储存缓冲液：20% (v/v) Ethanol
UltraBio™ Protein A/G琼脂糖磁珠由NHS活化的顺磁性琼脂糖微球与Protein A/G共价结合形成。
该产品具有较高的抗体结合能力和较低的蛋白非特异吸附率，洗脱条件均一，一步纯化即可从血清样品中分离出纯度大于90%的抗体；尤其适用于同时纯化多个样品，样本和磁珠的体积范围也可灵活的调整，纯化的过程能够简便的放大，且配备不同的磁力架可同时处理1-96个样本。
本产品每毫升磁珠悬液含约20%琼脂糖磁珠沉淀。
包装规格：20%（v/v）悬液
参数
| 指标
|
基质
| 琼脂糖
|
配基
| Protein A/G
|
| 含量 | Slurry: 20%
|
粒径
| 10-37 μm |
载量
| 35~45 mg h-IgG/mL (100%, v/v)
|
保存
| 2-8℃ (20% 乙醇） |
使用说明：
一、缓冲液配方
| 缓冲液 | 配方 |
Binding/Wash Buffer
| PBST (137mM NaCl, 2.7mM KCl, 10mM Na₂HPO₄, 2.0mM KH₂PO₄, 0.1% Tween-20), pH7.2-7.4
|
Elution Buffer
| 100mM Glycine, 0.1% Tween-20, pH 2.5
|
Neutrilization Buffer
| 1 M Tris-HCl, pH 9.0
|
Storage Buffer
| 20% Ethanol or PBST, 0.05% ProClin 300 |
二、抗体纯化流程（以纯化人血清为例）
1、样品处理
取人血清100µL（一般血清样品中抗体含量约2-8mg/mL）至1.5mL离心管中，加入900µL Binding/Washing buffer，充分混匀。
2、磁珠预处理
(1) 充分混匀磁珠后，取200µL磁珠悬液到2mL离心管中，磁性分离，弃上清；
(2) 加入1mL Binding/Washing Buffer于离心管中，反复颠倒3-5次使磁珠充分重悬，磁性分离，弃上清；该步骤重复一次。
注：磁珠的用量可根据磁珠对目标抗体的最大结合量进行调节，可根据磁珠的抗体结合能力计算磁珠的大概用量，建议磁珠用量应为目标抗体含量的1.2-1.5倍。
3、抗体结合
在处理好的磁珠管中加入步骤1处理的样品溶液，振荡均匀，在室温下置于翻转混合仪或者手动轻轻翻转，使样品和磁珠充分接触混合结合15min，进行磁性分离，弃上清。
4、清洗磁珠
加入1mL的Binding/Washing Buffer于离心管中，反复颠倒3-5次使磁珠充分重悬，磁性分离，弃上清；再重复该步骤2次。
5、目标抗体洗脱
(1) 加入0.5-1mL Elution Buffer，室温下置于翻转混合仪或者手动轻轻翻转10min，置于磁力架上进行磁性分离，收集洗脱液到新的离心管中，即为纯化的目标抗体；
(2) 若需要，可重复上述步骤，收集洗脱液至新离心管中，以检测目标抗体是否完全洗脱（Elution Buffer用量建议最终洗脱抗体浓度在0.5-1.2mg/mL，以确保一次洗脱可将95%以上的目标抗体被洗脱下来，用量过少会导致洗脱后仍有部分抗体残留于磁珠上）。
6、抗体中和
在以上含抗体的洗脱液中加入1/10抗体洗脱体积的Neutrilization Buffer，混匀使其pH值保持在中性环境下，以维持抗体的生物活性，避免失活。
三、磁珠后处理
1、向装有磁珠的离心管中加入1mL Elution Buffer，涡旋震荡5s，磁性分离弃上清。重复操作2次。
2、加入1mL Binding/Washing Buffer，涡旋5s，磁性分离弃上清；重复操作2次。
3、加入Storage Buffer 重悬磁珠，置于2-8℃保存。
四、磁珠再生
磁珠多次使用后会有沉淀蛋白、强疏水性蛋白、脂蛋白等杂质非特异性吸附到磁珠上，为了保证磁珠的使用效率，建议持续使用5次后进行磁珠再生处理。
1、按约每1mL（20% v/v）磁珠加入1mL 1%（v/v）Triton X-100磁珠再生缓冲液，振荡均匀，在室温下置于翻转混合仪或者手动翻转混合，10min后进行磁性分离，弃上清；
2、加入1mL Binding/Washing Buffer进行重悬，磁性分离，弃上清，重复该操作3次；
3、加入1mL Storage Buffer重悬磁珠，置于2-8℃保存。
五、流程优化
1、磁珠与抗体的的结合效率与抗体的种属来源及所属亚型有关，请确认抗体的类型与Protein A/G 配基的亲和效率。
2、抗体所属亚型与ProteinA/G 的亲和度较低：
a. 增加抗体与磁珠的孵育时间（30-120min）；
b. 提高结合缓冲液的pH值（8-9）；
c. 降低离子强度（25-100mM NaCl）等方法提高亲和效率；
d. 选择与目标抗体具有更高亲和度的配基（如Protein G或Protein A）。
3、抗体与ProteinA/G配基亲和度太高导致抗体洗脱效率低：
a. 降低洗脱缓冲液的pH 值1.9-2.5；
b. 增大洗脱缓冲液的离子强度（可选用 2-3M MgCl2）；
c. 延长洗脱时间， 提高洗脱效率。
注意事项：
1、磁珠使用前应充分混匀，确保磁珠悬液处于均一状态。
2、磁珠使用后于保存液中储存2-8℃，避免冷冻或离心。
ZJ25F0826087
危险品化学品经营许可证（带存储）