抗体表征工具

         抗体属于结构复杂、异质性强的大分子，对外界条件敏感且稳定性较差。正因其高度复杂，作为生物药物的抗体在研发过程中需要一整套全面、精准、并具高度稳健性的生物分析工具，以支持：

♦︎ 抗体特性鉴定

♦︎ 单克隆抗体（mAb）纯化

♦︎ 肽谱分析

♦︎ 糖基化分析

♦︎ 翻译后修饰（PTM）分析

♦︎ 单克隆抗体内吞作用评估

         在大分子药物开发的各个阶段，蛋白质分析与鉴定始终至关重要。阿拉丁提供经验证的抗体表征工具组合，覆盖抗体纯化、肽谱解析、糖基化与PTM分析等关键环节，并可用于生产流程中残留物的检测，助力加速药物从研究到开发的全流程推进。

常见抗体鉴定方法

抗体蛋白纯化磁珠--Protein G磁珠、Protein A磁珠

         Protein G与Protein A磁珠是一类具备高特异性与高载量的磁性亲和介质，可便捷地从细胞培养上清、腹水及血清等样本中纯化抗体。无论是单样本处理、多样本并行，还是高通量自动化流程，这些磁珠都能稳定高效地完成抗体纯化。

产品特点：

♦︎ 高密度共价偶联：表面固定大量Protein A/G，结合能力强、稳定性好。

♦︎ 用量更省：因结合位点多，达到同等效果所需磁珠更少。

♦︎ 低非特异性吸附：背景低，纯化更干净、回收率更高。

应用：

♦︎ 抗体纯化：从血清/上清中把IgG抓出来、洗净、洗脱。

♦︎ 免疫沉淀（IP/Co-IP/ChIP/RIP）：用抗体把目标蛋白/复合物/染色质/RNA拉下来做后续分析。

简要操作流程：

免疫球蛋白IgG降解酶--IdeS与IdeZ

         免疫球蛋白降解酶S（IdeS）与免疫球蛋白降解酶Z（IdeZ）在大肠杆菌中重组表达并纯化获得，可以特异性的识别IgG，并在IgG下铰链区的特定位点进行酶切，使IgG水解为完整的F(ab’)2片段和Fc片段。

产品特点：

♦︎ 严格的底物专一性，只识别IgG。

♦︎ 可以识别鼠、兔、猴、羊以及人动物嵌合来源的IgG。

应用：

♦︎ 采用LC/MS分析用于表征待测治疗性抗体的理化与结构特性。

♦︎ 文献与实践表明，IdeS可用于基因治疗药物临床前动物模型给药前，清除体内AAV中和抗体，从而降低预存抗体对给药效果的干扰。

 切割位置：

IdeS和IdeZ蛋白酶对人和小鼠IgG亚类的活性差别。切割位置用粗体字母表示。

质谱级重组胰蛋白酶

相较于常规蛋白质分析，抗体蛋白的肽谱解析对所用蛋白酶的纯度、特异性与切割效率提出更高要求。阿拉丁的质谱级重组胰蛋白酶具备更高的位点特异性与切割效率，减少了自体消化，提升对难消化位点的酶解能力，从而为生物治疗性蛋白质的鉴定与表征提供更精准、可靠的技术支撑。

产品特点：

♦︎ 高特异性：特异性切割K/R的C端肽键，产物片段大小合适、易正离子化，适配质谱与蛋白质组学表征。

♦︎ 高纯稳定：毕赤酵母重组表达＋高效层析纯化，并甲基化修饰抑制自水解，背景低、活性更稳定。

♦︎ 无动物源性：重组表达，生产过程中不使用任何动物源的材料，无外源性的病毒污染。

图1.结果表明Rapid-Trypsin在3 h完成酶切

应用：

♦︎ 适用于抗体及常规蛋白的质谱鉴定与表征分析。

♦︎ 兼容LC/MS与RP-HPLC-UV平台应用。

可替代蛋白酶--rAsp-N,Mass Spec Grade

rAsp-N（Mass Spec Grade）是一种高活性的重组蛋白酶，特别适合用于复杂混合样品的蛋白质组学研究，以及纯化蛋白（如治疗性单抗）的肽图表征。该酶在解析复杂样本的蛋白组成与结构方面具有优势，能够高效率、可重复地将蛋白水解为合适长度的肽段，从而显著提升后续质谱分析的准确性与可靠性。

产品特点：

♦︎ 相较天然型Asp-N，性价比更高。

♦︎ 与天然型Asp-N比较体积更大，制备时一致性更高。

♦︎ 适用范围：复杂混合物的蛋白质组学分析以及纯化蛋白（如抗体）的肽图谱分析。

可替代蛋白酶--rLys-C,Mass Spec Grade

rLys-C（Mass Spec Grade）为在E. coli表达的重组Lys-C，性能与天然酶一致，专一切割赖氨酸残基的C端。即使在6 M尿素等强变性条件下仍保持水解活性，可显著提升难消化或抗性蛋白的消化效率。当pH值范围在8-9时，rLys-C具有最佳活性。

产品特点：

♦︎ 等同活性：在E. coli重组表达的赖氨酰内切酶（Lys-C），与天然无色杆菌来源酶活性一致。

♦︎ 高特异・无杂酶：不含Lys-N、Arg-C等杂蛋白酶；对赖氨酸后位点高度特异，含DK/PK序列也能完全切割。

♦︎ 稳定高纯・适配质谱：经甲基化抑制自水解，高纯高活，满足质谱级蛋白表征与样品制备需求。

图2.LC-MS分子量质谱图

糖基化分析--PNGase F, Endo H糖苷酶

糖基化广泛影响蛋白的折叠、稳定性、分泌与运输、活性及免疫识别，是调控蛋白功能与生命过程的重要修饰。实验上常用两种N-糖苷酶：PNGase F可在Asn–GlcNAc处切断，几乎去除所有类型N-糖（除带核心α1,3-岩藻糖外），释放完整糖链；Endo H内切高甘露糖/早期杂合型，在肽上保留单个GlcNAc，对成熟复杂型无效。二者联用可快速判断糖链成熟度并定位N-糖位点。

产品特点：

♦︎ 高纯度：没有污染蛋白酶或其它糖苷酶，纯度≥95％。

♦︎ 质量稳定：严格质控，每批产品均经过活性和功能验证，保证产品质量。

♦︎ 适配性广：不含甘油，酶切体系与HPLC及质谱工作流程环境兼容。

图3.PNGase F酶切原理

图4.Endo H酶切原理

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