计算溶液所需的质量、体积或浓度。
BioReagent,for DNA and RNA applications,分子生物学级 ,适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。
-20°C储存,避免反复冻融。超低温运输 。请查阅批次 COA 获取详细规格。
SDS、COA、产品数据表及规格说明书均可下载。可通过批号查询获取批次 COA。
在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。
内毒素来源于革兰氏阴性细菌细胞壁中的脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS),由菌体裂解后释出来的物质,又称之为“热原”。其化学成分有磷脂多糖-蛋白质复合物,毒性成分主要为类脂质 A,可引起生物体发热、内毒素休克等。
内毒素清除试剂(红色)(Endotoxin Removal Reagent,ERR)主要用于清除 DNA、蛋白质或其他液体样品中的内毒素。本试剂为红色溶液,便于分相观察。该试剂依赖于的试剂的胶束特性来去除溶液中的内毒素。当温度高于 20°C 时溶液离心后胶束聚集成一个单独的相,脂多糖被固定。同时与水相分类,DNA 保留在水相中。经过 3 次以上重复抽提后可将活性为 5000~50000EU/ml 的内毒素水平降低到 5~0.5 EU/ml 以下,即降低 1000~10000 倍。
储存条件:4℃一年有效,-20℃长期储存。
操作步骤:
注意:为节省时间,使用前将内毒素清除剂(红色)在冰水浴上预冷。
1A.已纯化质粒 DNA 中内毒素的清除
例:吸取 500μl DNA 溶液于 1.5ml 的离心管中,加入 50μl(1/10 体积)的 3M NaAc pH5.2 或者 25μl(1/20 体积)的 5M NaCl溶液。如果 DNA 溶液中盐含量比较高,可以忽略此步骤(该步中加入盐是为了最大程度地提高最后一步乙醇沉淀 DNA 的效率,同时去除 NaAc 或者 NaCl 溶液中可能存在的内毒素)。
2. 加入 100μl(1/5 体积)预冷的内毒素清除剂 ERR,振荡混匀,放置于冰水浴中 10 分钟,溶液应为浅红色且清澈。
3. 将离心管置于 50℃水浴或金属浴 10 至 30 分钟,溶液变浑浊。
4. 12,000rpm 室温离心 5min,溶液分为两相,上层基本是无色透明的(略有非常浅的红色),下层是深红色的。
5. 小心地将含有 DNA 的上相液体转移到另一个干净的 1.5ml 的离心管中,弃油状相,可重复抽提三次,即重复步骤 2-5 三次。
6. 加入 2.5 体积无水乙醇,-20℃沉淀 30min 或过夜;12,000rpm 离心 10min,弃上清;加入 70%乙醇洗涤沉淀,1,2000rpm 离 心 5min 弃上清;空气干燥沉淀,加入 100~200μl 无内毒素的高纯水或 TE 溶解沉淀。
7. 用内毒素检测试剂测定样品中内毒素活性,可与初始样品比较。
1B.质粒 DNA 提取过程中内毒素的清除
以碱裂解法提取质粒为例,在加完中和液(P3 溶液)并离心去除碎片之后,准确吸取含质粒 DNA 的上清于一个新 1.5ml 的离心管中。
2. 加入 1/5 体积预冷的内毒素清除剂 ERR,盖上管盖,振荡混匀,放置于冰水浴中 10 分钟,溶液应为浅红色且清澈。
3. 将离心管置于 50℃水浴或金属浴 10 至 30 分钟,溶液变浑浊。
4. 12,000rpm 室温离心 5min,溶液分为两相,上层基本是无色透明的(略有非常浅的红色),下层是深红色的。
5. 小心地将含有 DNA 的上相液体转移到吸附柱中,弃油状相。
注:如果要重复抽提,将含有 DNA 的上相液体转移到另一个干净的 1.5ml 的离心管中,弃油状相,可重复抽提三次,即重复步骤 2-5 三次,最后一次将含有 DNA 的上相液体转移到吸附柱中。
6. 后续步骤按照质粒提取说明书操作即可。推荐使用阿拉丁的无内毒素质粒小提中量试剂盒(货号:D1088768)或无内毒素质粒大提试剂盒(货号:E778409)。
7. 用内毒素检测试剂测定样品中内毒素活性。
注意:
1. 清除程序可导致少量的 DNA 丢失,质粒 DNA 浓度最好大于 1μg/μl。
2. 最后溶解的溶液、TE 或水应该是无内毒素的
3. 所有耗材均应不含内毒素,玻璃器皿可高温烘烤,非挥发性水溶液可高压 120℃高温处理。
通过匹配包装上的批号来查找并下载产品的 COA,每批产品都进行了严格的验证,您可放心使用!
| 批号(Lot Number) | 证书类型 | 货号 |
|---|---|---|
| 分析证书 | E1372225 | |
| 分析证书 | E1372225 |
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