储存缓冲液：20% (v/v) Ethanol
UltraBio™ Strep Tactin琼脂糖磁珠由NHS活化的琼脂糖磁珠偶联Strep-Tactin制备形成。
该产品能够快速分离纯化Strep-tag II标签蛋白，Strep-Tactin与链霉亲和素相比，对Strep-Tag II 的亲和能力更强大，且分离纯化条件温和，在生理条件下即可洗脱。Strep-Tag II 与其它标签相比，分子量更小，仅为1kDa左右，对融合后的蛋白质结构和功能影响更小，能够有效保留蛋白质的活性，一步提取即可获得纯度更高的蛋白。配合自动化的提取纯化仪器，能够实现快速、高通量富集目的蛋白的目的。
本产品每毫升磁珠悬液含约20%琼脂糖磁珠沉淀。
包装规格：20%（v/v）悬液
参数
| 指标
|
基质
| 琼脂糖
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配基
| ~6mg Strep-Tactin/mL Gel
|
| 含量 | Slurry: 20%
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粒径
| 10-37 μm |
载量
| ~7mg Strep-tag II 蛋白/mL Gel
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保存
| 2-8℃ (20% 乙醇）
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使用说明：
一、缓冲液配方
| 缓冲液 | 配方 |
Binding/Wash Buffer
| 10mM Tris-HCl, 150mM NaCl, 1mM EDTA, pH 8.0
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Elution Buffer
| 50mM d-Biotin in Binding Buffer
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Neutrilization Buffer
| 0.5M NaOH or 1mM HABA in Binding Buffer
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Storage Buffer
| 20% Ethanol or PBST, 0.05% ProClin 300 |
二、操作步骤
1、样品处理
(1) 菌体内表达蛋白：菌体用适量的Binding Buffer稀释，如实验需要，可加入蛋白酶抑制剂（如终浓度为1mM PMSF），重悬菌体，冰浴超声裂解菌体，即为粗蛋白样品。
(2) 胞外表达蛋白：离心取上清液加入等量Binding Buffer稀释，即为粗蛋白样品。
(3) 动物细胞胞内表达蛋白：收集细胞PBS洗涤1次后弃上清；接着用适量含1% (v/v) Triton X-100或1% (v/v) NP-40的Binding Buffer重悬，加入蛋白酶抑制剂（如1mM的PMSF），冰浴10min，即为粗蛋白样品。
2、磁珠预处理
一般情况下，磁珠的使用量是由使用者根据目标蛋白产量和磁珠载量信息计算获得。
(1) 充分涡旋混匀后，立即取适量磁珠悬液于离心管中，然后将离心管置于磁分离器上，澄清后吸弃上清液。
(2) 加入等体积的Binding Buffer，取下离心管后涡旋混匀10s，后置于磁分离器上，澄清后吸弃上清液，重复此操作1次。
3、目标蛋白与磁珠结合
(1) 将5-10mL粗蛋白样品转移到装有已预处理磁珠的离心管中，盖紧离心管盖；
(2) 将离心管涡旋震荡15s后将其置于旋转混合仪上，旋转混合30min或2-8℃混合1h；
(3) 混合结束后，将其置于磁力架上，颠倒混合数次，润洗管壁和管盖上的磁珠，上清澄清后移去上清液到新的离心管中以备后续检测。
4、磁珠洗涤
向上述磁珠中加入5~10mL Washing Buffer，漩涡混合2min，磁性分离，移出清洗液到新的离心管中，以备取样检测；重复操作该步骤。
5、目标蛋白洗脱
向磁珠管中加入2~5mL Elution Buffer（用户可根据目标蛋白浓度需求改变洗脱体积）于离心管中，盖紧离心管盖，然后将离心管置于垂直混合仪上，室温垂直混合洗脱10min；磁性分离，收集洗脱液到新的离心管中，即为纯化的目标蛋白样品；
注：若需要可重复上述步骤1次，收集样品到新离心管以检测蛋白是否洗脱完全。
6、磁珠再生和保存
(1) NaOH再生：洗脱后的磁珠按照以下顺序进行洗涤，5~10mL纯化水洗涤3次、5~10mL 0.5M NaOH 洗涤3次、纯水洗涤至中性，加入10mL保存液，置于2~8℃保存。
(2) HABA 再生：用脱硫生物素洗脱目标蛋白的磁珠还可以用HABA缓冲液再生，加入5~10mL 1mM HABA洗涤磁珠5次，接着用Binding Buffer洗涤磁珠至磁珠本身颜色，每次洗涤5min，最后加入10mL保存液，将磁珠放置2~8°C保存。
三、蛋白纯化流程的优化
以上操作流程适用于大部分Strep-Tag II 标签蛋白的纯化，根据目标蛋白与 Strep-Tactin 蛋白纯化磁珠的结合性能不同，用户可以从以下几个方面对纯化流程进行优化， 以提高目标蛋白的回收率和纯度。
1、提高目标蛋白回收率的参考方法：
a. 延长蛋白溶液与磁珠孵育的时间；
b. 添加合适的蛋白酶抑制剂，防止目标蛋白降解；
c. 增加磁珠用量；
d. 延长洗脱目标蛋白的时间或增加洗脱次数。
2、提高目标蛋白纯度的参考方法：
a. 在纯化过程中添加合适的蛋白酶抑制剂，防止目标蛋白降解；
b. 延长洗涤的时间，增加洗涤次数。
注意事项：
1、磁珠使用和保存过程中应避免冷冻、干燥和高速离心等操作；
2、 本产品可以重复使用，重复使用时，建议纯化同种蛋白，纯化不同种类的蛋白时，建议使用新的磁珠，以防交叉污染；
3、 本产品仅供研究使用。
ZJ25F0927611
危险品化学品经营许可证（带存储）