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蛋白A、G和L亲和琼脂糖珠纯化抗体

· · 发布于 2025年9月12日 · 更新于 2025年9月12日 ·

抗体在基础研究和治疗应用中具有重要价值，而蛋白A（Protein A）、蛋白G（Protein G）和蛋白L（Protein L）亲和琼脂糖珠是实验室中纯化抗体的经典工具。它们通过特异性结合抗体，将抗体从复杂混合物中分离出来，实现高效纯化。

一、蛋白A、G和L的选择

在开始纯化之前，需要根据抗体类型和来源选择合适的亲和蛋白：

蛋白A和蛋白G主要通过抗体的重链Fc区结合抗体，不同种属和亚类的亲和力不同。
蛋白L则通过抗体的轻链结合，适合那些Fc区结合能力较弱的抗体或某些特定轻链类型的抗体。

表1. 蛋白A、G和L识别的抗体类型

物种	亚型	Protein A / G / L
Human & Mouse	IgG	A, G, & L
Human, Mouse, & Rat	IgA, IgD, & IgM	L
Rabbit	IgG	A & G
Pig, Dog, Cat, & Guinea Pig	IgG	A
Goat, Sheep, Donkey, Cow, & Horse	IgG	G

二、纯化原理与流程

蛋白A、G、L亲和琼脂糖珠可通过重力流（gravity-flow）或预装柱（prepacked column）使用。基本原理如下：

抗体结合：样品通过琼脂糖珠时，抗体与亲和蛋白特异结合，杂质随流体洗出。
洗涤：用缓冲液去除非特异性结合的杂质。
洗脱：加入低pH洗脱缓冲液，削弱抗体与亲和蛋白结合，使抗体释放。
中和：立即加入中和缓冲液，将酸性洗脱液pH调整至6–8范围，保护抗体活性。

三、缓冲液设计与使用

抗体纯化中缓冲液是保证结合效率和抗体稳定性的关键。常用缓冲液类型如下：

缓冲液类型	pH	功能	说明
装柱/洗涤缓冲液（Load/Wash Buffer）	7.0–7.4	保持抗体结合条件	常用PBS，可用于洗涤
洗脱缓冲液（Elution Buffer）	2.5–4.0	弱化抗体-蛋白结合	0.1 M 柠檬酸或乙酸缓冲液
中和缓冲液（Neutralization Buffer）	9–10	保护抗体稳定性	1 M Tris-HCl，pH 9–10；可提前放在收集管中

操作要点：

洗脱液酸性强，需立即中和。建议每1 ml洗脱液加入约0.15 ml中和缓冲液。
PBS可同时用于装柱和洗涤步骤，无需额外调整。

四、操作注意事项与优化建议

珠子预平衡：商业珠子含20%乙醇，需先用水冲洗，再用装柱缓冲液平衡。
pH检查：所有缓冲液在使用前必须确认pH，确保抗体结合和洗脱效果。
缓冲液配制：提前计算所需体积和浓度，并记录操作步骤，保证实验一致性。
快速中和：酸性洗脱液可能损伤抗体，需及时中和。
加载速度适中：避免过快导致抗体未充分结合。
洗涤充分：确保杂质彻底去除。

相关产品

名称	货号	包装
Protein A Agarose Beads / Resin	rp192279	1ml/5ml/10ml
UltraBio™ Protein G 琼脂糖磁珠	P1373637	10ml/50ml
Protein G Agarose (Fast Flow, for IP)	P749483	2ml/10ml/50ml
Protein G Agarose (Fast Flow)	P749484	2ml
Protein G Agarose (Fast Flow, 抗体纯化用)	P749485	2ml/10ml/50ml/200ml
Protein A/G磁珠	P751576	1ml/5ml
Protein G 亲和层析介质	P5281	1ml/5ml/25ml/100ml
Protein G磁珠	P751579	1ml/5ml
UltraBio™ Protein L琼脂糖磁珠	P1374921	5ml/25ml
UltraBio™ 耐碱Protein A琼脂糖磁珠	A1374216	10ml/50ml
UltraBio™ Protein A/G 琼脂糖磁珠	P1373640	5ml/25ml
Protein A+G Agarose (Fast Flow, for IP)	P749480	2ml/10ml/50ml
UltraBio™ Protein G Plus磁珠	P751578	1ml/5ml
Protein A+G Agarose (Fast Flow, 抗体纯化用)	P749482	2ml/10ml/50ml/200ml
Protein A+G Agarose 预装柱(Fast Flow)	P753841	1ml/5ml
Protein A+G Agarose (Fast Flow, 进口分装)	P749481	2ml
Protein A磁珠	P751577	1ml/5ml
磷酸盐缓冲液片剂	P492960	100tabs/12×100tabs/12×200tabs/200tabs
三(羟甲基)氨基甲烷 (Tris 碱)	T110599	100g/500g/1kg/5kg/10kg
甘氨酸	A110751	500g/2.5kg

阿拉丁：https://www.aladdin-e.com/

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Da — 若无特别说明，分子量单位默认为道尔顿。 Mw — 重均分子量。 Mn — 数均分子量。

产品仅供科研与开发使用，不用于人体、动物、诊断或治疗。

引用本文

阿拉丁科学.《蛋白A、G和L亲和琼脂糖珠纯化抗体》. 阿拉丁知识库，更新于 2025年9月12日。
                            https://www.aladdin-e.com/zh_cn/faqs/antibody-purification-using-protein-a-g-and-l-affinity-agarose-beads.html

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