重组乳酸脱氢酶(LDH)

CAS: 9028-36-8 货号: D649636 EC号: 232-829-0
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级别和纯度: 生物活性 ? 生物活性级(Bioactive)—— 经验证在功能检测中保持生物活性。当分子须具有功能活性而不仅是纯度时使用。 重组 ? 重组(Recombinant)—— 通过重组表达生产,序列确定、批次稳定。适用于来源明确、无动物源的可重现蛋白。 ActiBioPure™ ? ActiBioPure™ —— 阿拉丁面向生物活性和重组产品的优质系列。当同时需要高纯度和保持生物活性时使用。 高性能 ? 高性能级 —— 纯度和性能特性经过优化。适用于普通等级无法满足的灵敏分析。 EnzymoPure™ ? EnzymoPure™ —— 阿拉丁的高质量酶解决方案系列。当酶纯度和明确活性决定检测或工艺性能时使用。 ≥90%(SDS-PAGE) ≥420U/mg enzyme powder
Accession #
Q8CN22
表达系统
E. coli
生物活性
≥420U/mg enzyme powder
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规格
库存
价格
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5KU
D649636-5KU
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¥509.90
10KU
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为什么选择此级别

ActiBioPure™,EnzymoPure™,生物活性,重组,高性能 级 提供 ≥90%(SDS-PAGE) 纯度,适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。

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储存与运输

避光,-20°C储存,干燥,避免反复冻融。超低温运输 。请查阅批次 COA 获取详细规格。

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质量文档

SDS、COA、产品数据表及规格说明书均可下载。可通过批号查询获取批次 COA。

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文献证明

在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 2 篇同行评审文献引用。

概述

Lactate Dehydrogenase (LDH) 是一种以 NAD⁺或 NADP⁺为受体、作用于供体 CH-OH 基团上的氧化还原酶,可以催化 D-乳酸氧化生成丙酮酸。D-Lactate dehydrogenase 广泛存在于细菌和真菌中,常用于生化研究。


用途

用于谷草转氨酶,谷丙转氨酶等试剂的研发和大量配制。


酶学性质

来源:微生物
分类:EC 1.1.1.28
分子量:45 kDa (SDS-PAGE)
等电点:4.5
Km 值:2.2×10⁻⁶M (丙酮酸)
抑制剂:Ag⁺,Hg²⁺
最适 pH:6.5-7.0                                                               图 1
最适温度:45℃                                                                 图 2
pH 稳定性:5.5-10.0 (25℃, 16 h)
热稳定性:50℃以下稳定 (pH 7.0, 30 min)
稳定性:-25~-15℃静置保存 12 个月保持90%以上活性

保护剂:BSA


活性测定方法 

原理  

  

反应消耗的NADH可用分光光度计在 340 nm检测。


酶活定义 

单位酶活定义为在下述条件下,每分钟氧化1 μmol NADH 所需的酶量。


试剂准备

试剂 I:称取0.04 g丙酮酸钠,用0.1 M, pH 7.7 Tris-HCl缓冲液溶解并定容至100 mL。 

试剂 II:称取2.11 g CAPS,用80 mL水溶解, 用NaOH调节pH至9.7,加入120 mg NADH, 用双蒸水定容至100 mL。 

酶稀释液:10 mM, pH 7.0磷酸钾缓冲液,并 加入BSA至终浓度0.1%。 

样品:用预冷的酶稀释液将酶稀释至1-2 U/mL。 


操作步骤

4.1 向1 mL比色皿中加入1 mL试剂I,20μL待 测样品,混匀。

4.2 将反应混合物在37℃预热5 min。

4.3 向反应混合物中加入0.2 mL试剂 II,混匀,37℃反应,并用分光光度计在340 nm下,记录1 min内的吸光度变化(∆As)

*用酶稀释液替代酶液,其它步骤相同,所得溶液吸光度为空白吸光度(ΔAb​)

  ∆A=∆As-∆Ab 


活力计算  


1.22:反应液总体积(mL); 

0.02:酶液体积(mL); 

1.0:光路长度 (cm); 

df:稀释倍数; 

C:酶浓度( mg/mL); 

6.22:标准反应条件下,生色基团在340 nm处毫摩尔吸光系数(cm 2/μmol)。

 Lactate Dehydrogenase (LDH) is an oxidoreductase that uses NAD⁺ or NADP⁺ as an acceptor and acts on the donor CH-OH group, and can catalyze the oxidation of D-lactate to pyruvate. D-Lactate dehydrogenase widely exists in bacteria and fungi, and is often used in biochemical research.


Application: 

Used in the research and development and large-scale formulation of reagents such as glutamate transaminase.


Enzymatic Properties

Source: Microorganism

Classification: EC 1.1.1.28

Molecular Weight: 45 kDa (SDS-PAGE)

Isoelectric Point: 4.5

Km Value: 2.2×10⁻⁶ M (Pyruvate)

Inhibitors: Ag⁺, Hg²⁺

Optimal pH: 6.5-7.0                                                                                                        (Fig.1)

Optimal Temperature: 45℃                                                                                            (Fig.2)

pH Stability: 5.5-10.0 (25℃, 16 h)                                                                                  (Fig.3)

Thermal Stability: Stable below 50℃ (pH 7.0, 30 min)                                                   (Fig.4)

Stability: Store at -25~-15℃ in the dark, maintain over 90% activity for 12 months       (Fig.5)

Protectant: BSA

Assay Method

Principle  

   

The NADH consumed in the reaction can be detected at 340 nm using a spectrophotometer.


Enzyme Activity Definition

One unit of enzyme activity is defined as the amount of enzyme required to oxidize 1 μmol of NADH per minute under the following conditions.


Reagent Preparation

Reagent I: Weigh 0.04 g of sodium pyruvate, dissolve it in 0.1 M Tris-HCl buffer (pH 7.7), and dilute to 100 mL.

Reagent II: Weigh 21.1 g of CAPS, dissolve it in 80 mL of water, adjust the pH to 9.7 with NaOH, add 120 mg of NADH, and dilute to 100 mL with double-distilled water.

Enzyme Dilution Buffer: 10 mM potassium phosphate buffer (pH 7.0) with BSA added to a final concentration of 0.1%.

Sample: Dilute the enzyme with pre-cooled enzyme dilution buffer to 1-2 U/mL.


Operating Procedures

1. Operating Procedures4.1 Add 1 mL of Reagent I and 20 μL of the sample to be tested into a 1 mL cuvette, and mix well.

2. Preheat the reaction mixture at 37℃ for 5 min.

3. Add 0.2 mL of Reagent II to the reaction mixture, mix well, react at 37℃, and record the absorbance change (ΔAs) within 1 min at 340 nm using a spectrophotometer.

* Replace the enzyme with enzyme dilution buffer, and follow the same steps. The absorbance of the resulting solution is the blank absorbance (ΔAb).

  ∆A=∆As-∆Ab 


Calculation

1.22: Total volume of the reaction solution (mL);

0.02: Volume of the enzyme solution (mL);

1.0: Path length (cm);

df: Dilution factor;

C: Enzyme concentration (mg/mL);



规格

产品名称
重组乳酸脱氢酶(LDH)
别名
D-乳酸脱氢酶 | D-乳酸脱氢酶
英文别名
D-lactate dehydrogenase | D-lactic acid dehydrogenase | D-lactic dehydrogenase | D-LDH | LDHD
规格或纯度
生物活性,重组,ActiBioPure™,高性能,EnzymoPure™,≥90%(SDS-PAGE),≥420U/mg enzyme powder
生物活性
≥420U/mg enzyme powder
表达系统
E. coli
种属
微生物(Microorganism)
来源
重组表达
预测分子量
45 kDa (SDS-PAGE)
CAS编号和信息
9028-36-8
酶学委员会编号
EC 1.1.1.28
分子类型
酶
产品线
生物产品
储存与运输
物理形态
冻干(Lyophilized)
浓度
≥420U/mg enzyme powder
储存条件
避光,-20°C储存,干燥,避免反复冻融
运输条件
超低温运输
稳定性与储存
Store at -25~-15℃ (24 months). Upon delivery aliquot. Avoid freeze/thaw cycle. Store in the dark. Desiccated.
单位定义
在下述条件下,每分钟氧化 1 μmol NADH 所需的酶量。

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批号(Lot Number) 证书类型 货号
ZJ25F1129524 分析证书 D649636
ZJ25F1129523 分析证书 D649636
ZJ25F1129522 分析证书 D649636
ZJ25F0723764 分析证书 D649636
ZJ25F0723763 分析证书 D649636
ZJ25F0723762 分析证书 D649636
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