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EnzymoPure™,无动物源,无菌,无载体 级 提供 ≥95%(SDS-PAGE) 纯度,适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。
-20°C储存,避免反复冻融。超低温运输 。请查阅批次 COA 获取详细规格。
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在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。
本公司生产的 pA-Tn5 Transposase ,中文名为 pA-Tn5 转座酶,是一种来源于 E.coli,经过改造的具有极高活性 Tn5 转座酶突变体和 Protein A 的融合蛋白。pA-Tn5 转座酶在和适当测序接头(Adapters)组装后成为 pA-Tn5 Transposome (pA-Tn5 转座体),可用于 CUT&Tag 实验。CUT&Tag (Cleavage Under Targets and Tagmentation),即靶向剪切及标记,是一种新兴的蛋白质与 DNA 相互作用的研究方法,具有特异性强、背景噪音较低、灵敏度高、重复性较好、成本低等优点,被用来替代传统的 ChIP-Seq (Chromatin Immunoprecipitation-sequencing)方法。CUT&Tag 技术的核心是利用 pA/G-Tn5 Transposome 上的 Protein A 或 Protein G 具有与靶蛋白上结合的抗体特异性结合的能力,使 Tn5 转座体能通过 Protein A/G 及抗体与靶蛋白形成复合物,随后加入 Mg2+激活 Tn5 转座体的酶活性对靶蛋白结合的 DNA 进行切割实现靶向的 DNA 片段化(DNA Fragmentation),同时将其携带的测序接头连接到片段两端从而实现标记,后续通过 PCR 反应进行缺口填补,并借助双端标记 PCR 引物 (Dual-indexed PCR primers)扩增后,制备成适用于二代测序(Next generation sequencing, NGS)平台的 DNA 文库 。
活性定义:超活性突变,高效快速反应
组分和说明
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产品应用
pA-Tn5 转座酶在和适当测序接头(Adapters)组装后成为 pA-Tn5 Transposome (pA-Tn5 转座体),可用于 CUT&Tag 实验。
产品优势
与野生型 Tn5 转座酶相比,插入效率至少提升 1000 倍,具有转座随机性好、稳定性高、插入位点易测序等特点。
使用说明
构建 CUT&Tag 实验所需的 pA-Tn5 转座体。
1.ME 和接头(Adapters)的序列。
ME: 5'-[phos]CTGTCTCTTATACACATCT-3'
Primer 1: 5'-TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAG-3'
Primer 2: 5'-GTCTCGTGGGCTCGGAGATGTGTATAAGAGACAG-3'
注:本接头序列参考 DNA Sample Preparation Kit,也可按照不同高通量测序的要求进行设计。
2.制备 Adapter 1 和 Adapter 2。
按照下表分别配制 Adapter 1 和 Adapter 2 退火反应体系。退火反应后 Adapter 1 或 Adapter 2 的终浓度为 200μM。
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使用 PCR 仪按下表设置退火反应程序,反应结束即可获得 Adapter 1 和 Adapter 2。
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3.pA-Tn5 转座体的制备。
按照下表,将 pA-Tn5 Transposase、Adapter 1 和 Adapter 2 按摩尔比 1:0.5:0.5 混合,吹打混匀,室温孵育 1 小时。
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注意事项:
(1)本产品含 50%甘油,-20℃保存不会冻结。须避免-80℃保存,否则会冻结, 反复冻融可能会降低本产品的酶活性。
(2)本产品较为粘稠,吸取时注意取样量准确,加样后请注意充分吹打混匀,避免产生气泡。
(3)本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
(4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
通过匹配包装上的批号来查找并下载产品的 COA,每批产品都进行了严格的验证,您可放心使用!
| 批号(Lot Number) | 证书类型 | 货号 |
|---|---|---|
| 分析证书 | P745696 |
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