计算溶液所需的质量、体积或浓度。
比色法 级 ,适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。
2-8°C储存。低温运输 。请查阅批次 COA 获取详细规格。
SDS、COA、产品数据表及规格说明书均可下载。可通过批号查询获取批次 COA。
在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。
本试剂盒适用于检测血清(浆)、细胞上清、组织、细胞等样本中乳酸的 含量。
检测原理
以氧化型辅酶Ⅰ(NAD+)为氢受体,乳酸脱氢酶(LDH)催化乳酸脱氢 产生丙酮酸,使 NAD+转化为还原型辅酶Ⅰ(NADH)。其中 N-甲基吩嗪甲基 硫酸盐(PMS)递氢使氯化硝基四氮唑蓝(NBT)还原为紫色呈色物,呈色 物的吸光度在 530 nm 时与乳酸含量呈线性关系。
提供试剂和物品
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说明:试剂严格按上表中的保存条件保存,不同测试盒中的试剂不能混用。
对于体积较少的试剂,使用前请先离心,以免量取不到足够量的试剂。
所需自备物品
仪器:紫外-可见光分光光度计(530 nm)、恒温气浴箱/恒温水浴锅(37℃)、 涡旋混匀仪、磁力搅拌器、微量移液器(1000 μL,200 μL,100 μL,
10 μL)、烧杯(50 mL、100 mL)。
耗材:枪头(1000 μL,200 μL,10 μL )、EP 管(5 mL,2 mL)、吸水纸、 擦镜纸、磁力搅拌子。
试剂:双蒸水或去离子水、生理盐水(0.9% NaCl)或 PBS(0.01 M,pH 7.4)。
试剂准备
① 检测前,试剂一、三、四、五需平衡至室温,试剂二需置于冰上备用。
② 酶工作液的配制:
按试剂二:试剂一为1: 100的体积比混匀,现用现配,2-8℃保存24小时。
样本准备
① 样本处理 血清血浆等液体样本:可直接测定。 组织样本:常规匀浆处理(生理盐水(0.9% NaCl 溶液)或 PBS(0.01 M,pH
7.4))。匀浆后,4℃,10000 × g 离心 10 min,取上清置于冰上待测。留取部 分上清用于蛋白浓度测定。
细胞样本:取3 ×106 - 5 ×106个细胞加入200 μL生理盐水(0.9% NaCl溶液)
或PBS(0.01 M,pH 7.4)进行匀浆。匀浆后,4℃,10000 ×g离心10 min,取上 清置于冰上待测。留取部分上清用于蛋白浓度测定。
② 样本的稀释
在正式检测前,需选择2-3个预期差异大的样本稀释成不同浓度进行预实 验,根据预实验的结果,结合本试剂盒的线性范围:0.05-6.0 mmol/L,请参 考下表稀释(仅供参考):
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注:稀释液为双蒸水或生理盐水(0.9% NaCl)。
实验关键点
① 严格控制反应时间。
② 将试剂从试剂瓶中倒出再取液,不要直接将移液枪枪头伸入试剂瓶中, 避免污染试剂瓶中试剂。
③ 加样时将枪头伸入 EP 管底部加样。
④ 在加入试剂四后 30 min 内检测完毕。
操作步骤
① 空白管:向 5 mL EP 管中,加入 0.02 mL 双蒸水
标准管:向 5 mL EP 管中,加入 0.02 mL 3 mmol/L 标准品; 测定管:向 5 mL EP 管中,加入 0.02 mL 待测样本;(需将枪头伸入 EP 管底部加样)。
② 向步骤①各管中,分别依次加入 1.0 mL 酶工作液、0.2 mL 试剂三, 混匀,37℃准确反应 10 min。
③ 向步骤②各管中加入 2 mL 试剂四,混匀。
④ 紫外可见光分光光度计,于 530 nm 波长,1 cm 光径石英比色皿,双 蒸水调零,测定各管 OD 值。(测定时不能将气泡倒入比色皿中,并 且在 30 min 内检测完毕)。
操作表
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混匀后,1 cm 光径石英比色皿,530 nm 波长,双蒸水调零,测定各管 OD 值
本试剂盒检测组织和细胞样本时,需测定总蛋白浓度,推荐使用 BCA 法
结果计算

注解:
ΔA1:测定 OD 值-空白 OD 值 ΔA2:标准品 OD 值-空白 OD 值
c:标准品浓度(3 mmol/L)
f:样本加入检测体系前的稀释倍数
Cpr:待测样本的蛋白浓度(gprot/L)
附录1 关键数据
1. 技术参数
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2. 标准曲线(数据仅供参考)
① 标准曲线(数据仅供参考):

如检测人血清(数据仅供参考):
血清:双蒸水=1: 4稀释,取稀释后的人血清0.02 mL,按操作表检测,结 果如下:
空白管OD值为0.075,标准管OD值为0.491,测定管OD值为0.363,标准 管浓度为3 mmol/L,计算结果为:

按照说明书操作,测定人血清(稀释倍数5,加样量0.02 mL)、HepG2 细胞上清(稀释倍数3,加样量0.02 mL)、小鼠肌肉组织(10%组织匀浆的蛋 白含量4.540 g/L,稀释倍数2,加样量0.02 mL)、和HepG2细胞(蛋白含量1.388 g/L,加样量0.02 mL,)中乳酸含量(如下图):

附录3 问题答疑
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声明
1. 试剂盒仅供研究使用,如将其用于临床诊断或任何其他用途,我公司将 不对因此产生的问题负责,亦不承担任何法律责任。
2. 实验前请仔细阅读说明书并调整好仪器,严格按照说明书进行实验。
3. 实验中请穿着实验服并戴乳胶手套做好防护工作。
4. 试剂盒检测范围不等同于样本中待测物的浓度范围。如果样品中待测物 浓度过高或过低,请对样本做适当的稀释或浓缩。
5. 若所检样本不在说明书所列样本类型之中,建议先做预实验验证其检测有效性。
6. 最终的实验结果与试剂的有效性、实验者的相关操作以及实验环境等因 素密切相关。本公司只对试剂盒本身负责,不对因使用试剂盒所造成的 样本消耗负责,使用前请充分考虑样本可能的使用量,预留充足的样本。
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| 批号(Lot Number) | 证书类型 | 货号 |
|---|---|---|
| 分析证书 | L486214 |