本试剂盒采用玻璃纤维素离心柱纯化方式，具有高效、快速、方便的特点，提取过程中也 无需苯酚氯仿抽提等步骤，适合从新鲜全血中提取总RNA。利用该试剂盒提取的RNA纯度高， 极少含蛋白质、基因组DNA和其它杂质的污染。提取得到的RNA可以直接用于Northern杂交、 斑点杂交、mRNA纯化、体外翻译、RNA分解酶的保护分析、RT-PCR、Real-Time RT-PCR、 cDNA文库构建等各种分子生物学实验。
产品组分表：
| R1125010 | Component | 50 T | Storage | | R1125010A | RNAProtect Reagent | 160 mL | RT | | R1125010B | Buffer RLT | 30 mL | RT | | R1125010C | Buffer RW | 38 mL | RT | | R1125010D | Buffer RW2 | 12 mL | RT | | R1125010E | RNase-Free ddH2O | 15 mL | RT | | R1125010F | RNAPure MinElute Spin Columns (含2mL收集管) | 50 EA | RT | | R1125010G | Proteinase K | 1.2 mL | RT | | R1125010H | RNAPure Filtration Columns (含2mL收集管) | 50 EA | RT | | R1125010I | Buffer BR | 15 mL | RT | | R1125010J | 1mL注射器 | 1 EA | RT | | R1125010K | DNase l | 1 EA | 2-8℃ | | R1125010L | DNase l Buffer | 4 mL | 2-8℃ | | R1125010M | RNase-Free ddH2O | 1 mL | 2-8℃ |
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储存条件
试剂盒中的R1125010K; R1125010L; R1125010M组分室温运输，收到后置于2-8℃储存，可保存15个月。试剂盒其他组分室温运 输，室温保存，可保存15个月。加入β-巯基乙醇的Buffer RLT 4℃可放置1个月。
注意事项
请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
1．尽可能使用新鲜收集的样品，RNA 产量与起始样品中 RNA 的完整性有关，按照说明书标 准流程降解为小片段的 RNA 不能被有效回收。
2. 使用前，向12mL Buffer RW2中加入48mL 无水乙醇。
DNase I 储存液的配制
用1 ml注射器将550 μl RNase-Free ddH2O注入装有DNase I干粉的瓶中，轻柔混匀至溶 解，分装后-30～-15℃储存 (可保存9个月)，每次根据用量需求取出。配制的DNase I工作液 置于2-8储存 (可保存42天)，避免反复冻融。
操作步骤
使用前，向12mL Buffer RW2中加入48mL 无水乙醇。
Ⅰ 血液样品保存：
a. 取新鲜抗凝血液按1:3的比例加入RNAprotect Reagent。
注意：使用前请确定RNAprotect Reagent储存于室温。保存血液样品时，请立即在新鲜抗凝血液中加 入3倍体积的RNAprotect Reagent。如需处理更大量的血液样本，请选择合适规格的耗材进行操作。
b. 立即盖上管盖，上下颠倒混匀8-10次。含有RNAprotect Reagent的人血液样品可在2-8℃保存5天，或在-20℃条件下至少保存6个月；含有RNAprotect Reagent的哺乳动物血液样 品可在15-25℃保存2天，2-8℃保存7天，或在-20℃条件下至少保存12个月。
注意：含有RNAprotect Reagent的血液样品必须在室温放置2 h以上，以使血液样品充分裂解。该步骤可在低温保存样本前或完成保存之后进行。
Ⅱ 血液样品RNA纯化(100 μl-1 ml)：
1. 纯化保存于血液RNA稳定剂的血液样品 (室温放置2 h以上) 时，请先将样品室温放置或 37℃水浴使其升至室温。然后6,600 rpm离心10 min，用移液器吸弃上清液，取沉淀进行 以下操作。
2. 向沉淀中加入3倍血液样品体积的RNase-Free ddH2O，涡旋振荡或用移液器吹打使沉淀完 全溶解。
3. 6,600 rpm离心10 min。用移液器吸弃上清液。 注意：请将上清去除彻底，否则会影响到RNA与吸附柱的结合。
4. 缓慢加入240 μl Buffer BR，涡旋振荡或用移液器反复吹打使沉淀溶解完全。 注意：该步骤沉淀较难溶解，请吹打至沉淀完全溶解，否则会降低RNA得率。
5. 向溶解后的样品中加入200 μl Buffer RLT，然后加入20 μl Proteinase K，充分颠倒混匀， 55℃孵育10 min，其间颠倒混匀2-3次，溶液应变清亮。
注意：如孵育后仍有肉眼可见颗粒，可涡旋振荡或用移液器反复吹打使其溶解。请不要预先将Buffer RLT和Proteinase K溶液混合。如孵育后溶液未彻底变清亮,请延长孵育时间至溶液清亮为止。
6. 将过滤柱RNAPure Filtration Column放入收集管中，然后将上一步所有溶液用移液器转移 到过滤柱中，12,000 rpm离心3 min，小心吸取收集管中的滤液至新的1.5 ml RNase-Free 离心管中，吸头尽量避免接触收集管中的细胞碎片沉淀。
7. 缓慢加入220 μl无水乙醇，混匀 (此时可能会出现沉淀)，将得到的溶液和沉淀一起转入吸 附柱RNAPure MinElute Spin Columns (吸附柱放在收集管中)，12,000 rpm离心30 sec， 倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
8. 向吸附柱中加入350 μl Buffer RW，12,000 rpm离心30 sec，倒掉收集管中的废液，将吸 附柱放回收集管中。
9. DNase I 工作液的配制：取10 μl DNase I储存液放入新的RNase-Free离心管中，加入70 μl DNase I Buffer，轻柔混匀。 注意：解冻后的DNase I储存液保存于4℃（可保存6周），避免反复冻融。
10. 向吸附柱中央加入80 μl的DNase I工作液，室温放置15 min。
11. 向吸附柱中加入350 μl Buffer RW，12,000 rpm 离心30 sec，倒掉收集管中的废液，将吸 附柱放回收集管中。
12. 向吸附柱中加入500 μl Buffer RW2（使用前请先检查是否已加入乙醇），12,000 rpm离心 30 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
13. 重复步骤12。 14. 12,000 rpm 离心3 min，将吸附柱放入一个新的1.5 ml RNase-Free离心管中，向吸附膜 中央加入30-100 μl RNase-Free ddH2O，室温放置1 min，12,000 rpm离心1 min，得到RNA 溶液。
物理外观：Liquid
是否无菌：否
ZJ25F0825815
危险品化学品经营许可证（带存储）