计算溶液所需的质量、体积或浓度。
BioReagent,标曲法 级 ,适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。
2-8°C储存,避光。低温运输 。请查阅批次 COA 获取详细规格。
SDS、COA、产品数据表及规格说明书均可下载。可通过批号查询获取批次 COA。
在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。
葡萄糖氧化酶 (GOD,EC 1.1.3.4) 是一种广泛存在于多种微生物中的氧化还原酶。在有氧环境中,GOD 能够特异性催化葡萄糖与氧气发生反应,生成葡萄糖酸和过氧化氢。基于这一反应特性,常采用 Trinder 显色体系实现酶活性的定量检测:反应生成的过氧化氢在过氧化物酶 (POD) 的催化下,可与 4 - 氨基安替比林 (4-AAP) 和苯酚组成的经典色原底物组合发生氧化缩合,生成粉红色的醌亚胺类产物;该产物在 510 nm 波长处具有最大特征吸收峰,通过分光光度计测定吸光度的变化量,即可换算得到葡萄糖氧化酶的酶活性大小。
组分与储存:
1. 开盖前注意使粉体落入底部(可手动甩一甩); 2. 每支加1.2mL的蒸馏水溶解备用; 3. 保存周期与试剂盒有效期相同。 |
自备仪器和试剂:
⁕ 分光光度计 (能测510nm处的吸光度)
⁕ 研钵 (匀浆机)、冰盒 (制冰机)、台式离心机、可调式移液枪、水浴锅 (烘箱、培养箱、金属浴)、1mL比色皿、离心管
⁕ 蒸馏水 (去离子水、超纯水均可)
指标测定:
建议正式实验前选取2个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验样本和试剂浪费!
1、样本制备:
① 组织样本:0.1g组织样本 (水分充足的样本建议取0.2g左右),加1mL的提取液冰浴匀浆,粗提液全部转移到EP管中,12000rpm,4℃离心10min,上清液待测。
② 细胞/细菌样本:先收集细胞到离心管内,离心后弃上清;取约500万细胞/细菌加入1mL的提取液,超声波破碎细胞/细菌 (冰浴,功率200W,超声3s,间隔10s,重复30次);12000rpm 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
注:若增加样本量,可按照细胞数量 (10⁴):提取液 (mL) 为 500~1000:1的比例进行提取。
2、上机检测:
① 可见分光光度计预热30min,设定波长到510nm,蒸馏水调零。
② 所有室温至室温 (25℃)。在1mL玻璃比色皿 (光径1cm) 中依次加入:
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注:若ΔA值在零附近,则增加样本加样体积V₁ (如增至50μL,则试剂一相应减少),或延长反应时间T (如延长至40min或60min),则改变后的V₁和T需代入公式重新计算。
结果计算:
1、标准曲线:y=4.9206x-0.0063:x为H₂O₂标准品 (μmol),y为ΔA。

2、按样本鲜重计算:
单位定义:在37℃,每克组织每小时生成 1μmol H₂O₂ 定义为一个酶活单位 (U)。
GOD (μmol/h/g 鲜重)=[(ΔA+0.0063)÷4.9206]÷(W×V₁÷V)÷T =10.2×(ΔA+0.0063)÷W
3、按样本蛋白浓度计算:
单位定义:在37℃,每毫克组织蛋白每小时生成 1μmol H₂O₂ 定义为一个酶活单位 (U)。
GOD (μmol/h/mg prot)=[(ΔA+0.0063)÷4.9206]÷(V₁×Cpr) ÷T=10.2×(ΔA+0.0063)÷Cpr
4、按细胞/细菌数量计算:
单位定义:在37℃,每10⁴个细胞/细菌每小时生成 1μmol H₂O₂ 定义为一个酶活单位 (U)。
GOD (μmol/h/10⁴ cell)=[(ΔA+0.0063)÷4.9206]÷(500×V₁÷V)÷T=0.02×(ΔA+0.0063)
V:加入提取液体积,1 mL
V₁:加入样本体积,0.06mL
T:反应时间,20min=1/3h
W:样本质量, g
500:细胞数量,万
Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL
附:标准曲线制作过程:
1. 标准品母液浓度为250μmol/mL。将母液用蒸馏水稀释成六个浓度梯度的标准品,例如:0,0.5,1,1.5,2,2.5μmol/mL。也可根据实际样本调整标准品浓度。
2. 标品稀释参照表如下:
| 1. 吸取标准品母液100uL,加入900uL蒸馏水,混匀得到25μmol/mL的标品稀释液; 2. 吸取25μmol/mL的标品稀释液100uL,加入900uL蒸馏水,混匀得到2.5μmol/mL的标品稀释液待用。
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3. 依据加样表操作,根据结果,以各浓度吸光值减去0浓度吸光值,过0点制作标准曲线。
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| 组分货号 | 组分名称 | 物理外观 | 48T | 储存 |
| G1516001A | 提取液 | 液体 | 60 mL | 2-8℃. |
| G1516001B | 试剂一 | 液体 | 15 mL | 2-8°C. 避光 |
| G1516001C | 试剂二 | 液体 | 15 mL | 2-8°C. 避光 |
| G1516001D | 试剂三 | 粉末 | 2 vial | 2-8℃. |
| G1516001E | 标准品 | 液体 | 1 vial | 2-8℃. |
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| 批号(Lot Number) | 证书类型 | 货号 |
|---|---|---|
| 分析证书 | G1516001 |