 T 细胞的激活（以 96 孔板为例）
a. 调整 T 细胞浓度为 1×10⁷ cells/mL，每孔中加入 25 μL 细胞悬液，此时孔内含有 2.5×10⁵ 个 T 细胞，再向孔内添加 75 μL 细胞培养基，保持孔内总体积为 100 μL。
b. 向孔中加入 100 μL 清洗后重悬的磁珠，此时磁珠和细胞的数量比例为 1:1，孔内液体总体积为 200 μL。使用移液枪轻轻吹打混匀孔内的磁珠和细胞。
c. 将细胞培养板置于 37℃、5% CO₂ 培养箱中培养，根据实验需要决定细胞的培养时长。
d. 激活 24 小时至 48 小时内，收获激活的 T 细胞，用于下游实验分析。
3. 小鼠 T 细胞的扩增
a. 按照以上步骤激活 T 细胞，在加入磁珠的 48 小时检测 T 细胞的激活情况。细胞状态良好时，对细胞进行轻柔吹打、传代（若细胞增殖较慢，可对细胞半量换液：小心吸弃 100 μL 上清液，再向孔内添加 100 μL 新鲜细胞培养基，轻柔吹打混匀细胞，继续培养 1‑2 天后传代），最后向孔内添加 30 U/mL 的重组人 IL‑2。
b. 细胞与磁珠置于 37℃、5% CO₂ 培养箱中培养，根据实验需要决定细胞的培养时长。
c. 每日或每隔两日查看细胞扩增情况。小鼠 T 细胞扩增形态表现为镜下可见的增殖聚团，正常情况下 T 细胞在激活后第 4‑12 天表现出较快的增殖速度。当细胞皱缩或增殖速度明显放慢时，提示细胞可能耗竭。
注意：在细胞激活的 48 小时内不要处理细胞，也无需添加重组人 IL‑2。2 天后随时观察细胞状态，当培养基变黄或孔内细胞数量过多时换液或传代，并添加重组人 IL‑2。每次换液或传代后，及时补充重组人 IL‑2 至 30 U/mL。（推荐定期进行细胞计数，当细胞密度超过 2.5×10⁶ cells/mL 时，轻柔吹打混匀，将细胞密度调整为 0.5‑1×10⁶ cells/mL。）
激活效果
使用小鼠 CD3/CD28 T 细胞激活磁珠，刺激 CD3⁺ T 细胞 48 小时，用 FITC anti-mouse CD69 抗体（克隆号 H1.2F3）和 PE anti-mouse CD25 抗体（克隆号 PC61）标记后进行流式细胞仪分析。刺激前后 CD25⁺ CD69⁺ T 细胞占总 T 细胞的比例分别为 0.30% 和 86.69%。
Mouse CD3/CD28 T Cell Activation Beads provide a simple and rapid method for activating and expanding T cells without the need for feeder cells (antigen‑presenting cells) or antigens. The beads are inert, superparamagnetic microspheres of 5 µm diameter, covalently coupled with anti‑CD3 and anti‑CD28 antibodies to mimic the function of antigen‑presenting cells. During cell culture, recombinant human IL‑2 can be used to stimulate T cell expansion. After activation or expansion, the beads can be removed using a magnetic separator.
Applications
Mouse splenocytes or T cell subsets, including CD3⁺ T cells, CD4⁺ T cells, or CD8⁺ T cells.
Experimental Reagents
Washing Buffer
PBS containing 2 mM EDTA and 2% fetal bovine serum (FBS), or PBS containing 2 mM EDTA and 0.5% BSA. The buffer must be pre‑filtered through a 0.22 μm filter.
Cell Culture Medium
RPMI1640 + 10% FBS + 50 μM β‑mercaptoethanol (100 U/mL penicillin‑streptomycin may be added optionally). When T cell expansion is required, add 30 U/mL recombinant human IL‑2 to the medium. Commercial T cell culture media are also suitable, and growth factors added to the medium can be adjusted according to experimental requirements.
Precautions
1. Thoroughly resuspend the T cell activation beads before use (e.g., vortex for >30 seconds or place on a rotator for 5 minutes). Avoid generating bubbles during pipetting.
2. Before flow cytometry analysis, remove the beads using a magnetic separator (gently pipetting can release beads bound to cells), collect the supernatant, and proceed with flow cytometry.
Protocol (Using Purified Mouse CD3⁺ T Cells as an Example)
1. Washing the Beads
a. Thoroughly resuspend the beads in the tube (e.g., vortex for >30 seconds or place on a rotator for 5 minutes).
b. Transfer the required volume of beads to a FACS tube and add an equal volume of Washing Buffer. If the bead volume is less than 1 mL, add 1 mL of Washing Buffer, vortex for 5 seconds, or mix by pipetting (avoid bubbles). Cell culture medium can also be used directly for washing.
c. Place the FACS tube on a magnetic separator for 3 minutes and discard the supernatant.
d. Repeat steps b‑c, this time washing the beads with cell culture medium. Wash the beads twice in total.
e. Resuspend the beads in cell culture medium (for example: take 25 μL of beads for washing; 25 μL of beads can be used for 10 wells of a 96‑well plate for T cell activation. After washing, resuspend in 1 mL of cell culture medium. For cell activation, add 100 μL of bead suspension per well of a 96‑well plate).
2. Activation of Mouse T Cells (Using a 96‑Well Plate as an Example)
a. Adjust the T cell concentration to 1×10⁷ cells/mL. Add 25 μL of cell suspension per well, giving 2.5×10⁵ T cells per well. Then add 75 μL of cell culture medium to bring the total volume to 100 μL per well.
b. Add 100 μL of washed and resuspended beads to each well, resulting in a bead‑to‑cell ratio of 1:1 and a total volume of 200 μL per well. Gently pipette to mix the beads and cells.
c. Place the cell culture plate in a 37°C, 5% CO₂ incubator. Culture for the desired length of time according to the experimental needs.
d. Harvest activated T cells within 24‑48 hours of activation for downstream analysis.
3. Expansion of Mouse T Cells
a. Activate T cells as described above. Check T cell activation 48 hours after adding the beads. When cells are in good condition, gently pipette and subculture (if cell proliferation is slow, perform a half‑medium change: carefully remove 100 μL of supernatant and add 100 μL of fresh culture medium, gently mix, continue culturing for 1‑2 days, then subculture). Finally, add recombinant human IL‑2 to a final concentration of 30 U/mL.
b. Culture the cells and beads in a 37°C, 5% CO₂ incubator for the desired length of time.
c. Check cell expansion daily or every two days. Mouse T cell expansion is characterized by visible proliferating clusters under the microscope. Under normal conditions, T cells proliferate rapidly between days 4 and 12 after activation. When cells shrink or proliferation slows significantly, it may indicate exhaustion.
Note: Do not disturb the cells or add recombinant human IL‑2 within the first 48 hours of activation. After 2 days, monitor cell status regularly. Change medium or subculture when the medium turns yellow or the cell density becomes too high, and add recombinant human IL‑2. After each medium change or subculture, replenish recombinant human IL‑2 to 30 U/mL. (It is recommended to count cells regularly. When the cell density exceeds 2.5×10⁶ cells/mL, gently pipette and adjust the density to 0.5‑1×10⁶ cells/mL.)
Activation Performance
CD3⁺ T cells were stimulated with Mouse CD3/CD28 T Cell Activation Beads for 48 hours. Cells were stained with FITC anti‑mouse CD69 antibody (clone H1.2F3) and PE anti‑mouse CD25 antibody (clone PC61) and analyzed by flow cytometry. The proportion of CD25⁺ CD69⁺ T cells among total T cells before and after stimulation was 0.30% and 86.69%, respectively.
规格
别名
小鼠T细胞激活磁珠（CD3/CD28）
英文别名
Mouse CD3/CD28 T Cell Activator
规格或纯度
1×10⁸ beads/mL
稳定性与储存
Store at 2-8℃ long term (12 months). Do not freeze.
英文名称
Mouse CD3/CD28 T Cell Activation Magnetic Beads
储存条件
2-8°C储存,禁止冷冻
运输条件
低温运输,禁止冷冻
产品线
生物产品
名称和识别符
分子类型
生物试剂/缓冲液
技术文档
高级数据
质检证书（CoA,COO,BSE/TSE 和分析图谱)
C of A & Other Certificates(BSE/TSE, COO):
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| 批号(Lot Number) | 证书类型 | 货号 |
|---|---|---|
 ZJ26F0737978 |
分析证书 | M1522427 |
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