Fluo-4是一种将Fluo-3结构中的Cl替换成F的钙荧光探针。由于将Cl替换成了了电子吸引力更强的F，它的最大激发波长会向短波长处偏离10 nm左右。这个波长更接近于氩激光器器的波长，所以用氩激光器激发时，Fluo-4的荧光强度比Fluo-3强⼀倍。Fluo-4, AM穿透细胞膜进入细胞后被细胞内的酯酶剪切形成Fluo-4，从而被滞留在细胞内，Fluo-4若以游离配体形式存在时几乎是非荧光性的，但是当它与细胞内钙离⼦子结合后可以产生较强的荧光，最大激发波长为494nm，最大发射波长为516nm。可以使用激光共聚焦显微镜或流式细胞仪检测细胞内钙离⼦子浓度的变化。

使⽤说明：for Human T cells

（1）试剂

2mM的Fluo-4, AM/DMSO（将1mg Fluo-4, AM溶于442μL DMSO）

Pluronic F127

Hanks balanced salt solution（HBSS）

HEPES buffer saline (10mM HEPES, 1mM Na2HPO4, 137mM NaCl, 5mM KCl, 1mM CaCl2, 0.5mM MgCl2, 5mM Glucose, 0.1% BSA，pH 7.4)

（2）操作

①. 向Fluo-4, AM/DMSO溶液中加入16.5mg Pluronic F127，Pluronic F127可以防止Fluo-4, AM在HBSS中聚合并能帮助其进入细胞。

②. 用HBSS稀释Fluo-4, AM溶液，制备4μM的Fluo-4, AM工作液。

③. 将Fluo-4, AM工作液加入细胞，在37℃培养20分钟。

④. 加入5倍体积的含有1%胎牛血清的HBSS，再继续培养40分钟。

⑤. 用HEPES buffer saline洗涤细胞3次，然后用HEPES buffer saline使细胞重悬浮，制成1×10^5 cells/mL的溶液。

⑥. 37℃下培养10分钟，然后用该细胞进行荧光钙离⼦子检测。激发波长494nm，发射波长516nm。

*标记的条件因细胞种类而异，在每次实验前，请先确定最佳条件。以上方法仅供参考。

规格

别名

钙荧光探针 FIuo-4, AM

英文别名

Fluo 4-AM | 1-[2-Amino-5-(2,7-difluoro-6-hydroxy-3-oxo-9-xanthenyl)phenoxy]-2-(2-amino-5- methylphenoxy)ethane-N,N,N',N'-tetraacetic acid, pentaacetoxymethyl ester

规格或纯度

BioReagent, ≥90%(HPLC), 2mM in DMSO

稳定性与储存

-20℃避光保存，6个月有效。

英文名称

Fluo-4 AM

储存条件

避光,-20°C储存,干燥

运输条件

超低温运输

纯度

≥90%(HPLC)

Excitation(nm)

Blue Laser(488nm)

Emission(nm)

516nm

Ex/Em(nm)

Ex:494nm;Em:516nm

产品线

biological_products

名称和识别符

分子类型

小分子

IUPAC Name

acetyloxymethyl 2-[2-[2-[5-[3-(acetyloxymethoxy)-2,7-difluoro-6-oxoxanthen-9-yl]-2-[bis[2-(acetyloxymethoxy)-2-oxoethyl]amino]phenoxy]ethoxy]-N-[2-(acetyloxymethoxy)-2-oxoethyl]-4-methylanilino]acetate

INCHI

1S/C51H50F2N2O23/c1-28-7-9-39(54(19-47(62)74-24-69-30(3)57)20-48(63)75-25-70-31(4)58)45(13-28)66-11-12-67-46-14-34(8-10-40(46)55(21-49(64)76-26-71-32(5)59)22-50(65)77-27-72-33(6)60)51-35-15-37(52)41(61)17-42(35)78-43-18-44(38(53)16-36(43)51)73-23-68-29(2)56/h7-10,13-18H,11-12,19-27H2,1-6H3

InChi Key

QOMNQGZXFYNBNG-UHFFFAOYSA-N

Smiles

CC1=CC(=C(C=C1)N(CC(=O)OCOC(=O)C)CC(=O)OCOC(=O)C)OCCOC2=C(C=CC(=C2)C3=C4C=C(C(=O)C=C4OC5=CC(=C(C=C53)F)OCOC(=O)C)F)N(CC(=O)OCOC(=O)C)CC(=O)OCOC(=O)C

Isomeric SMILES

CC1=CC(=C(C=C1)N(CC(=O)OCOC(=O)C)CC(=O)OCOC(=O)C)OCCOC2=C(C=CC(=C2)C3=C4C=C(C(=O)C=C4OC5=CC(=C(C=C53)F)OCOC(=O)C)F)N(CC(=O)OCOC(=O)C)CC(=O)OCOC(=O)C

分子量

1096.94

Reaxy-Rn

24143884

Reaxys-RN link address

https://www.reaxys.com/reaxys/secured/hopinto.do?context=S&query=IDE.XRN=24143884&ln=

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界（kingdom) 有机化合物
- 超类（Superclass) 有机杂环化合物
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    - 亚类（Subclass） 1-苯并吡喃
      - 第5级 (level 5) 二苯并吡喃
        第6级 (level 6) 黄酮类

界（kingdom)	有机化合物
超类（Superclass)	有机杂环化合物
类（Class)	苯并吡喃类
亚类（Subclass）	1-苯并吡喃
中间层级节点（Intermediate Tree Nodes）	二苯并吡喃
直接上位类(Direct Parent)	黄酮类
其他上位类（Alternative Parents）	α-氨基酸酯氨基苯醚苯氧基化合物氨基甲苯二烷基芳胺苯胺和取代苯胺丙烯醛烷基芳基醚芳基氟化物杂芳族化合物环酮氧环化合物缩醛碳氢化合物衍生物有机氧化物有机氟化物有机光子化合物
分子骨架（Molecular Framework)	芳香族杂多环化合物
取代基（Substituents）	乙醛酸 - 酰胺基苯甲酸 - 芳基醚 - α-氨基酸酐 - α-氨基酸或其衍生物 - 氨基酸 - 氨基酸或其衍生物 - 氨基苯醚 - 氨基苯甲醚 - 苯胺或取代苯胺 - 芳香族杂多环化合物 - 芳基氟化物 - 芳基卤化物 - 苯基化合物 - 羰基 - 羧酸衍生物 - 羧酸酰胺 - 环酮 - 二烷基芳基胺 - 乙醚 - 杂芳香族化合物 - 烃衍生物 - 单环苯基基团 - 有机硝基化合物 - 有机氧化物 - 有机氧化合物 - 有机氟化物 - 有机卤化物 - 有机氮化合物 - 有机氧化合物 - 有机氮化合物 - 氧杂环 - 苯酚醚 - 苯氧基化合物 - 三级脂肪族/芳香族胺 - 三芳基胺 - 甲苯 - 黄蒽
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