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免疫沉淀（IP）及蛋白A、G、L琼脂糖珠的应用

· · 发布于 2025年9月11日 · 更新于 2025年9月11日 ·

免疫沉淀（IP）利用抗体特异性结合从复杂样品中捕获目标蛋白，蛋白A、G、L琼脂糖珠作为固相载体可高效结合抗体，实现精准分离。

一、免疫沉淀（IP）技术原理

IP的核心流程可概括为特异性结合→固相捕获→洗脱检测：

• 固相载体：蛋白A/G/L与琼脂糖珠共价偶联，提供稳定结合表面。

• 抗体偶联：抗体的Fc段与蛋白A/G/L结合，形成“珠子-蛋白-抗体”复合物。

• 蛋白捕获：抗体的Fab段识别目标蛋白，并可同时捕获其相互作用蛋白。

• 洗脱分析：通过酸、碱或高盐缓冲液释放复合物，后续可用WesternBlot或质谱检测。

二、蛋白A、G、L的差异与选择策略

ProteinA、G和L均可与抗体结合，常用于抗体纯化和免疫沉淀。但三者结合谱不同，主要区别在于对抗体亚型的偏好，而不同亚型在体内分布和功能各异（见表1、表2）。

表1. Protein A、G、L的特异

蛋白	抗体类别	物种
Protein A	IgG	人、鼠、兔、猪、狗、猫、豚鼠
Protein G	IgG	人、鼠、山羊、绵羊、驴、牛、马
Protein L	IgG	人、鼠
Protein L	IgA	人、鼠、鼠
Protein L	IgD	人、鼠、鼠
Protein L	IgM	人、鼠、鼠

表2. 抗体类别

类别	重链	特点
IgA	α	阻止病原体在唾液、泪液、乳汁及黏膜表面定植
IgD	δ	表达于未接触抗原的初始B细胞表面
IgE	ε	抵御寄生虫，同时参与过敏和哮喘反应
IgG	γ	检测血液和细胞外液中的病原体
IgM	μ	触发炎症反应以中和和清除病原体

三、琼脂糖珠的加载与洗脱关键操作

琼脂糖珠与抗体、目标蛋白的结合稳定性，以及后续洗脱的效率，直接影响IP实验的纯度与回收率，需严格控制缓冲液条件。

1.加载条件：

使用中性缓冲液（如PBS,Tris-HCl），避免强去污剂和高浓度变性剂；4℃温育1–2h以保证结合效率。

2.洗脱方法（高效分离复合物）:

洗脱的核心是通过破坏蛋白A/G/L与抗体的相互作用（主要为静电作用、氢键），释放“抗体-目标蛋白”复合物，常用方法对比如下：

洗脱方式	原理	优点	注意事项
酸性	低pH破坏静电作用	效率高、特异性好	需立即中和，防止变性
碱性	高pH改变电荷	操作简便	蛋白易变性，需快速中和
高盐	高离子强度屏蔽静电	温和、不损伤活性	效率较低，可能有杂蛋白

图一抗体部分通过静电作用(A)与蛋白A、G或L（绿色）结合。酸性(B)和碱性(C)缓冲液通过改变蛋白电荷破坏结合，高盐缓冲液(D)则通过“屏蔽”相互作用实现洗脱。

四、IP实验的典型应用场景

IP技术凭借“特异性捕获”的优势，广泛用于蛋白表达分析、相互作用研究及基因调控领域，常见应用如下：

• 蛋白表达分析：通过IP结合WB，可检测不同组织或细胞中目标蛋白的表达差异。

• 蛋白互作研究：IP联合质谱可鉴定伴侣蛋白；进一步可用共免疫沉淀（Co-IP）验证。

• 染色质免疫沉淀（ChIP）：捕获与DNA结合的蛋白（如转录因子），结合qPCR或测序研究基因调控机制。

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名称	货号	包装
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UltraBio™ Protein G 琼脂糖磁珠	P1373637	10ml/50ml
Protein G Agarose (Fast Flow, for IP)	P749483	2ml/10ml/50ml
Protein G Agarose (Fast Flow)	P749484	2ml
Protein G Agarose (Fast Flow, 抗体纯化用)	P749485	2ml/10ml/50ml/200ml
Protein A/G磁珠	P751576	1ml/5ml
Protein G 亲和层析介质	P5281	1ml/5ml/25ml/100ml
Protein G磁珠	P751579	1ml/5ml
UltraBio™ Protein L琼脂糖磁珠	P1374921	5ml/25ml
UltraBio™ 耐碱Protein A琼脂糖磁珠	A1374216	10ml/50ml
UltraBio™ Protein A/G 琼脂糖磁珠	P1373640	5ml/25ml
Protein A+G Agarose (Fast Flow, for IP)	P749480	2ml/10ml/50ml
UltraBio™ Protein G Plus磁珠	P751578	1ml/5ml
Protein A+G Agarose (Fast Flow, 抗体纯化用)	P749482	2ml/10ml/50ml/200ml
Protein A+G Agarose 预装柱(Fast Flow)	P753841	1ml/5ml
Protein A+G Agarose (Fast Flow, 进口分装)	P749481	2ml
Protein A磁珠	P751577	1ml/5ml
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阿拉丁：https://www.aladdin-e.com/

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Da — 若无特别说明，分子量单位默认为道尔顿。 Mw — 重均分子量。 Mn — 数均分子量。

产品仅供科研与开发使用，不用于人体、动物、诊断或治疗。

引用本文

阿拉丁科学.《免疫沉淀（IP）及蛋白A、G、L琼脂糖珠的应用》. 阿拉丁知识库，更新于 2025年9月11日。
                            https://www.aladdin-e.com/zh_cn/faqs/immunoprecipitation-and-applications-of-protein-agl-agarose-beads.html

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