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为什么选择此级别
，适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。
储存与运输
2-8°C储存,避免反复冻融。低温运输 。请查阅批次 COA 获取详细规格。
质量文档
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文献证明
在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。
概述
产品介绍
Aladdin掌握琼脂糖微球心备技术，所制微球的机械性能和筛分性能远超行业标准，可以提供涵盖亲和层析、凝胶过滤、离子交换、疏水层析等多种不同类型的蛋白纯化介质。提供多种规格的填料和预装柱，满足实验室和工业生产规模的生物大分子分离纯化需求。
Ni-IDA 4FF Resin主要用于纯化带组氨酸标签(His-Tag) 的重组蛋白。以琼脂糖微球为基质，通过活化偶联亚氨基二乙酸(IDA)，再螯合Ni2+。其中IDA是金属螯合层析中最常用的配体,与次氮基三乙酸(NTA)相比，具有亲和力强，载量高，可再生重复使用的特点。纯化原理是利用重组蛋白组氨酸标签的咪唑环可与过渡金Ni2+形成稳定的配位键，因此能特异、牢固、可逆地吸附于固定这些金属离子的基质，结合了His-Tag重组蛋白的Ni-IDA琼脂糖凝胶FF一般通过增加咪唑浓度进行竞争洗脱。
基础参数
使用方法
Ni-IDA 4FF Resin主要用于纯化带组氨酸标签(His-Tag) 的重组蛋白。以琼脂糖微球为基质，通过活化偶联亚氨基二乙酸(IDA)，再螯合Ni2+。其中IDA是金属螯合层析中最常用的配体,与次氮基三乙酸(NTA)相比，具有亲和力强，载量高，可再生重复使用的特点。纯化原理是利用重组蛋白组氨酸标签的咪唑环可与过渡金Ni2+形成稳定的配位键，因此能特异、牢固、可逆地吸附于固定这些金属离子的基质，结合了His-Tag重组蛋白的Ni-IDA琼脂糖凝胶FF一般通过增加咪唑浓度进行竞争洗脱。
基础参数
基质 | 4%交联琼脂糖凝胶 |
配基 | IDA |
配基密度 | ≥25 μmol/ml |
填料粒径 | 45-165 μm |
最大流速 | 800 cm/h |
推荐流速 | 50-100 cm/h |
pH 稳定性 | pH 5-12，pH 3-13（脱镍） |
耐反压 | 0.3 MPa |
载量 | ≥40 mg His-tag 重组蛋白/ml |
使用方法
1.色谱柱装填
1.1 所有需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度一至，液体最好做脱气处理。
1.2 在柱子下端加入蒸馏水，以除去柱子中的空气，关闭柱子出口，在柱内保留少量的蒸馏水。
1.3 将琼脂糖凝胶连续倒入柱子时，要用玻璃棒的紧靠柱子内壁引流，以减少气泡的产生，让填料先自然沉降。
1.4 柱压不超过0.3 MPa,如果装柱系统中无法测柱压，则控制流速高于300 cm/h,但是在使用中一般只用最大流速的75%。
1.5 填装好的镍-琼脂糖凝胶FF柱用2- 5个柱体积的初始缓冲溶液平衡，建议流速100 cm/h,平衡后的柱子可以用于His-Tag 重组蛋白的上样和洗脱纯化。
2.上样
2.1 样品一般溶解在pH6-8的初始缓冲液中，提高上样缓冲液的pH值，可以增大载量。
2.2 缓冲液中不能含有EDTA和柠檬酸盐，也最好不含巯基乙醇、DTT 等还原剂。
2.3 常用缓冲液有10-100 mM磷酸钠缓冲液、20-200 mM Tris-HCl缓冲液等。
2.4 在缓冲液中一般要加入0.15-0.5 M的NaCl,以消除离子交换作用。
2.5 在初次使用镍-琼脂糖凝胶FF,推荐使用50mM PBS (50 mM NaH2P04, 0.5 M NaCl, NaOH调节pH7.4)作为初始缓冲液。
3.洗脱
3.1 镍-琼脂糖凝胶FF最常用的洗脱方法为增加咪唑浓度进行洗脱。
3.2 咪唑为碱性，相应缓冲液配制后需要用HCI进行调节pH。
3.3 在初次使用镍-琼脂糖凝胶FF,不知道洗脱的咪唑浓度,推荐在初始缓冲液中分别加入10mM、20mM、50 mM、100 mM、200 mM、500 mM咪唑，浓度从低到高，分别洗脱和收集，通过SDS-PAGE电泳等方
法鉴定。
3.4 有条件的也可以进行线性咪唑梯度洗脱，确定较佳洗脱条件。
拓展应用
1. 更换不同的螯合离子
1.1 IDA螯合的镍-琼脂糖凝胶FF可以用EDTA脱掉镍，脱掉镍后可以用0.1-1.0M NaOH进行清洗凝胶，再重新螯合镍，使凝胶焕然一新。也可以螯合其他金属离子，如Cu2+, Zn2+, Co2+, Fe3+等, 进行多样纯化。
1.2 脱镍方法:用5-10个柱体积蒸馏水淋洗柱子，再用5-10个柱体积的100 mM EDTA淋洗柱子，再用2-3个柱体积的0.5 M NaCl洗掉残留的EDTA。
1.3 螯合金属离子方法:用2-5个柱体积的蒸馏水充分平衡脱镍的柱子，用0.1-0.3M金属盐溶液过柱5-10个柱体积螯合金属，螯合后用5-10个柱体积蒸馏水淋洗，去除未螯合的金属离子。
1.4 金属盐可以为硫酸盐或盐酸盐，如为NiSO4、CuSO4、 ZnS04、 CoCl2、 PbS04 等，金属盐溶液应中性或弱酸性，且必须经过过滤，以防止金属盐在胶上沉淀。
1.5 如果是Fe3+必须在低pH下螯合(pH3) ，以防止Fe3+产生沉淀，一般可以加入少量盐酸和硫酸保持pH。
2. 多种洗脱方法
2.1 降低pH洗脱:大多数蛋白在pH4-6会被洗脱下来，也可以在pH3-4,缓冲液可以是醋酸钠、柠檬酸或磷酸盐缓冲体系。
2.2 竞争性洗脱:线性增加或一步增加与金属离子有亲和力的物质，如0-0.5M咪唑, 0-50 mM组氨酸，0-2 M NH4Cl。梯度洗脱最好在起始缓冲液的恒定pH下进行。
2.3 螯合剂洗脱: EDTA、 EGTA等螯合剂会与金属离子产生作用力，导致蛋白被洗脱下来。这种方法不能使不同的蛋白分离，此外会影响蛋白吸附，导致融合蛋白不能挂柱。
2.4 所有上述情况中,缓冲液中必须加入0.15-0.5 M的NaCl以消除离子交换作用。
2.5 当螯合离子配基是Cu2+时，有以下的三种操作方式。
降低pH洗脱:
上样缓冲液: 50 mM NaH2PO4,0.5 M NaCl, pH 7.4
洗脱缓冲液: 50 mM NaH2PO4,0.5 M NaCl, pH 3.5
竞争性洗脱:
上样缓冲液: 50 mM NaH2PO4,1 M NaCl, pH 7.4
洗脱缓冲液: 50 mM NaH2PO4,1 M NH4Cl, pH 7.4
螯合剂洗脱:
上样缓冲液: 50 mM NaH2PO4, 0.5 M NaCl, pH 7.4
洗脱缓冲液: 50 mM NaH2PO4, 0.5 M NaCl, 50 mM EDTA, pH7.4
注:配制的缓冲液需要用NaOH或HCl调节至要求的pH。使用降低pH和螯合剂洗脱会使金属离子脱落,下次使用得重新螯和金属离子，最常用的为竞争性洗脱。
再生、清洗:
1. 凝胶的再生
1.1 多次使用后或需要更换螯合的金属离子，必须将胶脱镍再生。脱镍方法:用5-10个柱体积蒸馏水淋洗柱子，再用5-10个柱体积的100 mM EDTA淋洗柱子，再用2-3个柱体积的0.5 M NaCl洗掉残留的EDTA。.
1.2 多次使用的柱子脱镍后-般需要清洗。清洗方法:用0.1-1.0M NaOH反向清洗柱子,流速50 cm/h,保持1-2h,能去除结合强的杂质，同时也能去除热源。
1.3 清洗后需要重新螯合金属离子。螯合方法:用2-5个柱体积的蒸馏水充分平衡脱镍的柱子，用0.1-0.3M金属盐溶液过柱5-10个柱体积螯合金属，螯合后用5-10个柱体积蒸馏水淋洗，去除未螯合的金属离子。
2. 在位清洗
2.1 除去因离子交换作用吸附的蛋白，用2-3个柱体积2 M的NaCl溶液反向清洗柱子。
2.2 除去强的疏水性蛋白和脂质等，用4个柱体积的70%的乙醇或者30%的异丙醇反向清洗柱子。
2.3 除去蛋白沉淀、疏水性蛋白，参照凝胶的再生。
用途：
超高刚性
超高刚性琼脂糖基球，耐压骨架支持高流速、大规模的工业化生产
动态载量高
流速下依旧可以保持超高的动态结合能力和特异性吸附效率
产品种类丰富
提供研发及生产阶段的完整解决方案
注意事项
1. 本产品仅限科学研究使用，不得用于临床诊断和治疗等领域。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
规格
英文名称
Ni-IDA 4FF Resin
储存条件
2-8°C储存,避免反复冻融
运输条件
低温运输
名称和识别符
分子类型
聚合物
技术文档
高级数据
质检证书（CoA,COO,BSE/TSE 和分析图谱)
C of A & Other Certificates(BSE/TSE, COO):
输入批号以搜索分析图谱:
溶液计算器
常见问题
本产品应如何储存？
请于2–8 °C条件下保存。避免反复冻融。建议按单次用量分装保存。
本产品如何运输？
本产品采用湿冰冷藏运输。收货后请立即拆包，并按上述储存条件保存。
如何获取批次专用COA？
每个订单都会随附分析证书（COA），您也可以从账户订单历史中下载。如需订购前的COA，请联系您的客户代表，或使用PDP上的"申请COA"按钮——我们将提供代表性批次的COA。
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