阿拉丁试剂的规格、级别和纯度

SUMO标签级试剂

SUMO标签级是围绕SUMO(small ubiquitin-like modifier,小泛素样修饰蛋白)融合标签、其配套亲和纯化体系以及SUMO蛋白酶去标签过程建立的一类产品质量与技术标准等级。该等级强调在重组蛋白表达与纯化中,通过SUMO融合提高可溶性和折叠质量,并在后期以相对精确、可控的方式去除标签,从而获得更接近天然形式的目标蛋白;同时关注相关试剂和重组蛋白在结构稳定性、酶切效率和亲和行为等方面的批次间稳定性与可重复性。

一、SUMO标签基础科学概述

1.1 定义

SUMO标签通常来源于真核SUMO家族成员或其工程化同源(如酵母Smt3),分子量约为10–12 kDa。通过基因工程手段,将SUMO编码序列置于目标蛋白N端(最常见设计),即可形成SUMO融合蛋白。

1.2 核心科学原理

(1)共价融合与折叠调控

SUMO通过肽键与目标蛋白共价连接,其折叠稳定性和表面性质在一定程度上可影响融合蛋白的整体折叠路径与聚集倾向。对部分靶标而言,SUMO融合能够减少包涵体形成、提高可溶性,这是SUMO用于增溶表达的理论基础之一。

(2)特异蛋白酶识别与切除

SUMO蛋白酶能够识别SUMO C端附近的保守结构与氨基酸序列,在预设切点执行水解反应。合理设计的融合构建可在酶切后保留目标蛋白原始起始残基或仅引入极少量附加氨基酸,有利于涉及N端结构或功能位点的研究。

(3)对稳定性与溶解度的影响

SUMO本身具有一定热稳定性和良好的溶解性。融合作为N端结构域时,通常可以提高表达过程中蛋白的溶解度与单分散程度,但具体效果依赖于目标蛋白本身性质及表达条件,需通过实验验证。

1.3 标签的基本特性

(1)中等大小的可切除结构域

SUMO体积明显大于短肽标签而小于MBP等大标签,处于“中等结构域”范围,既具有一定结构调节能力,又适合通过专一蛋白酶在后期去除。

(2)具有增溶与折叠潜力

对一部分难溶或折叠困难的靶标,SUMO融合形式有助于提高可溶表达比例和纯化过程中样品的均一性,但不保证对所有蛋白均有效。

(3)N端形式可控

在适当设计连接区并选择合适SUMO蛋白酶的前提下,去标签后目标蛋白N端可以接近天然起始形式,有利于对信号肽、N端结构域或酶活位点的研究。

(4)易于与其他标签组合

SUMO标签通常与His、Strep II等纯化标签串联使用:SUMO侧重增溶与可切除功能,其他标签负责亲和捕获与过程标准化,便于融入既有纯化流程。

二、SUMO标签级试剂的定义与特点

2.1 定义

指用于SUMO标签相关应用的专用质量级别,涵盖用于SUMO标签融合蛋白表达、亲和纯化、SUMO蛋白酶酶切去标签及后续分离/检测的试剂,以及带有SUMO标签的各类重组蛋白。试剂类在总体纯度基础上,对可能影响SUMO结构稳定性、酶切效率及亲和过程的关键杂质进行严格控制,以保证SUMO标签体系操作的稳定性与可重复性;重组蛋白类确保携带功能性SUMO标签,并对纯度、生物活性等关键质量指标进行控制,具体要求以各产品COA为准。

2.2 产品特点

(1)强调“可切除增溶标签”的流程化应用

SUMO标签级体系将增溶表达与后期去标签视作同一技术路线中的两个阶段,便于在方法设计时同时考虑可溶性与终产物形式。

(2)便于与常用亲和体系对接

通过与His等标签联用,SUMO标签级试剂可较少改动既有亲和层析步骤,只在前后端增加融合与酶切模块,方法迁移相对简便。

(3)适用于研究级与小规模制备

该体系更适合于结构解析、功能验证或少量制备等情景,在这些场景中,终产物的均一性和结构完整性通常优先于产量。

三、关键质量属性

控制维度

质量要求

检测方法

技术意义

融合表达与可溶性

SUMO融合相较无标签形式在可溶表达比例上具有可观测改善

表达与可溶性比较;SDS-PAGE

为难溶或易聚集蛋白提供可操作的表达起点

去标签效率与特异性

在推荐条件下SUMO蛋白酶切除充分,非特异剪切较低

酶切时间梯度;SDS-PAGE或质谱分析

降低残留融合体和异质种,改善终产物均一性

纯化与酶切衔接

亲和纯化缓冲体系与酶切条件具有较好兼容性

纯化–酶切串联流程测试

简化缓冲更换步骤,减少操作带来的失活或损失

残留SUMO与副产物

去标签后残留SUMO和未切除融合体在可接受范围内

SEC;HPLC;SDS-PAGE

提高终产物的结构纯度与分析可解释性

去标签后稳定性

去除SUMO后目标蛋白在合理缓冲条件下保持基本稳定

稳定性测定;溶解度与聚集评估

保证后续结构解析、功能和互作实验可顺利进行

批次间一致性

核心参数(表达、酶切、抛光行为)在不同批次间差异可控

批次对比;质量说明与实验记录

便于长期课题和多个构建体之间的结果比较

四、典型使用场景

4.1 难溶或易聚集蛋白的表达与纯化

(1)增溶构建评估

对已知易形成包涵体或可溶性偏低的靶标,可建立SUMO融合构建,并与其他标签形式并行比较可溶表达比例、条带完整性及后续纯化行为。

(2)融合纯化与去标签联合流程

采用His–SUMO等组合进行初步亲和捕获,再在适当条件下进行SUMO蛋白酶酶切,最后通过抛光层析获得去标签产物,用于后续结构或功能研究。

4.2 精确N端工程与结构生物学

(1)N端敏感蛋白研究

对N端残基与功能密切相关的蛋白(如含信号肽、跨膜螺旋起始区等),可通过SUMO去标签获得接近天然N端形式,以减少标签对局部结构和功能的干扰。

(2)高分辨率结构样品制备

在冷冻电镜、X射线晶体学或NMR等技术中,SUMO融合有助于前期获得足量可溶蛋白;经去标签和抛光后,可提高样品均一性,改善结构解析的可行性。

4.3 功能与互作研究

(1)精细酶学与动力学测定

通过SUMO去标签获得无融合结构域干扰的目标蛋白,有利于精细测定催化参数、配体结合动力学及构象变化。

(2)互作与复合物分析

当SUMO对互作界面或复合物形成具有潜在影响时,可通过去标签样品进行Pull-down、共沉淀或高分辨率结构研究,以获得更具代表性的互作信息。

五、阿拉丁产品优势

(1)SUMO融合与酶切相关产品

包括SUMO融合表达载体、SUMO蛋白酶等试剂,说明文件中给出基本使用条件与推荐反应参数,可用于探索SUMO融合表达与去标签路径。

(2)与亲和纯化兼容的基础配置

结合His–SUMO等常见组合,配套提供金属螯合介质及基础缓冲建议,便于在既有His纯化流程中嵌入SUMO去标签步骤。

(3)重组蛋白与质量信息

对部分带SUMO标签的重组蛋白,COA中给出纯度、活性(如适用)及相关标签信息,可作为方法建立、对照实验或性能评估的参考材料。

六、同类级别比较

比较维度

SUMO标签级

MBP标签级

GST标签级

His标签级

T7标签级

核心原理

SUMO结构域通过特异SUMO蛋白酶切除

MBP与麦芽糖或淀粉类配体发生可逆亲和结合

GST与谷胱甘肽配体发生可逆亲和结合

多组氨酸与金属螯合介质形成金属配位结合

T7短肽表位被T7特异抗体识别

标签大小

约10–12 kDa,中等大小结构域

约40 kDa,体积较大,具有明显增溶潜力

约26 kDa,中等大小,兼具增溶与亲和功能

通常为6×His,体积较小

短肽标签,体积很小

增溶与折叠特点

对部分难溶蛋白有助于提高可溶性并改善折叠

常用于明显改善易形成包涵体蛋白的可溶表达

对部分靶标有一定增溶作用,效果依赖具体蛋白

对溶解度影响相对有限,主要提供纯化“把手”

对溶解度影响较小,更偏向检测与标记

去标签及终产物

SUMO蛋白酶可在预设位点切除,N端形式接近天然

常与可切除策略联用,去除后通常保留短连接残基

是否去标签取决于构建设计,去除后可能残留连接序列

一般长期保留His,若需去除需额外设置酶切位点

多数情况下保留T7标签,用于表达与检测

适用纯化规模

适合研究级与小规模制备,强调终产物均一性

适合研究级和一定规模制备,常用于难溶蛋白方案

适合研究级和中等规模制备,亲和流程较成熟

从小试到放大生产均可使用,是常见通用纯化标签

常用于表达和免疫检测,不常作为主要纯化标签

典型应用场景

难溶蛋白增溶、N端敏感蛋白研究、结构与功能精细分析

极难溶或易聚集蛋白的表达与纯化、Pull-down互作研究

增溶与亲和纯化结合、Pull-down实验和功能研究

多数重组蛋白初步和中度纯化、结构样品制备

表达检测、定位分析以及T7相关免疫检测方法开发

七、阿拉丁代表产品

货号

名称

级别和纯度

rp183694

Recombinant Human Cyclophilin A Protein

无载体,无叠氮钠,His标签,SUMO标签,≥95%(SDS-PAGE)

rp179785

Recombinant Human NEDD8 Protein

无载体,His标签,SUMO标签,≥95%(SDS-PAGE)

rp170404

Recombinant Human MIF Protein

无载体,生物活性,ActiBioPure™,His标签,SUMO标签,≥95%(SDS-PAGE),见COA

rp184909

Recombinant Human HMGN1 Protein

无载体,His标签,SUMO标签,≥90%(SDS-PAGE),见COA

rp192260

Recombinant Rat IL-1 beta/IL-1F2 Protein

无载体,生物活性,ActiBioPure™,高性能,His标签,SUMO标签,≥95%(SDS-PAGE),见COA

rp188413

Recombinant Human Peroxiredoxin 3/PRDX3 Protein

无载体,His标签,SUMO标签,≥90%(SDS-PAGE),See COA

rp183675

Recombinant Human FABP3/H-FABP Protein

无载体,His标签,SUMO标签,≥95%(SDS-PAGE)

rp183756

Recombinant Human SDHA Protein

无载体,His标签,SUMO标签,≥80%(SDS-PAGE),见COA

rp183676

Recombinant Human FABP7/B-FABP Protein

无载体,His标签,SUMO标签,≥95%(SDS-PAGE)

rp192261

Recombinant Porcine IL-8/CXCL8 Protein

无载体,His标签,SUMO标签,≥90%(SDS-PAGE)

rp220432

Recombinant Human TCF3/E2A Protein  

无载体,His标签,SUMO标签,≥90%(SDS-PAGE),See COA

在多种标签级体系中,SUMO标签级更强调“增溶表达与可切除标签”这一组合特征,适合对终产物N端形式和样品均一性有较高要求的结构与功能研究场景。与以显著增溶为主的MBP标签级、兼顾增溶与亲和纯化的GST标签级、以通用亲和捕获为特点的His标签级以及偏向表达检测和免疫方法建立的T7标签级相比,SUMO标签级为从表达优化到无标签终产物制备提供了一条相对清晰、可重复的技术路径。具体是否采用SUMO标签级及如何与其他标签级组合,仍需结合目标蛋白性质、实验终点和既有工艺条件进行综合评估与验证。

 

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Da — 若无特别说明,分子量单位默认为道尔顿。   Mw — 重均分子量。   Mn — 数均分子量。

产品仅供科研与开发使用,不用于人体、动物、诊断或治疗。

引用本文

阿拉丁科学.《SUMO标签级试剂》. 阿拉丁知识库,更新于 2025年12月16日。 https://www.aladdin-e.com/zh_cn/faqs/sumo-tag-grade-reagents.html
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