G2503466计算溶液所需的质量、体积或浓度。
为什么选择此级别
，适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。
储存与运输
2-8°C储存,避免反复冻融。低温运输 。请查阅批次 COA 获取详细规格。
质量文档
SDS、COA、产品数据表及规格说明书均可下载。可通过批号查询获取批次 COA。
文献证明
在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。
概述
产品介绍：
Aladdin掌握琼脂糖微球核心制备技术，所制微球的机械性能和筛分性能远超行业标准，可以提供涵盖亲和层析、凝胶过滤、离子交换、疏水层析等多种不同类型的蛋白纯化介质。提供多种规格的填料和预装柱，满足实验室和工业生产规模的生物大分子分离纯化需求。
Ni-NTA 4FF Resin 以琼脂糖微球为基质，通过活化偶联次氮基三乙酸（NTA），再螯合 Ni2+所形成的稳定八面体结构。与亚氨基二乙酸（IDA）相比，具有更好的螯合剂、还原剂、碱性的耐受性，如样品中含有1-10mM EDTA或1-10mM β-巯基乙醇或5mM DTT，可正常纯化；在螯合镍的情况下，也可以用0.1MNaOH清洗。
Ni-NTA 琼脂糖凝胶 FF 主要用于纯化带组氨酸标签（His-Tag）的重组蛋白。纯化原理是利用重组蛋白组氨酸标签的咪唑环可与过渡金属 Ni2+形成稳定的配位键，因此能特异、牢固、可逆地吸附于固定这些金属离子的基质，结合了 His-Tag 重组蛋白的 Ni-NTA 琼脂糖凝胶 FF 一般通过增加咪唑浓度进行竞争洗脱。
基础参数：
基础参数：
基质 | 4%琼脂糖凝胶 |
配基 | -N(CH2COOH)3 |
配基密度 | ≥15 μmol/ml |
填料粒径 | 45-165 μm
|
最大流速 | 800 cm/h |
推荐流速 | 50-100 cm/h |
pH 稳定性 | pH 3-12（长期），pH 2-14（短期）
|
耐反压 | 0.3 MPa |
载量 | ≥40 mg His-tag 重组蛋白/ml |
可耐受试剂
使用方法：
| 还原剂 | 20 mM β-巯基乙醇、0.1 mM DTT |
| 变性剂 | 8 M 尿素、6 M 盐酸胍 |
| 表面活性剂 | 2% Triton X-100、2% Tween 20 |
| 盐 | 1 M KCl、2 M NaCl |
| 其他 | 0.1 mM EDTA、50%甘油、30%乙醇 |
1.色谱柱装填
（1）所有需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度一样，液体最好做脱气处理。
（2）在柱子下端加入蒸馏水，以除去柱子中的空气，关闭柱子出口，在柱内保留少量的蒸馏水。
（3）将琼脂糖凝胶连续倒入柱子时，要用玻璃棒的紧靠柱子内壁引流，以减少气泡的产生，让填料先自然沉降。
（4）柱压不超过 0.3MPa，如果装柱系统中无法测柱压，则正常流速下填装。
（5）填装好的 Ni-NTA 琼脂糖凝胶 FF 柱用 2-5 个柱体积的初始缓冲溶液平衡，建议流速 100cm/h，平衡后的柱子可以用于 His-Tag 重组蛋白的上样和洗脱纯化。
2.上样
（1）推荐缓冲液如下，使用前需使用 0.22 或者 0.45μm 滤膜过滤除菌。也可根据实验需求自行调整。
平衡液（1L）：50 mM NaH2PO4 (7.80 g NaH2PO4·2H2O)，300 mM NaCl (17.54 g NaCl)，10 mM imidazole (0.68 g imidazole)，pH 调至 7.2~7.4。
洗杂液（1L）：50 mM NaH2PO4 (7.80 g NaH2PO4·2H2O)，300 mM NaCl (17.54 g NaCl)，20 mM imidazole (1.36 g imidazole），pH 调至 7.2~7.4。
洗脱液（1L）母液： 50 mM NaH2PO4 (7.80 g NaH2PO4·2H2O)，300 mM NaCl (17.54 g NaCl)，250 mM imidazol，pH 调至 7.2~7.4。
（2）样品的缓冲液应与所选平衡液一致，上柱前使用 0.45μm 滤膜过滤。注意控制加样速度，确保目的蛋白与 Ni2+充分接触，以提高纯化得率。如有多余样品可再次上样，重新流通一次可提高样品与填料的结合力。注意收集流出液，用于后续 SDS-PAGE 检测蛋白的结合情况。
（3）用洗杂液（一般为 8-12 个柱体积）洗涤柱子以去除杂蛋白，直到流出液的 A280 值达到最低且稳定。
平衡液（1L）：50 mM NaH2PO4 (7.80 g NaH2PO4·2H2O)，300 mM NaCl (17.54 g NaCl)，10 mM imidazole (0.68 g imidazole)，pH 调至 7.2~7.4。
洗杂液（1L）：50 mM NaH2PO4 (7.80 g NaH2PO4·2H2O)，300 mM NaCl (17.54 g NaCl)，20 mM imidazole (1.36 g imidazole），pH 调至 7.2~7.4。
洗脱液（1L）母液： 50 mM NaH2PO4 (7.80 g NaH2PO4·2H2O)，300 mM NaCl (17.54 g NaCl)，250 mM imidazol，pH 调至 7.2~7.4。
（2）样品的缓冲液应与所选平衡液一致，上柱前使用 0.45μm 滤膜过滤。注意控制加样速度，确保目的蛋白与 Ni2+充分接触，以提高纯化得率。如有多余样品可再次上样，重新流通一次可提高样品与填料的结合力。注意收集流出液，用于后续 SDS-PAGE 检测蛋白的结合情况。
（3）用洗杂液（一般为 8-12 个柱体积）洗涤柱子以去除杂蛋白，直到流出液的 A280 值达到最低且稳定。
3.洗脱
（1）Ni-NTA 琼脂糖凝胶 FF 最常用的洗脱方法为增加咪唑浓度进行洗脱。
（2）咪唑为碱性，相应缓冲液配制后需要用 HCl 进行调节 pH。
（3）在初次使用 Ni-NTA 琼脂糖凝胶 FF，不知道洗脱的咪唑浓度，建议在结合缓冲液中分别加入 10mM、20mM、50mM、100mM、200mM、500mM 咪唑，浓度从低到高，分别洗脱和收集，通过 SDS-PAGE 电泳等方法鉴定洗脱组份。
（4）有条件的也可以进行线性咪唑梯度洗脱，确定较佳洗脱条件。
4.填料清洗
Ni 柱的在位清洗：在多次使用填料后，需对其进行在位清洗。因为过多的杂质残留会影响柱子的性能，聚集严重会堵塞柱子、导致压力增大流速减缓。在位清洗能有效防止杂质在介质中的聚集，有助于保持介质的载量、流速等基本性能优良。
一般情况下，先用 5-10 个柱体积的超纯水过柱子；
（1）若要除去因离子交换作用而吸附的蛋白，需用 2 mol/L NaCl溶液清洗 2-3 个柱体积，再用超纯水清洗柱子；
（2）若要去除蛋白沉淀或变性物质，可以用 1 mol/L NaOH 溶液清洗柱子 0.5-1h，再用超纯水洗 5-10 个柱体积；
（3）若要去除强结合的疏水性蛋白，则需要用 70%乙醇或 30%异丙醇洗 3-5 个柱体积，再用超纯水洗 5-10 个柱体积。
用途：
一般情况下，先用 5-10 个柱体积的超纯水过柱子；
（1）若要除去因离子交换作用而吸附的蛋白，需用 2 mol/L NaCl溶液清洗 2-3 个柱体积，再用超纯水清洗柱子；
（2）若要去除蛋白沉淀或变性物质，可以用 1 mol/L NaOH 溶液清洗柱子 0.5-1h，再用超纯水洗 5-10 个柱体积；
（3）若要去除强结合的疏水性蛋白，则需要用 70%乙醇或 30%异丙醇洗 3-5 个柱体积，再用超纯水洗 5-10 个柱体积。
用途：
超高刚性
超高刚性琼脂糖基球，耐压骨架支持高流速、大规模的工业化生产
动态载量高
流速下依旧可以保持超高的动态结合能力和特异性吸附效率
产品种类丰富
提供研发及生产阶段的完整解决方案
注意事项：
1. 本产品仅限科学研究使用，不得用于临床诊断和治疗等领域。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
规格
英文名称
Ni-NTA 4FF Resin
储存条件
2-8°C储存,避免反复冻融
运输条件
低温运输
名称和识别符
分子类型
蛋白质
技术文档
常见问题
本产品应如何储存？
请于2–8 °C条件下保存。避免反复冻融。建议按单次用量分装保存。
本产品如何运输？
本产品采用湿冰冷藏运输。收货后请立即拆包，并按上述储存条件保存。
如何获取批次专用COA？
每个订单都会随附分析证书（COA），您也可以从账户订单历史中下载。如需订购前的COA，请联系您的客户代表，或使用PDP上的"申请COA"按钮——我们将提供代表性批次的COA。
相关产品
Ni-NTA 6FF 树脂
Dextrin 亲和层析介质 (MBP tag)-BioReagent, 通过内毒素测试, 50% v/v
DEAE 4FF 离子交换树脂
DEAE 6FF 离子交换树脂
Q 6FF 离子交换树脂
CM 6FF 离子交换树脂 (高流速)-BioReagent, 70% v/v; 90 μm
SP 4FF 离子交换树脂
SP 6FF 离子交换树脂 (高流速)-BioReagent, 70% v/v; 90 μm
4B 凝胶过滤树脂
琼脂糖凝胶6B
4FF 凝胶过滤树脂
琼脂糖凝胶6FF
Ni-IDA 4FF 树脂
Ni-IDA Sanarose 6FF
Phenyl 6FF 树脂
Phenyl 4FF 树脂
Butyl 4FF 树脂
Butyl 6FF 树脂
产品仅提供给经过验证的企业、机构和合格的专业人员用于研发。不适用于人类、动物、诊断或治疗。
Copyright © 2023至今 上海阿拉丁生化科技股份有限公司 保留所有权利。
危险品化学品经营许可证（带存储）