储存缓冲液：1×PBS containing 20% (v/v) Ethanol
UltraBio™ Ni-IDA 琼脂糖磁珠 (His tag) 是专为高效、快速纯化组氨酸标签蛋白而设计的新型磁性微球产品，可以在磁场作用下直接从生物样品中一步纯化出高纯度的目标蛋白，极大的简化了纯化工艺和提高纯化效率，适合科研和工业客户高通量地进行组氨酸标签蛋白的纯化。 与传统的柱层析方法相比，使用UltraBio™ Ni-IDA 琼脂糖磁珠 (His tag) 无需控制上样流速，更不需要昂贵的层析设备和离心设备，样品与磁珠的结合以及目的蛋白与磁珠的分离变的非常简单、快捷，而且更容易实现高通量、自动化的蛋白纯化方法。
UltraBio™ Ni-IDA 琼脂糖磁珠 (His tag) 可以用于各种表达来源（如大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞）的组氨酸标签（6xHis-tagged）蛋白的纯化。它是以磁性琼脂糖凝胶微球为基础，通过化学方法偶联了三配位的亚氨基二乙酸（IDA），螯合镍离子（Ni²⁺）后，可以形成比较稳定的骨架结构，从而有更多的位点与组氨酸标签上的咪唑环继续配位，达到结合目的蛋白的效果。但是，这样的结构比较容易受到其他小分子的进攻，镍离子易被还原或者被螯合，从而破坏其化学结构，无法结合目的蛋白。
本产品每毫升磁珠悬浊液含约20% v/v琼脂糖磁珠沉淀。
包装规格： 20% v/v悬液
参数
| 指标
|
基质
| 磁性琼脂糖微球
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配基
| Ni-IDA
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| 含量 | Slurry: 20%
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粒径
| 30-100 μm |
载量
| ＞40mg 6×His-tagged protein/mL (100%, v/v)
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保存
| 2-8℃ (含20% 乙醇的1×PBS ） |
使用说明：
一、缓冲液的准备
缓冲液可使用下列推荐缓冲液，也可根据自己的使用习惯配置不同的缓冲液体系，基本原理就是低咪唑上样，高咪唑洗脱。缓冲液在使用前最好用0.22μm或者0.45μm滤膜过滤除菌。
| 名称 | 体积 | 配方 |
Lysis Buffer
| 1 L
| 50mM NaH₂PO₄(7.80g NaH₂PO₄·2H₂O)
300mM NaCl (17.54g NaCl)
10mM imidazole (0.68g imidazole)
使用NaOH溶液调节pH至8.0，使用0.22或者0.45μm滤膜过滤除菌。
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Wash Buffer
| 1 L
| 50mM NaH₂PO₄ (7.80g NaH₂PO₄·2H₂O)
300mM NaCl (17.54g NaCl) 20mM imidazole (1.36g imidazole)
使用NaOH溶液调节pH至8.0，使用0.22或者0.45μm滤膜过滤除菌。
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Elution Buffer
| 1 L
| 50mM NaH₂PO₄ （7.80g NaH₂PO₄·2H₂O)
300mM NaCl (17.54g NaCl)
250mM imidazole (17.0g imidazole)
使用NaOH溶液调节pH至8.0，使用0.22或者0.45μm滤膜过滤除菌。
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上述缓冲液体系适用于多数组氨酸标签蛋白的纯化，在Lysis Buffer中添加一定浓度的咪唑可以降低非特异性结合，提高目的蛋白的纯度。初次使用的客户，可以采用推荐的缓冲液，再根据实验结果进行调整缓冲液中的咪唑的浓度。
二、样品准备
1、细菌或酵母表达的蛋白
(1) 挑取单菌落到培养基中，根据载体使用说明，加入相应浓度的诱导剂诱导相应的时间。
(2) 表达结束后，将培养液转移到离心杯中，7000rpm (7500×g)，离心15min收集菌体，然后按照菌体：LysisBuffer=1：10（W/V）加入Lysis Buffer，加入终浓度为1mM的PMSF。加入溶菌酶（工作浓度为0.2-0.4mg/ml，如果表达的宿主细胞内含pLysS或pLysE，可以不加溶菌酶），（同时也可加入其他蛋白酶抑制剂，但不能影响目的蛋白与填料的结合）。
(3) 将菌体沉淀悬浮起来，（如果菌液浓度高，也可考虑加入10μg/ml RNaseA和5μg/ml DNaseI），混匀，放置于冰上，然后冰上超声破碎细胞，至菌液基本保持澄清。
(4) 将澄清的破碎液转移至离心管中，10000rpm (15000×g)，4℃离心20-30min。取上清，置于冰上备用或-20℃保存。
2、酵母、昆虫和哺乳细胞分泌表达可溶性蛋白
(1) 将细胞培养液转移至离心杯，5000rpm (3800×g)，离心10min，收集菌体得上清，如上清中不含EDTA、组氨酸和还原剂等物质，即可直接加入柱子使用；如含有EDTA、组氨酸和还原剂等物质，需用Lysis Buffer透析才能加入柱子。
(2) 对于大量体积的上清，需加入硫酸铵沉淀浓缩后，蛋白还需用Lysis Buffer透析后才能加入柱子。
三、样品纯化
1、磁珠准备
将UltraBio™ Ni-IDA 琼脂糖磁珠 (His tag) 充分混匀，使用移液器取适量的磁珠悬浮液，置于离心管中，将离心管置于磁分离器上，待溶液变澄清后，用移液器吸弃上清液。
2、磁珠平衡
再将离心管磁分离器上取下来，加入与悬浮液等体积的Lysis Buffer，使用枪头反复吹打5-10次，将离心管置于磁分离器上，待溶液变澄清后，用移液器吸弃清液，重复洗涤2次。
3、磁珠结合目的蛋白
将准备好的样品加入到处理好的磁珠中，颠倒混匀。将离心管置于混合仪上，室温孵育30min以上（如果目标蛋白不稳定，建议置于2-8℃下孵育1h以上）。
4、洗杂
将离心管置于磁分离器，待溶液变澄清后，用移液器移出上清液，保留，以备取样检测。向离心管中加入2倍悬浮液体积的Wash Buffer，使用枪头反复吹打5-10次，将离心管置于磁分离器上，待溶液变澄清后，用移液器吸取上清液，保留，以备取样检测。重复上述步骤2次。
5、洗脱目标蛋白
可以根据需要改变洗脱体积从而达到调整目标蛋白浓度的目的。建议将3-5倍磁珠体积的Elution Buffer加入到离心管中，使用移液器轻轻吹打3-5次，混匀，将离心管置于磁分离器上，待溶液变澄清后，用移液器吸取上清液，即为目的蛋白组分。如有需要，可以重复上述步骤1次，以提高目的蛋白的回收量。
6、磁珠后处理
向装有磁珠的离心管中加入1ml Elution Buffer，用移液器反复吹打3-5次，使磁珠充分悬浮，然后，置于磁分离器，吸弃上清，重复该操作2次。再向该离心管中加入1ml去离子水，用移液器反复吹打3-5次，使磁珠充分悬浮，然后置于磁分离器，吸弃上清，重复该操作2次。最后，加入含20%乙醇的1×PBS，使总体积等于初始磁珠悬浮液的体积，保存于2-8℃。
四、SDS-PAGE检测
将使用纯化产品得到的样品（包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分）以及原始样品使用SDS-PAGE检测纯化效果。
注意事项：
1、使用本产品前，请仔细阅读产品说明书。
2、磁珠保存过程中应避免冷冻/干燥和高速离心等操作，否则会破坏磁珠的结构，严重影响蛋白结合能力。
3、在使用磁珠前，请温和的、充分的震荡，使磁珠保持均匀的悬浮状态。
4、使用过的磁珠重复使用时，建议纯化同一种的蛋白，纯化不同种蛋白时，建议使用新的磁珠，以避免交叉污染。
ZJ25F0927001
危险品化学品经营许可证（带存储）