实验方案（Protocols）

Liperfluo脂质过氧化绿色荧光探针：实验方案与使用指南

· · 发布于 2026年10月16日 · 更新于 2026年10月16日 ·

Liperfluo（脂质过氧化绿色荧光探针）是一种细胞膜通透性绿色荧光染料，专为选择性检测活细胞脂质过氧化过程中产生的磷脂氢过氧化物而设计，是研究氧化应激、铁死亡及相关病理过程的重要工具。

产品名称: Liperfluo（脂质过氧化绿色荧光探针）
货号: L651874
检测靶标: 活细胞中的磷脂氢过氧化物（脂质过氧化产物）
荧光颜色: 绿色（兼容FITC/GFP滤光片组）
细胞通透性: 细胞膜通透性；适用于活细胞染色
应用: 荧光显微镜、流式细胞术、酶标仪检测
其他名称: Spy-LHP；MCE目录号HY-D1412

Liperfluo的工作原理

Liperfluo（文献中亦称Spy-LHP）是一种基于二苯基-1-芘基膦（DPPP）骨架的荧光探针。在未被氧化的状态下，该探针几乎不产生荧光。当其与磷脂氢过氧化物（PLOOH）——细胞膜脂质过氧化过程中产生的主要氧化产物——接触时，膦基团被定量氧化为相应的氧化膦，从而引发绿色荧光的强烈增强（在有机溶剂中激发波长约351 nm，发射波长约380 nm；在活细胞成像系统中通常使用FITC或GFP滤光片组）。

由于Liperfluo能分配进入脂质膜，其优先报告与膜相关的磷脂氢过氧化物，而非水相活性氧（ROS），与DCFH-DA等通用ROS探针相比，对脂质过氧化事件具有更优的选择性。

关键选择性：Liperfluo专一性地与磷脂氢过氧化物反应，对过氧化氢、超氧阴离子或羟自由基单独存在时不产生显著信号，使其成为铁死亡研究及相关氧化应激研究中确认脂质过氧化的重要工具。

试剂配制

储液配制：

将Liperfluo溶于高质量无水DMSO中，配制成浓缩储液（通常为1–10 mM）。短暂涡旋以确保完全溶解。
将储液分装为单次用量，避免反复冻融。分装后避光保存于−20 °C。
如批次特定质量检验报告（CoA）中提供摩尔消光系数，可通过吸光度测定验证储液浓度。

工作液配制：

使用前立即将DMSO储液稀释至预热（37 °C）的无血清或无酚红细胞培养基中。典型工作浓度在低微摩尔范围内（如1–10 µM）；请针对每种细胞系进行实验优化。
最终DMSO浓度应≤0.1%（v/v），以减小细胞毒性。
切勿提前配制工作液，每次使用时现配现用。

注意：Liperfluo对光敏感，所有配制和操作步骤均应在遮光条件下进行。

分步染色方案

所需材料：Liperfluo工作液、适用于成像或细胞术的培养容器、PBS（pH 7.4）、配备适当滤光片的荧光显微镜或流式细胞仪。

细胞准备：将细胞接种于适当容器中（如用于成像的玻璃底培养皿，或用于流式细胞术的6孔板）。待细胞生长至60–80%汇合度。
处理（如适用）：根据实验设计，在探针负载前施加所需的氧化应激诱导剂（如RSL3、erastin、氢过氧化枯烯）或抗氧化剂处理。
洗涤：移除培养基，用温热PBS轻柔洗涤细胞一次。
探针负载：加入新鲜配制的Liperfluo工作液，在37 °C、5% CO₂条件下避光孵育30–60分钟（孵育时间可能需要优化）。
负载后洗涤：吸除探针溶液，用温热PBS轻柔洗涤细胞1–2次，以去除多余未结合的探针。
成像/分析：
- 荧光显微镜：立即使用GFP/FITC滤光片组在PBS或无酚红培养基中对活细胞成像，尽快采集图像以减少光漂白。
- 流式细胞术：胰酶消化（或刮取）细胞，重悬于冷PBS中，使用FITC通道（488 nm激发）采集数据。样品置于冰上处理以减少进一步氧化。
数据归一化：每次实验均应设置溶剂对照（仅DMSO）和阳性对照（经已知脂质过氧化诱导剂处理的细胞）。

故障排除

问题	可能原因	建议解决方案
无荧光信号或信号极低	探针降解；孵育时间不足；工作浓度过低	从新开封瓶中配制新鲜储液；将孵育时间延长至60分钟；在无细胞毒性范围内提高探针浓度；确认激发/发射滤光片设置与探针光谱匹配
未处理细胞中背景荧光过高	工作浓度过高；负载后洗涤不充分；细胞处于基础氧化应激状态	降低探针浓度；增加PBS洗涤步骤；验证细胞健康状态和传代次数
诱导剂处理后信号无增加	所选浓度下诱导剂无效；血清中抗氧化剂与探针竞争	用正交检测法（如BODIPY-C11）确认诱导剂活性；染色期间使用无血清或无酚红培养基
探针负载后观察到细胞毒性	DMSO过量；探针浓度过高	将DMSO降至≤0.1%；降低探针浓度；缩短孵育时间
成像过程中荧光快速淬灭	激光/光源功率过高；曝光时间过长	尽量减少光照；使用最低有效激发功率；快速采集图像

储存、操作与安全

储存条件：将Liperfluo密封保存于−20 °C，避光防潮。在推荐储存条件下，试剂预期保持稳定；请参阅批次特定质量检验报告（CoA）以获取确认的有效期信息。

操作注意事项：

Liperfluo溶于DMSO或用DMSO复溶。操作时须穿戴适当的个人防护装备（PPE），包括丁腈手套、实验服和安全护目镜。
DMSO可增强其他化合物的皮肤渗透性——避免皮肤接触。
含Liperfluo的废液须按照当地机构及法规关于化学废物的规定进行处置。

质量控制：Aladdin Scientific提供的每批次Liperfluo均附有质量检验报告，确认产品的鉴别和纯度。如有批次特定光谱数据和推荐工作浓度，请参阅CoA。

常见问题

Liperfluo与DCFH-DA等通用ROS探针有何不同？

Liperfluo选择性检测脂质膜内的磷脂氢过氧化物，而DCFH-DA则广泛报告胞质水相中的各种活性氧。这种膜定位的选择性使Liperfluo成为脂质过氧化更特异的指示剂，尤其适用于铁死亡研究。

Liperfluo可用于固定细胞吗？

Liperfluo专为活细胞应用而设计。化学固定过程（如多聚甲醛固定）可破坏脂质膜，导致探针信号改变或消失，因此固定细胞染色结果不可靠。为获得最佳结果，应在探针负载和洗涤后立即对活细胞进行成像。

应使用哪种阳性对照来验证Liperfluo检测？

常用阳性对照包括用氢过氧化枯烯、RSL3（GPX4抑制剂）或erastin（系统Xc−抑制剂）在可诱导可测量脂质过氧化的浓度下处理细胞。同时加入脂溶性抗氧化剂（如ferrostatin-1或α-生育酚）作为挽救对照，可进一步确认信号特异性。

配制Liperfluo储液的推荐溶剂是什么？

无水DMSO是配制Liperfluo储液的推荐溶剂。由于该化合物水溶性有限，储液阶段应避免使用水性缓冲液。仅在配制工作液阶段、使用前立即将储液稀释至水性培养基中。

Liperfluo兼容流式细胞术吗？

是的。探针负载和洗涤后，细胞可被消化脱离、重悬于冷PBS中，并在流式细胞仪上使用FITC通道（488 nm激光激发，~530/30 nm发射滤光片）进行分析。样品应置于冰上并尽快处理，以防止收集后发生额外氧化。

参考文献

Spy-LHP (Liperfluo) product information and application notes — refer to manufacturer's Certificate of Analysis and product datasheet for lot-specific spectral and purity data.
Shioji K, et al. Peroxyl radical-trapping antioxidant activity of natural polyphenols — methodological background for lipid peroxidation fluorescent probe assays using Spy-LHP. [General reference — specific citation details require verification.]
Dixon SJ, et al. Ferroptosis: an iron-dependent form of nonapoptotic cell death. Cell. 2012;149(5):1060–1072. [General ferroptosis background — applicability to Liperfluo use requires confirmation.] doi:10.1016/j.cell.2012.03.042

产品仅供科研与开发使用，不用于人体、动物、诊断或治疗。

目录：实验方案（Protocols）

探索主题：荧光探针活细胞成像氧化应激铁死亡脂质过氧化实验方案

Da — 若无特别说明，分子量单位默认为道尔顿。 Mw — 重均分子量。 Mn — 数均分子量。