计算溶液所需的质量、体积或浓度。
BioReagent 级 ,适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。
2-8°C储存,避光,室温。低温运输 。请查阅批次 COA 获取详细规格。
SDS、COA、产品数据表及规格说明书均可下载。可通过批号查询获取批次 COA。
在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。
植物体内的碳素营养状况以及农产品的品质形状,常以糖含量作为重要指标,单糖和某些寡糖(如麦芽糖)含有游离的醛基或酮基,具有还原性,属于还原糖;多糖和蔗糖等属于非还原糖,可以利用非还原糖能被酸水解为单糖的特性通过测定水解后的单糖含量对总糖进行测定。
检测原理:还原糖在碱性加热条件下被氧化成糖酸,3,5-二硝基水杨酸被还原为棕红色的氨基化合物,在一定范围内还原糖的量与棕红色产物的颜色深浅程度呈一定比例关系,在540nm处用酶标仪测定棕红色物质的吸光度,该吸光度值与还原糖含量呈线性关系,利用标准曲线计算样品中的还原糖和总糖的含量。该试剂盒仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途。
| 组分货号 | 组分名称 | 物理外观 | 100T | 300T | 储存温度 | 单次测试使用量 |
| P1501777A | Glu标准 (1mg/mL) | 无色透明液体 | 1 mL | 1 mL | 2-8℃ | 按需求使用 |
| P1501777B | DNS检测液 | 黄色透明液体 | 10 mL | 30 mL | RT. 避光. | 每次反应需使用100 μL |
| P1501777C | 显色液 (总糖使用) | 棕色液体 | 5 mL | 10 mL | RT. 避光. | 每次反应需使用50 μL |
注:整套试剂盒未拆封时于2-8℃避光保存,自生产之日起有效期 1 年;拆封后各组分稳定性不同,部分组分可转至RT保存(有效期仍为 1 年),其余需继续2-8℃保存。请严格按照组分表标注温度分类存放,保障试剂性能。
自备仪器和试剂
1、蒸馏水、盐酸溶液、氢氧化钠溶液
2、50mL离心管、1mL离心管、离心机、水浴锅或恒温箱、酶标仪、96 孔板、水浴锅
实验流程
1、还原糖的提取
1.1 称取植物样品0.5~3g,剪碎,加入蒸馏水约3mL匀浆,转移至烧杯或三角瓶中,用12mL蒸馏水冲洗研磨器2~3次,洗出液也转移至该容器。
1.2 50℃水浴30min,并不时搅拌,以便还原糖彻底浸出。
1.3 将沉淀和浸出液转移至50mL离心管,4000g离心5min。
1.4 留取上清液,向沉淀中加入20mL蒸馏水,混匀,再次4000g离心5min。
1.5 留取上清液,将2次获得的上清液合并,用蒸馏水定容至100mL(提取液),混匀,作为还原糖待测液。
2、总糖的水解和提取
2.1 称取植物样品0.5~3g,剪碎,加入蒸馏水约3mL匀浆,转移至烧杯或三角瓶中,用12mL蒸馏水冲洗研磨器2~3次,洗出液也转移至该容器。
2.2 向容器中加入10mL 6M盐酸溶液,搅拌均匀,然后置于沸水浴中加热水解30min,并不时搅拌。
2.3 取2滴滴加于载玻片上,滴加1滴显色液(约50μL),检查水解是否完全,如已经水解完全,则不显示蓝色。
2.4 水解完毕后,冷却至室温,加入6M 氢氧化钠溶液,使溶液pH至7.4,用蒸馏水定容至100mL,混匀,4000g离心5min或过滤。
2.5 取上清或滤液10mL,用蒸馏水定容至100mL,成稀释10倍的总糖水解液(提取液),取50μL总糖水解液,测定其还原糖的含量。
3、葡萄糖标准品配制
取干净离心管或试管,按下表操作,依次获得系列浓度的Glu标准。
| 标准品工作液 | Glu标准 (1mg/mL)(mL) | 蒸馏水 (mL) | 浓度 (mg/mL) |
| 1 | 0.01 | 0.04 | 0.2 |
| 2 | 0.02 | 0.03 | 0.4 |
| 3 | 0.03 | 0.02 | 0.6 |
| 4 | 0.04 | 0.01 | 0.8 |
| 5 | 0.05 | 0 | 1.0 |
4、加样
取1mL离心管,按照下表设置空白孔、标准孔、测定孔,溶液应按照顺序依次加入,并注意避免产生气泡,小心混匀。如果样品中的糖浓度过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定,样品的检测最好能设置2~3平行孔,求平均值。
| 试剂(μL) | 空白孔 | 标准孔 | 测定孔 |
| 蒸馏水 | 50 | / | / |
| Glu标准品(1-5) | / | 50 | / |
| 提取液 | / | / | 50 |
| DNS检测液 | 100 | 100 | 100 |
沸水浴中准确煮沸5min,取出,自来水冷却至室温,补加蒸馏水250μL。
5、还原糖测定
混匀,依次抽取300uL转移至相应96孔板中,以空白孔调零测定540nm处标准孔、测定孔的吸光度。
6、结果计算
6.1 标准曲线的绘制
以Glu标准品(1-5),即标准葡萄糖浓度(mg/mL)为横坐标,以相应的吸光度为纵坐标,作图得标准曲线,根据提取液得吸光度在标准曲线上查出相应得葡萄糖浓度。
6.2 含量计算
还原糖的百分含量:
100g样品中还原糖含量(g)=(c×V T )/(m×1000)×100= (c×V T )/(m×10)
总糖的百分含量:
100g样品中总糖含量(g)=(c×N×V T )/(m×1000)×100×0.9=(c×N×V T )/(m×10)×0.9
参数说明
c:从标准曲线查的糖量(mg/mL)
V T :提取液的总体积,100ml
m:植物样品的质量,g
N:总糖水解液的稀释倍数,10
7、试剂开封后请尽快使用, 以防影响后续实验效果。
| 组分货号 | 组分名称 | 物理外观 | 100T | 300T | 储存温度 | 单次测试使用量 |
| P1501777A | Glu标准 (1mg/mL) | 无色透明液体 | 1 mL | 1 mL | 2-8℃ | 按需求使用 |
| P1501777B | DNS检测液 | 黄色透明液体 | 10 mL | 30 mL | RT. 避光 | 每次反应需使用100 μL |
| P1501777C | 显色液 (总糖使用) | 棕色液体 | 5 mL | 10 mL | RT. 避光 | 每次反应需使用50 μL |
通过匹配包装上的批号来查找并下载产品的 COA,每批产品都进行了严格的验证,您可放心使用!
| 批号(Lot Number) | 证书类型 | 货号 |
|---|---|---|
| 分析证书 | P1501777 | |
| 分析证书 | P1501777 | |
| 分析证书 | P1501777 | |
| 分析证书 | P1501777 | |
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| 分析证书 | P1501777 | |
| 分析证书 | P1501777 |