L-乳酸检测试剂盒

货号: L486214
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级别和纯度: 比色法 ? 比色级 —— 适用于显色定量检测的纯度。当试剂纯度影响显色强度和准确度时使用。 100 assays(96 samples)
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L486214-100T
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为什么选择此级别

比色法 级 ,适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。

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储存与运输

2-8°C储存。低温运输 。请查阅批次 COA 获取详细规格。

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质量文档

SDS、COA、产品数据表及规格说明书均可下载。可通过批号查询获取批次 COA。

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文献证明

在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。

概述

本试剂盒适用于检测血清(浆)、细胞上清、组织、细胞等样本中乳酸的 含量。
检测原理
以氧化型辅酶Ⅰ(NAD+)为氢受体,乳酸脱氢酶(LDH)催化乳酸脱氢 产生丙酮酸,使 NAD+转化为还原型辅酶Ⅰ(NADH)。其中 N-甲基吩嗪甲基 硫酸盐(PMS)递氢使氯化硝基四氮唑蓝(NBT)还原为紫色呈色物,呈色 物的吸光度在 530 nm 时与乳酸含量呈线性关系。
提供试剂和物品

组分 名称 (50 assays) (100 assays) 保存方式
试剂一 缓冲液 60 mL×1 瓶 60 mL×2 瓶 2-8°C,保存 6 个月
试剂二 酶贮备液 0.6 mL×1 支 1.2 mL×1 支 2-8°C,保存 6 个月
试剂三 显色剂 12 mL×1 瓶 24 mL×1 瓶 2-8℃避光,保存 6 个月
试剂四 终止液 60 mL×2 瓶 60 mL×4 瓶 2-8°C,保存 6 个月
试剂五 3 mmol/L 标准品 2 mL×1 瓶 2 mL×1 瓶 2-8°C,保存 6 个月

说明:试剂严格按上表中的保存条件保存,不同测试盒中的试剂不能混用。
对于体积较少的试剂,使用前请先离心,以免量取不到足够量的试剂。

所需自备物品
仪器:紫外-可见光分光光度计(530 nm)、恒温气浴箱/恒温水浴锅(37℃)、 涡旋混匀仪、磁力搅拌器、微量移液器(1000 μL,200 μL,100 μL,
10 μL)、烧杯(50 mL、100 mL)。
耗材:枪头(1000 μL,200 μL,10 μL )、EP 管(5 mL,2 mL)、吸水纸、 擦镜纸、磁力搅拌子。
试剂:双蒸水或去离子水、生理盐水(0.9% NaCl)或 PBS(0.01 M,pH 7.4)。
试剂准备
①  检测前,试剂一、三、四、五需平衡至室温,试剂二需置于冰上备用。
②  酶工作液的配制:
按试剂二:试剂一为1: 100的体积比混匀,现用现配,2-8℃保存24小时。
样本准备
①  样本处理 血清血浆等液体样本:可直接测定。 组织样本:常规匀浆处理(生理盐水(0.9% NaCl 溶液)或 PBS(0.01 M,pH
7.4))。匀浆后,4℃,10000 × g 离心 10 min,取上清置于冰上待测。留取部 分上清用于蛋白浓度测定。
细胞样本:取3 ×106 - 5 ×106个细胞加入200 μL生理盐水(0.9% NaCl溶液)
或PBS(0.01 M,pH 7.4)进行匀浆。匀浆后,4℃,10000 ×g离心10 min,取上 清置于冰上待测。留取部分上清用于蛋白浓度测定。
②  样本的稀释
在正式检测前,需选择2-3个预期差异大的样本稀释成不同浓度进行预实 验,根据预实验的结果,结合本试剂盒的线性范围:0.05-6.0 mmol/L,请参 考下表稀释(仅供参考):

样本 稀释倍数 样本 稀释倍数
人血清 4-8 大鼠血清 4-8
10%小鼠肌肉匀浆 2-4 HePG2 细胞匀浆(1.388 gprot/L) 4-8
10%小鼠肝匀浆 不稀释 HepG2 细胞上清 2-4

注:稀释液为双蒸水或生理盐水(0.9% NaCl)。

实验关键点
①  严格控制反应时间。
②  将试剂从试剂瓶中倒出再取液,不要直接将移液枪枪头伸入试剂瓶中, 避免污染试剂瓶中试剂。
③  加样时将枪头伸入 EP 管底部加样。
④  在加入试剂四后 30 min 内检测完毕。
操作步骤
①  空白管:向 5 mL EP 管中,加入 0.02 mL 双蒸水
标准管:向 5 mL EP 管中,加入 0.02 mL 3 mmol/L 标准品; 测定管:向 5 mL EP 管中,加入 0.02 mL 待测样本;(需将枪头伸入 EP 管底部加样)。
②  向步骤①各管中,分别依次加入 1.0 mL 酶工作液、0.2 mL 试剂三, 混匀,37℃准确反应 10 min。
③  向步骤②各管中加入 2 mL 试剂四,混匀。
④  紫外可见光分光光度计,于 530 nm 波长,1 cm 光径石英比色皿,双 蒸水调零,测定各管 OD 值。(测定时不能将气泡倒入比色皿中,并 且在 30 min 内检测完毕)。
操作表

/ 空白管 标准管 测定管
双蒸水(mL) 0.02 / /
3 mmol/L 标准品(mL) / 0.02 /
待测样本(mL) / / 0.02
酶工作液(mL) 1 1 1
试剂三(mL) 0.2 0.2 0.2
混匀后,37℃准确反应 10 min 混匀后,37℃准确反应 10 min 混匀后,37℃准确反应 10 min 混匀后,37℃准确反应 10 min
试剂四(mL) 2 2 2

混匀后,1 cm 光径石英比色皿,530 nm 波长,双蒸水调零,测定各管 OD 值

本试剂盒检测组织和细胞样本时,需测定总蛋白浓度,推荐使用 BCA 法

结果计算


注解:
ΔA1:测定 OD 值-空白 OD 值 ΔA2:标准品 OD 值-空白 OD 值
c:标准品浓度(3 mmol/L)
f:样本加入检测体系前的稀释倍数
Cpr:待测样本的蛋白浓度(gprot/L)

附录1 关键数据

1. 技术参数

检测范围 0.05-6.0 mmol/L 平均批间差 1.90%
灵敏度 0.05 mmol/L 平均批内差 1.10%
平均回收率 101% / /

2. 标准曲线(数据仅供参考) 

① 标准曲线(数据仅供参考):

如检测人血清(数据仅供参考):

血清:双蒸水=1: 4稀释,取稀释后的人血清0.02 mL,按操作表检测,结 果如下:

空白管OD值为0.075,标准管OD值为0.491,测定管OD值为0.363,标准 管浓度为3 mmol/L,计算结果为:

按照说明书操作,测定人血清(稀释倍数5,加样量0.02 mL)、HepG2 细胞上清(稀释倍数3,加样量0.02 mL)、小鼠肌肉组织(10%组织匀浆的蛋 白含量4.540 g/L,稀释倍数2,加样量0.02 mL)、和HepG2细胞(蛋白含量1.388 g/L,加样量0.02 mL,)中乳酸含量(如下图):

附录3 问题答疑

问题 可能原因 建议解决方案
测值不稳定,变化比 较大 微量移液器使用不熟练,未严格按照说明书操作 小心加样,避免溅到其它测样管中,操作前认真阅读操作步骤和注意事项
样 本 和 标 准 品 显 色很低 孵育时间太短 保证充足的孵育时间
样本测不出值 样本稀释倍数太大 选择合适稀释倍数,重新检测
样 本 测 量 结 果 >6mmol/L 样本浓度太高 适当稀释样本,重新检测
读数数值低 用不恰当波长检测 选择正确的检测波长
样本测定结果偏高 加完试剂四后未及时测量 加完试剂四后 30  min 内检测完毕

声明
1. 试剂盒仅供研究使用,如将其用于临床诊断或任何其他用途,我公司将 不对因此产生的问题负责,亦不承担任何法律责任。
2. 实验前请仔细阅读说明书并调整好仪器,严格按照说明书进行实验。
3. 实验中请穿着实验服并戴乳胶手套做好防护工作。
4. 试剂盒检测范围不等同于样本中待测物的浓度范围。如果样品中待测物 浓度过高或过低,请对样本做适当的稀释或浓缩。
5. 若所检样本不在说明书所列样本类型之中,建议先做预实验验证其检测有效性。
6. 最终的实验结果与试剂的有效性、实验者的相关操作以及实验环境等因 素密切相关。本公司只对试剂盒本身负责,不对因使用试剂盒所造成的 样本消耗负责,使用前请充分考虑样本可能的使用量,预留充足的样本。


规格

规格或纯度
比色法, 100 assays(96 samples)
英文名称
L-Lactate Assay Kit
储存与运输
储存条件
2-8°C储存
运输条件
低温运输

技术文档

📋 安全数据表 (SDS)

全面的危险、操作、储存及法规合规文件。

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✅ 分析证书 (COA)

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📊 产品数据表

产品规格和应用的快速参考摘要。

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🔬 规格说明书

该级别的完整质量属性和验收标准。

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高级数据

质检证书(CoA,COO,BSE/TSE 和分析图谱)
C of A & Other Certificates(BSE/TSE, COO):
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批号(Lot Number) 证书类型 货号
E2517001 分析证书 L486214
技术文档和文章
溶液计算器

常见问题

什么是「比色法」?
「比色法」是一个明确定义的分析纯度级别,适用于定量分析方法。它规定了最低含量百分比、对常见杂质(水分、重金属、灼烧残渣)的受控限值,以及批间一致性。「比色法」是几个纯度级别之一——请根据方法的灵敏度和监管要求进行选择。
本产品应如何储存?
请于2–8 °C条件下保存。需冷藏保存以维持规定的有效期。
本产品如何运输?
本产品采用湿冰冷藏运输。收货后请立即拆包,并按上述储存条件保存。
如何获取批次专用COA?
每个订单都会随附分析证书(COA),您也可以从账户订单历史中下载。如需订购前的COA,请联系您的客户代表,或使用PDP上的"申请COA"按钮——我们将提供代表性批次的COA。

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