四甲基罗丹明-5-异硫氰酸盐 (5-TRITC; G 异构体)

CAS: 80724-19-2 货号: T639043 分子式: C25H21N3O3S 分子量: 443.518 PubChem CID: 2762684
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级别和纯度: BioReagent ? 生物试剂级(BioReagent)—— 经测试适用于生命科学和分子生物学。适用于需要生物相容性的细胞培养、检测和生化工作。 生物染色剂 ? 生物染色剂级 —— 经表征用于细胞和组织染色的染料。适用于注重染色一致性的组织学和显微镜检查。 适用于荧光分析 ? 荧光分析级 —— 荧光杂质极低,谱图洁净。适用于背景会造成干扰的荧光检测。 用于显微镜 ? 显微镜级 —— 适用于样品制备和成像的试剂/染料。适用于需要清晰度和低背景的显微镜检查。 ≥90%
别名
四甲基罗丹明-5-异硫氰酸酯(5-TRITC;G 异构体) | 四甲基罗丹明-5-异硫氰酸盐 | 5-TRITC | G 异构体
储存条件
避光,-20°C储存
运输条件
超低温运输
应用
Fluorescence Analysis, 细胞染色
★
规格
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T639043-1mg
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文献证明

在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。

概述

FITC和TRITC是结构最简单、也最常用的蛋白质荧光标记试剂之一。这类异硫氰酸酯化合物可与蛋白质上的氨基、巯基、咪唑基、酪氨酸基或羰基发生交联反应。不过,通常只有伯胺和仲胺衍生物能形成稳定产物。反应在pH 8-9条件下效率最高,且必须在不含氨基的缓冲液 (如碳酸盐/碳酸氢盐缓冲液)中进行。请勿使用Tris缓冲液,因其含伯胺,会与目标蛋白竞争标记反应。当异硫氰酸酯活化荧光染料的摩尔过量20-25倍时,可在每个抗体或其他蛋白分子上有效标记多个荧光基团。未反应及水解的多余试剂可通过透析或凝胶过滤去除。

摩尔消光系数:100,000 M⁻¹・cm⁻¹ (544 nm,甲醇中),激发/发射波长:541/572 nm

TRITC抗体标记方法
本方法参考 Larsson² 改进

所需材料
1. TRITC:用DMSO配制成1 mg/mL溶液。
2. 偶联缓冲液:100 mM碳酸盐/碳酸氢盐缓冲液,pH 9.0。
3. 抗体溶液:将抗体透析至偶联缓冲液中,浓度6 mg/mL。

操作步骤
1. 在搅拌条件下,向1 mL浓度为6 mg/mL的抗体溶液中缓慢加入35 μL TRITC溶液,充分混匀。
2. 室温避光孵育2小时。
3. 通过凝胶过滤去除多余及已水解的TRITC。

补充说明
组织切片中的荧光淬灭 (光漂白)有时可通过在碱性缓冲介质 (pH 9)中封片来减轻²。有多种试剂可与FITC和 /或TRITC衍生物联用以抑制淬灭,例如将0.1-0.25 M没食子酸正丙酯溶于甘油中,适用于FITC或TRITC³。对于FITC衍生物,还可在甘油封片缓冲液中加入1 μg/mL至1 mg/mL的邻苯二胺或对苯二胺²³。

参考文献
1. Horisberger, M. 1984. In Immunolabeling for Electron Microscopy. Polak, J., Varndel, I. Ed. Elsevier: Amsterdam, p. 98.
2. Larsson, L. (1988). Immunocytochemistry: Theory and Practice. CRC. Boca Raton, 77-83, 224-225.
3. Goding, J. (1986). Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, 2nd ed. Academic, London.

FITC and TRITC are among the most simple and commonly used reagents for protein fluorescent labeling. These isothiocyanates will crosslink to amino, sulfhydryl, imidazoyl, tyrosyl or carbonyl groups on a protein. However, only the derivatives of primary and secondary amines generally yield stable products. Reactions are most efficient at pH 8-9, and must be performed in an amine-free buffer such as carbonate/bicarbonate. Avoid Tris buffer, which is a primary amine that will compete with the intended labeling reaction. Antibody and other proteins can be effectively labeled with several fluorophore tags per protein molecule when reacted with a 20- to 25-fold molar excess of isothiocyanate-activated fluorophore. Excess nonreacted and hydrolyzed reagent can be removed by dialysis or gel filtration.


Extinction Coeff: 100,000 M⁻¹ cm⁻¹ (at 544 nm in methanol); Ex/Em Wavelength =541/572 nm


Procedure for Labeling an Antibody with TRITC

This method is adapted from Larsson²


Materials Required

1. TRITC: dissolve in DMSO at 1 mg/ml

2. Conjugation buffer: 100 mM carbonate/bicarbonate buffer, pH 9.0

3. Antibody solution: dialyze antibody into conjugation buffer at 6 mg/ml


Procedure

1. While stirring, slowly add 35 μl of TRITC to 1 ml of the 6 mg/ml antibody solution; mix thoroughly.

2. Incubate for 2 hours at room temperature in the dark.

3. Remove excess and hydrolyzed TRITC by gel filtration.


Additional Information

Fading (photobleaching in tissue sections) can sometimes be reduced by mounting in an alkaline buffered media (pH 9).² There are several reagents that may be used with FITC and/or TRITC derivatives to prevent fading including n-propylgallate at 0.1-0.25 M dissolved in glycerol for FITC or TRITC.³ For FITC derivatives, o- or p-phenylenediamine added to the mounting buffer from 1 μg/ml to 1 mg/ml in glycerin also may be used.²³


References

1. Horisberger, M. 1984. In Immunolabeling for Electron Microscopy. Polak, J., Varndel, I. Ed. Elsevier: Amsterdam, p. 98.

2. Larsson, L. (1988). Immunocytochemistry: Theory and Practice. CRC. Boca Raton, 77-83, 224-225.

3. Goding, J. (1986). Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, 2nd ed. Academic, London.


规格

别名
四甲基罗丹明-5-异硫氰酸酯(5-TRITC;G 异构体) | 四甲基罗丹明-5-异硫氰酸盐 | 5-TRITC | G 异构体
英文别名
Tetramethylrhodamine-5-Isothiocyanate | 5-TRITC | G isomer
规格或纯度
BioReagent,生物染色剂,适用于荧光分析,用于显微镜,≥90%
稳定性与储存
Store at -20℃ long term (36 months). Store in the dark.
英文名称
Tetramethylrhodamine-5-Isothiocyanate(5-TRITC; G isomer)
储存条件
避光,-20°C储存
运输条件
超低温运输
纯度
≥90%
Excitation(nm)
Green Laser(532nm)
Emission(nm)
572nm
Ex/Em(nm)
Ex:541nm;Em:572nm
产品线
生物产品
名称和识别符
分子类型
小分子
Isomeric SMILES
CN(C)C1=CC2=C(C=C1)C(=C3C=CC(=[N+](C)C)C=C3O2)C4=C(C=C(C=C4)N=C=S)C(=O)[O-]
PubChem CID
分子量
443.518

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批号(Lot Number) 证书类型 货号
ZJ26F0535138 分析证书 T639043
ZJ26F0535139 分析证书 T639043
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