计算溶液所需的质量、体积或浓度。
BioReagent 级 ,适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。
2-8°C储存,避光,室温。常规运输,低温运输 。请查阅批次 COA 获取详细规格。
SDS、COA、产品数据表及规格说明书均可下载。可通过批号查询获取批次 COA。
在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。
RNA 的种类来源比较多,提取制备的方法各异,一般有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法,其中最常用的是苯酚法。本产品 RNA 提取试剂含苯酚和异硫氰酸胍等物质,能迅速裂解细
胞或组织并且灭活核酸酶,保持 RNA 的完整性,加入氯仿并离心后,溶液形成上层为水相(无色)、中间层、下层为有机相(红色),上层用异丙醇沉淀回收总 RNA,中间层用乙醇沉淀
回收 DNA,下层用异丙醇沉淀回收蛋白。
组织细胞 RNA 提取试剂盒(一步提取法)适用于从各种组织或细胞中快速分离总 RNA,既可用于小量样品(50-100 mg 组织、5×10⁶ 细胞),也可用于大量样品(>1g 组织/>10⁷细胞),提取的总 RNA 质量高,可用于 Northern Blot、Dot Blot、polyA 筛选、体外翻译、RNase 保护分析和分子克隆,该试剂盒有以下特点:①适用范围广;②操作简单,整个过程 1 小时内完成;③纯度高;④污染少。该试剂盒仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途。
组分表
注:发货时各组分依据储存温度(室温/2‑8℃)独立包装,差异化温控运输以保障产品性能。同一订单含多温区物料可能分批次送达,请以实际收货为准。收货后按组分表标注温度分类存放,有效期自生产之日起 12 个月。 |
操作步骤
1.样品准备
1)贴壁细胞:①直接裂解:直接在培养瓶/皿中加入 RNA 提取试剂裂解细胞,每 10cm²面积加 1ml,用移液器吹打混匀。②胰蛋白酶消化:用无菌 PBS 洗涤细胞后,加入含有 0.05-0.25%胰蛋白酶的 PBS 处理细胞,当细胞脱离容器壁后,加入含有血清的培养基终止反应,将细胞溶液转移至无 RNase 的离心管中,以下参考悬浮细胞相关操作步骤。
2)悬浮细胞:无需清洗细胞,直接 5000-6000 g 离心 5 min,收集细胞沉淀,去除上清。收集细胞时一定要将细胞培养液去除干净,否则裂解不完全,降低 RNA 收获率,每 5×10⁶~10⁷ 动物、植物和酵母细胞或每 10⁷细菌细胞加入 1ml RNA 提取试剂,充分振荡混匀。
3)组织:取新鲜动物或者植物组织或者-70℃冻存组织,50-100mg 组织在液氮中充分研磨或者加入 1ml RNA 提取试剂研磨或者用匀浆器匀浆处理,样品体积一般不超过RNA提取试剂体积的 10%,研磨要迅速,以1min为佳。
4)血液:取 0.5~1 ml 新鲜或冻存的血液,12000g 离心 5 min,去除血浆,加入 1ml RNA 提取试剂,充分振荡混匀。
2、 核酸分离:充分振荡混匀(可以置于低温/超低温冰箱冻存 5-10 min 后,充分振荡,反复 1-3 次),将裂解样品或匀浆液室温静置 5-10 min,使核蛋白与核酸完全分离。
3、 样品分层:加入 0.2 ml RNA 分离液,振荡 15s,室温静置 2-3 min,12000 g 4℃离心 10-15 min,上层为水相,中间层和下层为有机相,RNA 在上层水相。
4、 沉淀 RNA:吸取上层水相(约 500μl)转移至无 RNase 的离心管中(不要吸取任何中间层物质,否则会有染色体 DNA 污染),加入等体积 RNA 沉淀液混匀,室温放置 15~20 min,
12000 g 4℃离心 10 min,离心后管侧或管底形成胶状沉淀,弃上清。
5、 洗涤 RNA:加入 1ml RNA 洗涤液轻轻洗涤沉淀,室温放置 5-10 min,7500g 4℃离心 5 min,弃上清,室温干燥 5-10 min,不宜过分干燥,否则 RNA 难以溶解。
6、 溶解 RNA:加入 30-50ul RNase-free ddH₂O 充分溶解,-70℃长期保存或直接用于后续试验,对于肝、胰腺、肾等组织中 RNase 含量高的样品沉淀用 RNA 保存液溶解。
分析与定量
1、 测定样品在 260 nm 和 280 nm 的吸收值确定 RNA 的质量,按 1OD=40pg RNA 计算RNA 的产率,OD260/ OD280 在 1.8-2.0 视为抽提 RNA 纯度较好,浓度在 4μg/ml 以
上的样品适于用分光光度计测定。
2、 进行甲醛变性琼脂糖电泳,确定 RNA 的完整性和污染情况。
3、 核酸分析仪测定 RNA 的质量和纯度。
常见问题分析
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注意事项
1、 样品保存:加入 RNA 提取试剂混匀后,样品可在-70℃放置 1~2 月;RNA 样品可以在 70%酒精中-70℃保存 2~4 周;如果需要长期保存,应置于超低温冰箱中保存。
2、 RNA 提取试剂和 RNA 分离液含有腐蚀性物质,污染皮肤或眼睛后,立即用清水或生理盐水冲洗,必要时寻求医生的帮助。
3、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
4、 试剂开封后请尽快使用,以防影响后续实验效果。
RNA can be sourced from a variety of materials, and numerous methods exist for its extraction and preparation. Commonly used techniques include the phenol method, the detergent method, and the guanidine hydrochloride method, among which the phenol method is the most widely employed. This product (RNA extraction reagent) contains phenol and guanidinium isothiocyanate, among other components, which rapidly lyse cells or tissues and inactivate nucleases, thereby preserving RNA integrity. After the addition of chloroform and centrifugation, the solution separates into three phases: the upper aqueous phase (colorless), the interphase, and the lower organic phase (red). Total RNA is recovered from the upper aqueous phase by isopropanol precipitation, DNA is precipitated from the interphase with ethanol, and proteins are precipitated from the lower organic phase with isopropanol. This product is suitable for rapid isolation of total RNA from various tissues or cells, and can handle either small samples (50–100 mg tissue or 5×10⁶ cells) or large samples (>1 g tissue or >10⁷ cells). The extracted total RNA is of high quality and can be used for Northern blot, Dot blot, poly(A)⁺ RNA selection, in vitro translation, RNase protection assays, and molecular cloning experiments. The kit features broad applicability, simple operation (the entire process can be completed within 1 hour), high purity, and low contamination. This reagent is intended for research use only and is not suitable for clinical diagnosis or other applications.
注:发货时各组分依据储存温度(室温/2‑8℃)独立包装,差异化温控运输以保障产品性能。同一订单含多温区物料可能分批次送达,请以实际收货为准。收货后按组分表标注温度分类存放,有效期自生产之日起 12 个月。 |