pA-Tn5 转座酶

货号: P745696
有货
级别和纯度: 无动物源 ? 无动物源(Animal Free)—— 不含动物源成分生产,降低污染风险。适用于避免动物源材料的生物制造和培养。 无载体 ? 无载体(Carrier Free)—— 不含添加的载体蛋白/稳定剂。当载体(如 BSA)会干扰偶联或敏感检测时使用。 EnzymoPure™ ? EnzymoPure™ —— 阿拉丁的高质量酶解决方案系列。当酶纯度和明确活性决定检测或工艺性能时使用。 无菌 ? 无菌级 —— 经处理并验证无活微生物。可直接用于无菌操作和细胞培养,无需再灭菌。 ≥95%(SDS-PAGE) 40μM
Accession #
Q46731
表达系统
E. coli
★
规格
库存
价格
数量
800pmol
P745696-800pmol
现货 Stock Image
¥2,099.90
5×800pmol
P745696-5×800pmol
现货 Stock Image
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为什么选择此级别

EnzymoPure™,无动物源,无菌,无载体 级 提供 ≥95%(SDS-PAGE) 纯度,适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。

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储存与运输

-20°C储存,避免反复冻融。超低温运输 。请查阅批次 COA 获取详细规格。

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质量文档

SDS、COA、产品数据表及规格说明书均可下载。可通过批号查询获取批次 COA。

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文献证明

在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。

概述

本公司生产的 pA-Tn5 Transposase ,中文名为 pA-Tn5 转座酶,是一种来源于 E.coli,经过改造的具有极高活性 Tn5 转座酶突变体和 Protein A 的融合蛋白。pA-Tn5 转座酶在和适当测序接头(Adapters)组装后成为 pA-Tn5 Transposome (pA-Tn5 转座体),可用于 CUT&Tag 实验。CUT&Tag (Cleavage Under Targets and Tagmentation),即靶向剪切及标记,是一种新兴的蛋白质与 DNA 相互作用的研究方法,具有特异性强、背景噪音较低、灵敏度高、重复性较好、成本低等优点,被用来替代传统的 ChIP-Seq (Chromatin Immunoprecipitation-sequencing)方法。CUT&Tag 技术的核心是利用 pA/G-Tn5 Transposome 上的 Protein A 或 Protein G 具有与靶蛋白上结合的抗体特异性结合的能力,使 Tn5 转座体能通过 Protein A/G 及抗体与靶蛋白形成复合物,随后加入 Mg2+激活 Tn5 转座体的酶活性对靶蛋白结合的 DNA 进行切割实现靶向的 DNA 片段化(DNA Fragmentation),同时将其携带的测序接头连接到片段两端从而实现标记,后续通过 PCR 反应进行缺口填补,并借助双端标记 PCR 引物 (Dual-indexed PCR primers)扩增后,制备成适用于二代测序(Next generation sequencing, NGS)平台的 DNA 文库 。 

活性定义:超活性突变,高效快速反应

组分和说明 

P745696Component800pmol5*800pmolStorage
P745696pA-Tn5 Transposase (40μM) 20μl5*20μl-20℃. Avoid freeze/thaw cycle.

产品应用 

pA-Tn5 转座酶在和适当测序接头(Adapters)组装后成为 pA-Tn5 Transposome (pA-Tn5 转座体),可用于 CUT&Tag 实验。 

产品优势 

与野生型 Tn5 转座酶相比,插入效率至少提升 1000 倍,具有转座随机性好、稳定性高、插入位点易测序等特点。

使用说明 

构建 CUT&Tag 实验所需的 pA-Tn5 转座体。 

1.ME 和接头(Adapters)的序列。 

ME: 5'-[phos]CTGTCTCTTATACACATCT-3' 

Primer 1: 5'-TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAG-3' 

Primer 2: 5'-GTCTCGTGGGCTCGGAGATGTGTATAAGAGACAG-3' 

注:本接头序列参考 DNA Sample Preparation Kit,也可按照不同高通量测序的要求进行设计。 

2.制备 Adapter 1 和 Adapter 2。 

按照下表分别配制 Adapter 1 和 Adapter 2 退火反应体系。退火反应后 Adapter 1 或 Adapter 2 的终浓度为 200μM。  

Component Volume
Annealing Buffer for DNA Oligos (5X) 10μl
ME (500μM) 20μl
Primer-1 or 2 (500μM) 20μl
Total Reaction Volume 50μl

使用 PCR 仪按下表设置退火反应程序,反应结束即可获得 Adapter 1 和 Adapter 2。 

Step Temperature
195℃, 2min
295℃, 8s, -0.1℃ per cycle
3GOTO step 2700 cycles
44℃ forever

3.pA-Tn5 转座体的制备。 

按照下表,将 pA-Tn5 Transposase、Adapter 1 和 Adapter 2 按摩尔比 1:0.5:0.5 混合,吹打混匀,室温孵育 1 小时。

Component Volume
pA-Tn5 Transposase (40μM) 10μl
Adaptor 1 (200μM) 1μl
Adaptor 2 (200μM) 1μl

注意事项: 

(1)本产品含 50%甘油,-20℃保存不会冻结。须避免-80℃保存,否则会冻结, 反复冻融可能会降低本产品的酶活性。 

(2)本产品较为粘稠,吸取时注意取样量准确,加样后请注意充分吹打混匀,避免产生气泡。 

(3)本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。 

(4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。



规格

产品名称
pA-Tn5 转座酶
别名
EnzymoPure™ pA-Tn5 转座酶
规格或纯度
EnzymoPure™, 无动物源, 无载体, 无菌, ≥95%(SDS-PAGE), 40μM
表达系统
E. coli
种属
大肠杆菌(E.coli)
无载体
Yes
无动物源
Yes
来源
重组表达
分子类型
酶
产品线
biological_products
储存与运输
物理形态
液体
储存缓冲液
50mM HEPES, 100mM NaCl, 0.1mM EDTA, 1mM DTT, 0.1% Triton X-100, 50% (v/v) Glycerol, pH7.2
浓度
40μM
储存条件
-20°C储存,避免反复冻融
运输条件
超低温运输
稳定性与储存
长期储存-20℃(24个月);避免反复冻融。

技术文档

📋 安全数据表 (SDS)

全面的危险、操作、储存及法规合规文件。

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✅ 分析证书 (COA)

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📊 产品数据表

产品规格和应用的快速参考摘要。

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🔬 规格说明书

该级别的完整质量属性和验收标准。

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高级数据

质检证书(CoA,COO,BSE/TSE 和分析图谱)
C of A & Other Certificates(BSE/TSE, COO):
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找到1个结果

批号(Lot Number) 证书类型 货号
ZJ25F1029227 分析证书 P745696
技术文档和文章
溶液计算器

常见问题

本产品的纯度是多少?如何测定?
本产品的纯度为 ≥95%,采用SDS-PAGE测定。批次的具体数值以分析证书(COA)为准。
什么是「无动物源」?
「无动物源」表示该物料经过加工和检测,适用于特种工业加工。规格侧重于影响该应用性能的杂质——例如,电子应用的金属含量、电池应用的粒度、光学应用的折射率,或对水分敏感工艺的水分含量。
什么是「无载体」?
「无载体」表示该物料经过加工和检测,适用于特种工业加工。规格侧重于影响该应用性能的杂质——例如,电子应用的金属含量、电池应用的粒度、光学应用的折射率,或对水分敏感工艺的水分含量。
本产品应如何储存?
请于?20 °C条件下保存。避免反复冻融。建议按单次用量分装保存。
本产品如何运输?
本产品采用保温箱配冰袋运输。收货后请立即拆包,并按上述储存条件保存。
如何获取批次专用COA?
每个订单都会随附分析证书(COA),您也可以从账户订单历史中下载。如需订购前的COA,请联系您的客户代表,或使用PDP上的"申请COA"按钮——我们将提供代表性批次的COA。