Name: 乙酰胆碱（Ach）含量检测试剂盒（比色法）
SKU: A1521781
Availability: InStock

概述规格储存与运输技术文档高级数据质检证书（CoA,COO,BSE/TSE 和分析图谱) 技术文档和文章溶液计算器

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为什么选择此级别

BioReagent 级，适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。

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储存与运输

2-8°C储存,避光。低温运输。请查阅批次 COA 获取详细规格。

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质量文档

SDS、COA、产品数据表及规格说明书均可下载。可通过批号查询获取批次 COA。

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文献证明

在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。

概述

乙酰胆碱（Ach）是研究最早的神经递质，是许多周围神经如运动神经、植物性神经系统节前纤维和副交感神经节后纤维的兴奋性神经递质。乙酰胆碱与底物液反应，通过显色反应生成棕色化合物，测定其吸光度 OD 值，其颜色深浅与乙酰胆碱浓度成正比。

试剂盒的组成和配制：

A1521781	组件	物理外观	24T/24S	储存	注意事项
A1521781A	提取液	液体	30ml	2-8℃.	—
A1521781B	试剂一	固体	1瓶	2-8℃.	1. 开盖前注意使粉体落入底部（可手动甩一甩）； 2. 再向试剂中加入 5mL 蒸馏水溶解备用； 3. 保存周期与试剂盒有效期相同。
A1521781C	试剂二	液体	5ml	2-8℃.	—
A1521781D	试剂三	液体	4ml	2-8℃. 避光	—
A1521781E	试剂四 A	固体	3支	2-8℃. 避光	1. 临用前每支四 A 中加 1.2mL 的四 B 溶解混匀后备用； 2. 保存周期与试剂盒有效期相同。
A1521781F	试剂四 B	液体	4ml	2-8℃. 避光	—
A1521781G	标准品	固体	1支	2-8℃. 避光	1. 若重新做标曲，则用到该试剂； 2. 按照说明书中标曲制作步骤进行配制； 3. 溶解后的标品一周内用完。

混合液制备：临用前将试剂一：试剂二 = 1:1 混合制成混合液备用。

实验器材：

研钵（匀浆机）、冰盒（制冰机）、台式离心机、可调式移液枪、水浴锅（烘箱、培养箱、金属浴）、1ml 比色皿、离心管、分光光度计、蒸馏水（去离子水、超纯水均可）。

指标测定：

建议先选取 1-3 个差异大的样本（例如不同类型或分组）进行预实验，熟悉操作流程，根据预实验结果确定或调整样本浓度，以防造成样本或试剂不必要的浪费！

1、样本提取：

① 组织样本：取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。12000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

【注】：若增加加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积 (mL) 为 1：5~10 的比例进行提取。

② 细菌或细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细胞，加入 1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20% 或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；12000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

【注】：若增加样本量，可按照细菌 / 细胞数量 (10⁴)：提取液 (mL) 为 500~1000：1 的比例进行提取。

③ 液体样本：直接检测；若浑浊，离心后取上清检测。

2、检测步骤：

① 分光光度计预热 30min，调节波长到 540 nm。

② 所有试剂解冻至室温（25℃）。在 EP 管中依次加入：

试剂组分 (μL)	测定管	空白
样本	100	-
水	200	300
混合液	300	300

混匀，室温孵育 15min

试剂组分 (μL)	测定管	空白
试剂三	150	150
试剂四	100	100

摇晃 EP 管，充分混匀 2min，立即将全部澄清液体转移至 1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）中于 540nm 处读值，ΔA=A_测定-A_空白。。

【注】

1. 若 ΔA 较小，可以增加样本量 V1（由 100μL 增至 200μL，则水相应减少），则改变后的 V1 需重新代入公式计算。

2.ΔA 最好控制在标准曲线的线性范围内，若 ΔA 的值超过 1.2，可对样本进行稀释再测定，稀释倍数 D 代入计算公式计算；或减少样本量 V1（如减至 50μL，则水相应增加），则改变后的 V1 和稀释倍数 D 需重新代入公式计算。

结果计算：

1、标准曲线方程为 y = 6.2507x - 0.0252; x 为标准品质量（mg），y 为 ΔA。

2、按照样本质量计算：

乙酰胆碱含量 (mg/g 重量)=[(ΔA+0.0252)÷6.2507]÷(W×V1÷V)×D =1.6×(ΔA+0.0252)÷W×D

3、按照样本蛋白浓度计算：

乙酰胆碱含量 (mg/mg prot)=[(ΔA+0.0252)÷6.2507]÷(Cpr×V1÷V)×D =1.6×(ΔA+0.0252)÷Cpr×D

4、按细胞数量计算：

乙酰胆碱含量 (μg/10⁴cell)=[(ΔA+0.0252)÷6.2507×10³]÷(500×V1÷V)×D =1600×(ΔA+0.0252)÷500×D

5、按液体体积计算：

乙酰胆碱含量 (mg/mL)=[(ΔA+0.0252)÷6.2507]÷V1×D=1.6×(ΔA+0.0252)×D

参数释义：

W--- 样品质量，g；　　　　

V--- 提取液体积，1 mL；

V1--- 上清液体积（mL），0.1mL；　

500--- 细胞数量，万；

D--- 稀释倍数，未稀释即为 1；

Cpr--- 蛋白浓度（mg/mL）；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。

附：标准曲线制作过程:

1、称取 2mg 标准品至 EP 管中，加入 1mL 水溶解成 2mg/mL 标准母液，(现配现用，两天内用完)，将母液用蒸馏水稀释成六个浓度梯度的标准品，例如：0，0.4，0.8，1.2，1.6，2 mg/mL。也可根据实际样本调整标准品浓度。

2、标品稀释参照表如下:

标品浓度 mg/mL	0	0.4	0.8	1.2	1.6	2
标品稀释液 uL	0	40	80	120	160	200
水 uL	200	160	120	80	40	0

各标准管混匀待用。

3、依据测定管加样表操作，根据结果，以各浓度吸光值减去 0 浓度吸光值，过 0 点制作标准曲线。

试剂组分（μL）	测定管	0 浓度管 (仅做一次)
标品	100	-
蒸馏水	200	300
混合液	300	300

混匀，室温孵育 15min

试剂组分（μL）	测定管	0 浓度管 (仅做一次)
试剂三	150	150
试剂四	100	100

摇晃 EP 管，充分混匀 2min，立即将全部澄清液体转移至 1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）中于 540nm 处读值，ΔA=A_测定-A_浓度管。

Acetylcholine (Ach) is the earliest discovered neurotransmitter and an excitatory neurotransmitter for multiple peripheral nerves, including motor nerves, preganglionic fibers of the autonomic nervous system and postganglionic parasympathetic nerve fibers. Ach reacts with substrate solution to form brown compounds via chromogenic reaction; the absorbance (OD value) is measured, and color intensity is positively correlated with Ach concentration.

Kit Composition & Preparation

A1521781	Components	Appearance	24T/24S	Storage
A1521781A	Extraction Solution	Liquid	30ml	2-8℃.	—
A1521781B	Reagent 1	Solid	1bottle	2-8℃.	1. Tap the bottle to collect all powder at bottom before opening cap; 2. Dissolve powder with 5 mL distilled water before use; 3. Shelf life is consistent with kit expiry date.
A1521781C	Reagent 2	Liquid	5ml	2-8℃.	—
A1521781D	Reagent 3	Liquid	4ml	2-8℃. Store in the dark.	—
A1521781E	Reagent 4A	Solid	3vials	2-8℃. Store in the dark.	1. Before assay, dissolve each vial of Part A with 1.2 mL Part B and mix thoroughly; 2. Shelf life matches kit expiry.
A1521781F	Reagent 4B	Liquid	4ml	2-8℃. Store in the dark.	—
A1521781G	Standard	Solid	1vial	2-8℃. Store in the dark.	1. Required for new standard curve preparation; 2. Prepare stock solution per standard curve protocol in manual; 3. Prepared standard solution shall be used within 7 days.

Working Mix Preparation: Mix Reagent 1 and Reagent 2 at 1:1 volume ratio immediately before experiment to prepare working mix.

Required Lab Equipment

Mortar/homogenizer, ice box/ice maker, bench-top centrifuge, adjustable micropipette, water bath/incubator/dry block heater, 1 mL cuvette, centrifuge tubes, spectrophotometer, distilled water (deionized or ultrapure water acceptable).

Sample Assay Protocol

Pre-test recommendation: Run pilot assay with 1–3 samples of distinct groups to optimize loading volume and avoid unnecessary waste of samples and reagents.

1. Sample Extraction

① Tissue samples: Weigh ~0.1 g tissue, add 1 mL extraction solution, homogenize on ice. Centrifuge at 12000 rpm, 4 ℃ for 10 min, collect supernatant and keep on ice for testing.

Note: For increased loading, extract at tissue weight (g) : extraction solution (mL)=1 : 5~10.

② Cells/Bacteria: Pellet cells/bacteria by centrifugation and discard supernatant; take ~5×10⁶ cells, add 1 mL extraction solution, lyse on ice via sonication (20%/200 W power, 3 s pulse, 10 s interval, repeat 30 cycles). Centrifuge at 12000 rpm, 4 ℃ for 10 min, collect supernatant on ice.

Note: For increased loading, extract at cell count (10⁴) : extraction solution (mL)=500~1000 : 1.

③ Liquid samples: Test directly; centrifuge turbid samples and collect supernatant before detection.

2. Colorimetric Assay

① Pre-warm spectrophotometer for 30 min and set wavelength to 540 nm.

② Equilibrate all reagents to room temperature (25 ℃), dispense into EP tubes as below:

Reagent (μL)	Assay tube	Blank tube
Sample	100	—
Water	200	300
Working Mix	300	300

Mix and incubate at RT for 15 min

Reagent (μL)	Assay tube	Blank tube
Reagent 3	150	150
Reagent 4	100	100

Vortex EP tube thoroughly for 2 min, transfer entire clear supernatant into 1 mL glass cuvette (1 cm path length), read absorbance at 540 nm. ΔA=A_assay-A_blank ;

Notes:

If ΔA is too low, raise sample volume V1 from 100 μL to 200 μL with corresponding reduction in water volume; update V1 in calculation formula.
Keep ΔA within linear range of standard curve. If ΔA＞1.2, dilute sample and record dilution factor D for calculation, or reduce V1 (e.g. to 50 μL, add more water); substitute updated V1 and D into formula.

Calculation Formulas

1. Standard curve: y = 6.2507x - 0.0252; x=standard mass (mg), y=ΔA

2. By tissue weight: Ach content (mg/g tissue)=[(ΔA+0.0252)÷6.2507]÷(W×V1÷V)×D=1.6×(ΔA+0.0252)÷W×D

3. By total protein: Ach content (mg/mg protein)=[(ΔA+0.0252)÷6.2507]÷(Cpr×V1÷V)×D=1.6×(ΔA+0.0252)÷Cpr×D

4. By cell count: Ach content (μg/10⁴ cells)=[(ΔA+0.0252)÷6.2507×10³]÷(500×V1÷V)×D=1600×(ΔA+0.0252)÷500×D

5. By liquid volume: Ach content (mg/mL)=[(ΔA+0.0252)÷6.2507]÷V1×D=1.6×(ΔA+0.0252)×D

Parameter Definition:

W=sample weight (g);

V=total extraction volume (1 mL);

V1=supernatant loading volume (0.1 mL);

500=cell count (×10⁴);

D=dilution factor (D=1 without dilution);

Cpr=sample protein concentration (mg/mL); BCA protein quantification kit from our company is recommended.

Appendix: Standard Curve Preparation

1. Weigh 2 mg standard powder into EP tube, dissolve in 1 mL water to prepare 2 mg/mL stock solution (prepare fresh, use within 48 h). Serially dilute stock to 6 concentrations: 0, 0.4, 0.8, 1.2, 1.6, 2 mg/mL (adjust concentration range per actual sample).

1. Weigh 2 mg standard powder into EP tube, dissolve with 1 mL distilled water to prepare 2 mg/mL standard stock solution (prepare freshly, use within 2 days). Serially dilute stock solution with distilled water to six gradient concentrations: 0, 0.4, 0.8, 1.2, 1.6, 2 mg/mL. Adjust concentrations according to actual sample condition if needed.

2. Standard dilution table:

Std Conc.(mg/mL)	0	0.4	0.8	1.2	1.6	2
Std stock (μL)	0	40	80	120	160	200
Distilled water (μL)	200	160	120	80	40	0

Mix all standard tubes ready for use.

3. Dispense reagents following table below, calculate ΔA by subtracting absorbance of zero-concentration blank, then plot zero-based standard curve.

Reagent (μL)	Assay tube	Zero-concentration blank (run once only)
Standard	100	—
Distilled water	200	300
Working Mix	300	300

Incubate at RT for 15 min

Reagent (μL)	Assay tube	Zero-concentration blank (run once only)
Reagent 3	150	150
Reagent 4	100	100

Vortex EP tube for 2 min, transfer all clear liquid to 1 cm-path 1 mL cuvette, read OD at 540 nm: ΔA=A_assay-A_{zero blank}

规格

别名

乙酰胆碱（ACH）测定试剂盒(可见分光光度法)

英文别名

Acetylcholine (ACH) assay kit

规格或纯度

BioReagent

英文名称

Acetylcholine (Ach) Content Assay Kit (Colorimetric Method)

应用

细胞代谢

样品类型

组织, 细胞, 细菌

检测方法

比色法

检测仪器

可见光分光光度计

检测波长

540 nm

敏感性

Light-sensitive

储存与运输

储存条件

2-8°C储存,避光

运输条件

低温运输

稳定性与储存

Store at 2-8℃ long term (3 months). Store in the dark.

组分与储存

A1521781	组件	物理外观	24T/24S	储存
A1521781A	提取液	液体	30ml	2-8℃.
A1521781B	试剂一	固体	1瓶	2-8℃.
A1521781C	试剂二	液体	5ml	2-8℃.
A1521781D	试剂三	液体	4ml	2-8℃. 避光
A1521781E	试剂四 A	固体	3支	2-8℃. 避光
A1521781F	试剂四 B	液体	4ml	2-8℃. 避光
A1521781G	标准品	固体	1支	2-8℃. 避光

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批号(Lot Number)	证书类型	货号
ZJ26F0636666	分析证书	A1521781

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