植物丙二醛 (MDA) 含量检测试剂盒(TBA, 比色法)

货号: P1508323
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级别和纯度: BioReagent ? 生物试剂级(BioReagent)—— 经测试适用于生命科学和分子生物学。适用于需要生物相容性的细胞培养、检测和生化工作。
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BioReagent 级 ,适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。

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储存与运输

避光,室温,-20°C储存。超低温运输 。请查阅批次 COA 获取详细规格。

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质量文档

SDS、COA、产品数据表及规格说明书均可下载。可通过批号查询获取批次 COA。

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文献证明

在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。

概述

动物或植物细胞发生氧化应激 (oxidative stress) 时,会发生脂质氧化。丙二醛 (Malondialdehyde, MDA) 是一种生物体脂质氧化的天然产物,一些脂肪酸氧化后逐渐分解为一系列包括MDA在内的复杂化合物,此时通过检测MDA的水平即可检测脂质氧化的水平,因此MDA的测定被广泛用作脂质氧化的指标。生物体内的一些其它生化反应也会产生MDA,例如 Thromboxane synthase 也可以催化产生,但只要在测定时设置适当对照即可观察到脂质氧化水平的变化。

植物丙二醛 (MDA) 检测试剂盒 (Plant MDA Assay Kit with TBA) 又称脂质氧化 (MDA) 检测试剂盒,是采用一种基于MDA和硫代巴比妥酸 (Thiobarbituric acid, TBA) 应产生红色产物的显色反应,随后通过比色法用于对植物组织 (根、茎、叶、种子等) MDA进行检测,是专门用于植物脂质氧化 (Lipid peroxidation) 水平检测的试剂盒,不适用于动物组织、细胞、血液等;丙二醛在较高温度及酸性环境中可与TBA发生反应,形成红色的MDA-TBA加合物,MDA-TBA加合物在532nm处有最大吸收,该复合物的吸光系数为155mmol/(L.cm),并且在600nm波长处有最小吸收,植物组织中糖类物质对MDA-TBA反应有干扰,我们总结出经验公式,以消除这一干扰,亦可以通过比标准品进行比较,进行含量检测。该试剂盒仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途。

组分与储存:

组分货号组分名称物理外观50T100T储存
P1508323A组织匀浆液液体250 mL500 mLRT. Store in the dark.
P1508323BTBA
粉末0.35 g0.7 gRT. Store in the dark.
P1508323C抗氧化剂液体0.5 mL1 mL-20℃. Store in the dark.
P1508323DMDA标准品 (1mmol/L)液体0.5 mL1 mL-20℃. Store in the dark.

自备材料:

1. 植物根茎、叶子等

2. 剪刀、离心管、小试管或96孔板、分光光度计或酶标仪、水浴锅或恒温箱、离心机

操作步骤(仅供参考):

1. 样本处理:

① 制备MDA提取液:取适量的植物根、茎、叶子、种子等,称量后剪碎,按每0.4g植物样品加入4ml的比例加入组织匀浆液,充分匀浆 (一般取0.4~1g植物样品即可)。4000g离心10min,取上清液待用,该上清液即为MDA提取液;如果采用酶标仪检测结果,应相应减少制备提取液的量,譬如取0.2g植物样品加入2ml组织匀浆液。

② 样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度,以便于后续计算单位蛋白重量植物样品的MDA含量;测定蛋白浓度非必须步骤,亦可采用经验公式计算。

③ 该试剂盒对于样品中的常见化学成分的兼容性参考下表:下面这个表格未作修改,和之前一样的

试剂类别化学成分是否干扰
缓冲液HEPES (100mM)否
缓冲液Borate (50mM)否
缓冲液Phosphate (100mM)否
缓冲液Tris (25mM)否
去垢剂CHAPS (≤1%)否
去垢剂Triton X-100 (≤1%)否
去垢剂Tween 20 (≤1%)否
抑制剂/螯合剂PMSF (≤200μM)否
抑制剂/螯合剂EDTA (≤1mM)否
抑制剂/螯合剂EGTA (≤1mM)否
抑制剂/螯合剂Antipain (≤100μg/ml)否
抑制剂/螯合剂Chymostatin (≤10μg/ml)否
抑制剂/螯合剂Leupeptin (≤10μg/ml)否
抑制剂/螯合剂Trypsin (≤10μg/ml)否
其他Glycerol (≤10%)否
其他Sucrose (250mM)是

2. 配制TBA工作液:称取适量TBA,用组织匀浆液配制成浓度为0.68%的TBA工作液,例如取0.068g TBA用10ml组织匀浆液配制,最终浓度即为0.68%的TBA工作液。TBA工作液需完全溶解后再使用,可以加热到60℃促溶,并可通过反复剧烈Vortex促溶;配制好的TBA工作液4℃避光保存,至少1个月内有效。

3. 稀释标准品:如果进行简易快速检测,标准品直接稀释至10μM;如果进行精确检测,取适量标准品用组织匀浆液稀释至1、2、5、10、20、50μM;如果采用经验公式计算含量,无需标准品;配制好的MDA标准品4℃避光保存,至少3个月内有效。

4. 样品测定:

① 分光光度计测定:在离心管或其它适当容器内加入1ml组织匀浆液作为空白对照,加入1ml MDA提取液用于测定,随后加入1ml TBA工作液。可参考下表设置检测反应体系,依次加入试剂:

加入物质(ml)空白管标准管测定管
组织匀浆液1--
标准品 (可选步骤)-1-
MDA提取液--1
抗氧化剂0.0050.0050.005
TBA工作液111

② 酶标仪测定:在离心管或其它适当容器内加入200μl组织匀浆液作为空白对照,加入200μl MDA提取液用于测定,随后加入200μl TBA工作液。可参考上表设置检测反应体系,依次加入试剂 (抗氧化剂加入1μl)。

③ 混匀,加盖,95℃水浴30min,加热时务必注意避免液体暴沸溅出。如果使用加热块 (Heat block) 进行加热注意用重物压紧离心管盖;如果使用沸水浴,则需使用可把盖子锁死的离心管或螺旋盖离心管或用Parafilm封住离心管口,用针头刺一小孔。最方便和准确的加热方法是使用带有热盖并可以加热的金属浴或者0.5ml PCR仪。

④ 冷水浴或流水冷却至室温,4000g离心10min。

⑤ 取上清,蒸馏水调零,用分光光度计或酶标仪测定532nm处吸光度,如果不方便也可以测定530~540nm之间的吸光度,分别记为A空白、A标准、A测定;如果采用经验公式计算,应分别测定空白管和测定管于450nm、532nm、600nm处的吸光度,分别记为A450-B、A532-B、A600-B、A450-T、A532-T、A600-T。

计算:

如果进行简易快速检测,直接以10μM标准品进行计算,获得MDA的摩尔浓度;如果采用经验公式,无需制作标准曲线或测定标准品;如果需要精确计算,以MDA标准品浓度为横坐标,以对应的吸光度为纵坐标,制作标准曲线,根据标准曲线计算处MDA提取液的浓度;对于固体状组织,可以通过单位重量的蛋白含量或组织重量等来表示最初样品中的MDA含量,例如μmol/g蛋白或μmol/g组织。

简易快速MDA含量计算公式:

MDA含量 (μmol/g 蛋白)=(A测定-A空白)/(A标准-A空白)×标准品浓度/蛋白质质量浓度

式中:

A测定=待测样品的532nm处吸光度 

A标准=标准品的532nm处吸光度 

A空白=空白对照的532nm处吸光度

标准品浓度=10μmol/L

蛋白质质量浓度 (mg/ml=g/L)=BCA法测定的蛋白浓度 (mg/ml)

不采用标准品的经验公式:

MDA浓度 (μmol/L)=6.45×(A₅₃₂-A₆₀₀)-0.56×A₄₅₀

MDA含量 (μmol/g 组织)=MDA浓度(μmol/L)×MDA提取液体积(L)/植物组织鲜重(g)

式中:

A₅₃₂=A532-T-A532-B 

A₆₀₀=A600-T-A600-B 

A₄₅₀=A450-T-A450-B

注意事项:

1. 待测样品应尽量新鲜,提取后及时检测,如不能及时测定,应置于-20℃保存,4天内稳定。

2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

3. 试剂开封后请尽快使用,以防影响后续实验效果。

 

规格

别名
丙二醛(MDA)试剂盒 | 脂质氧化(MDA)检测试剂盒
英文别名
Lipid Peroxidation MDA Assay Kit | Plant MDA Assay Kit with TBA
规格或纯度
BioReagent
英文名称
Plant Malondialdehyde (MDA) Content Assay Kit (TBA, Colorimetric Method)
应用
细胞代谢
样品类型
植物组织
检测方法
分光光度法
定量&半定量
定量
检测仪器
酶标仪,紫外-可见光分光光度计
检测波长
532nm
敏感性
Light-sensitive
储存与运输
储存条件
避光,室温,-20°C储存
运输条件
超低温运输
稳定性与储存
整套试剂盒未拆封时于‑20°C 避光保存,自生产之日起有效期 1 年;拆封后各组分稳定性不同,部分组分可转至 2‑8°C 保存(有效期仍为 1 年),其余需继续冷冻。请严格按照组分表标注温度分类存放,保障试剂性能;使用前将试剂平衡至室温,尽量避免反复冻融。
组分与储存
P1508323
组分名称50T100T储存
P1508323A
组织匀浆液250 mL500 mLRT. Store in the dark.
P1508323B
TBA0.35 g0.7 gRT. Store in the dark.
P1508323C
抗氧化剂0.5 mL1 mL-20℃. Store in the dark.
P1508323D
MDA标准品 (1mmol/L) 0.5 mL
1 mL
-20℃. Store in the dark.

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