计算溶液所需的质量、体积或浓度。
,适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。
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在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。
Taq-Plus PCR Forest Mix (2x) 的浓度为 2×,使用方便快捷,能减少 PCR 操作过程中的污染,使用时只需取适量 Taq-Plus PCR Forest Mix (2x), 加入模板和引物,并加入 ddH2O 补足体积,使反应体系浓度为 1× 即 可进行 PCR 反应。 该 Mix 最长可扩增 5 kb DNA 片段,具有良好的扩增特异性和模 板兼容性,PCR 产物 3' 端带 A 碱基,纯化后可直接用于 T/A 克隆。 PCR Mix 中包含两种染料,PCR 产物无需添加 Loading Buffer 可直 接点样电泳,且电泳过程中会出现两个指示条带。该染料不影响 PCR 扩增效率,但对于需要对 PCR 产物进行吸光度、荧光等光学分析的 实验,建议在分析前对 PCR 产物进行纯化,或使用无染料的 Taq-Plus PCR Master Mix (2x) 。
使用方法
1. 常规 PCR 反应体系

a. 引物推荐终浓度为 0.2~0.4 μM,效果不佳时可以在 0.1~1 μM 浓度范围内进 行调整; b. 不同模板最佳反应浓度有所不同,以 50 μl 体系为例:模板为基因组 DNA 时, 一般推荐的使用量为 10~400 ng;当模板为质粒或病毒 DNA 时,一般推荐的 使用量为 10 pg~20 ng。
2. 常规 PCR 反应程序

a. 该预变性条件适合绝大多数扩增反应,对于一些复杂模板,例如:菌液、菌落(尤 其是酵母)的 PCR 扩增,预变性时间可适当延长至 10 min,以提高预变性效果;
b. 关于延伸速率,当目的片段长度不超过 2 kb 时,推荐使用 30 sec/kb;当目的片段长度大于 2 kb 时,推荐使用 60 sec/kb。
注 : 如果使用酵母菌液作为 PCR 扩增模板,建议目的片段长度不超过 2.5 kb,若超出 2.5 kb, 建议将酵母菌液预先进行破壁处理。
3. 凝胶浓度对应的染料迁移距离

注:染料会影响吸光度。
质量控制 核酸内切酶残留检测 将酶液与超螺旋质粒 DNA 在 37℃温育 4 h,通过 DNA 电泳检测 质粒无变化。 核酸外切酶残留检测 将酶液与双链 DNA 底物在 37℃温育 16 h,通过 DNA 电泳检测 双链 DNA 底物无变化。 稳定性测试 室温存放一周,无明显活性改变。 功能检测 以质粒 DNA 和人基因组 DNA 为模板,扩增 5k 和 3k 两个片段,30 个循环后经琼脂糖凝胶电泳检测可见目的条带。
质量控制
核酸内切酶残留检测:
将酶液与超螺旋质粒 DNA 在 37℃温育 4 h,通过 DNA 电泳检测质粒无变化。
核酸外切酶残留检测:将酶液与双链 DNA 底物在 37℃温育 16 h,通过 DNA 电泳检测双链 DNA 底物无变化。
稳定性测试:室温存放一周,无明显活性改变。
功能检测:以质粒 DNA 和人基因组 DNA 为模板,扩增 5k 和 3k 两个片段, 30 个循环后经琼脂糖凝胶电泳检测可见目的条带。