计算溶液所需的质量、体积或浓度。
ActiBioPure™,EnzymoPure™,生物活性,重组,高性能 级 提供 ≥90%(SDS-PAGE) 纯度,适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。
-20°C储存,避免反复冻融。超低温运输 。请查阅批次 COA 获取详细规格。
SDS、COA、产品数据表及规格说明书均可下载。可通过批号查询获取批次 COA。
在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 3 篇同行评审文献引用。
用途
用于酶法肌酐试剂的研发和大量配制。
酶学性质(注意 -3 、2+为上标)
来源: 微生物
酶学委员会编号: EC 1.5.3.1
分子量: 45 kDa (SDS-PAGE)
等电点: 5.3
Km值: 5.6×10⁻³M(Sarcosine)
抑制剂: SDS,Zn²⁺,Cd²⁺
最适pH: 8.0 图1
最适温度: 50℃ 图2
pH稳定性: 7.0-9.5 (25℃,16h) 图3
热稳定性: 50°C以下稳定 (pH7.5,30min) 图4
稳定性: -25~-15℃静置保存12个月保持90%以上活性 图5
活性测定方法
1、原理
反应生成的醌亚胺(Quinoneiminedye)可在555nm检测。
2、酶活定义
单位酶活定义为在下述条件下,每分钟催化生 成 1 μmol H2O2 所需的酶量。
3、试剂准备
试剂I:0.2M Tris-HCl缓冲液,pH8.0。
试剂II:1.0M 肌氨酸溶液(8.9g肌氨酸溶解到100mLUP水中)。
试剂III:1kU/mL POD。
试剂IV:50mM4-AA溶液(1.016g4-AA溶于100mLUP水)。
试剂V:50mM TOOS溶液(1.657gTOOS溶于100mLUP水)。
酶稀释液:20mM Tris-HCl,pH8.0,2mM EDTA。
按如下配制反应混合物:
试剂I 5mL
试剂II 10mL
试剂III 0.25mL
试剂IV 1.5mL
试剂V 1.5mL双蒸水31.75mL
共50mL,可用于50次反应。
4、操作步骤
1.向1mL比色皿中加入1mL反应混合物。
2.37°C温浴5min。
3.向反应混合物中加入20μL待测酶液,混匀。
4.37°C反应,在555nm检测样品1min内的吸光度变化(∆As)
*用酶稀释液替代酶液,其它步骤相同,所得溶液吸光度为空白吸光度(∆Ab)
∆A=∆As-∆Ab
5、 活力计算
1.020:反应液总体积(mL);
0.020:酶液体积(mL);
t:反应时间(1min);
df:稀释倍数;
1/2:1摩尔过氧化氢生成1/2摩尔醌亚胺染料;
1.0:光路长度(cm);
C:酶浓度(mg/mL);
39.2:标准反应条件下,生色基团在555nm处毫摩尔吸光系数(cm2/μmol)。
Application
Used in the development and mass formulation of enzymatic creatinine reagents.
Enzymatic properties (note that -3, 2+ are superscripts)
Source: Microorganism
Enzyme Committee Number: EC 1.5.3.1
Molecular weight: 45 kDa (SDS-PAGE)
Isoelectric point: 5.3
Km value: 5.6×10⁻³M(Sarcosine)
Inhibitors: SDS, Zn²⁺, Cd²⁺
Optimal pH: 8.0 Figure 1
Optimum temperature: 50℃ Figure 2
pH stability: 7.0-9.5 (25℃,16h) Figure 3
Thermal stability: Stable below 50°C (pH7.5,30min) Figure 4
Stability: -25 ~ -15℃ standing store for 12 months
More than 90% activity Figure 5
Assay method for activity
1. Principle
The resulting Quinoneiminedye can be detected at 555nm.
2. Definition of enzyme activity
Unit enzyme activity is defined as the amount of enzyme required to catalyze the production of 1 μmol H2O2 per minute under the following conditions.
3. Reagent preparation
Reagent I: 0.2M Tris-HCl buffer, pH8.0.
Reagent II: 1.0M sarcosine solution (8.9g sarcosine dissolved in 100mLUP water).
Reagent III: 1kU/mL POD.
Reagent IV: 50 mm4-AA solution (1.016g4-AA dissolved in 100mLUP water).
Reagent V: 50mM TOOS solution (1.657gTOOS dissolved in 100mLUP water).
Enzyme diluent: 20mM Tris-HCl, pH8.0, 2mM EDTA.
Prepare the reaction mixture as follows:
Reagent I 5mL
Reagent II 10mL
Reagent III 0.25mL
Reagent IV 1.5mL
Reagent V 1.5mL double steaming water 31.75mL
A total of 50mL can be used for 50 reactions.
4. Operation procedure
1. Add 1 ml reaction mixture to 1mL colorimetric dish.
2.37°C temperature bath for 5min.
3. Add 20μL of enzyme liquid to the reaction mixture and mix well.
4.37°C reaction, detection of sample absorbance change within 1min at 555nm (∆As)
* Replace enzyme liquid with enzyme diluent, other steps are the same, the absorbance of the resulting solution is blank absorbance (∆Ab)
∆A=∆As-∆Ab
5. Vitality computing
1.020: total volume of reaction liquid (mL);
0.020: enzyme liquid volume (mL);
t: Reaction time (1min);
df: dilution ratio;
1/2:1 mole of hydrogen peroxide to generate 1/2 mole of quinone imide dye;
1.0: optical path length (cm);
C: Enzyme concentration (mg/mL);
39.2: Under standard reaction conditions, the millimolar absorption coefficient of the color group at 555nm (cm2/μmol).
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| 批号(Lot Number) | 证书类型 | 货号 |
|---|---|---|
| 分析证书 | rp216177 |
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