计算溶液所需的质量、体积或浓度。
,适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。
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在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。
脂质过氧化是由氧化损伤造成的脂质降解,是氧化应激的重要标志。多不饱和脂质通常易受活性氧的氧化攻击,引起明确的链反应并生成最终产物,如丙二醛(MDA)。脂质过氧化影响许多疾病的病理,包括动脉粥样硬化、糖尿病和阿尔茨海默氏病。
脂质氧化(MDA)检测试剂盒(Lipid Peroxidation MDA Assay Kit)采用一种基于MDA和硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid,TBA)反应产生红色产物的显色反应,随后通过比色法用于对血浆、血清、尿液、动植物组织或细胞裂解液中MDA进行定量检测,广泛用于脂质氧化(lipid peroxidation)水平检测的试剂盒。
丙二醛(Malondialdehyde,MDA)是一种生物体脂质氧化的天然产物。动物或植物细胞发生氧化应激(oxidative stress)时,会发生脂质氧化。一些脂肪酸氧化后逐渐分解为一系列复杂的化合物,其中包括MDA。此时通过检测MDA的水平即可检测脂质氧化的水平,因此MDA的测定被广泛用作脂质氧化的指标。生物体内的一些其它生化反应也会产生MDA,例如thromboxane synthase也可以催化产生,但只要在测定时设置适当对照即可观察到脂质氧化水平的变化。
丙二醛在较高温度及酸性环境中可与TBA发生反应,形成红色的MDA-TBA加合物,相应的反应原理图如下:

MDA-TBA加合物在535nm处有最大吸收,据此可以通过比色法进行检测。另外,MDA-TBA加合物也可以在535nm被激发产生最大发射波长553nm,据此也可以进行荧光检测。
特点:本试剂盒中采用了特殊的抗氧化剂,可以有效地抑制样品在检测过程中产生新的MDA,使检测更加准确。同时本检测试剂盒在检测过程中可以把部分MDA天然形成的聚丙二醛分解成MDA,使对脂质氧化的测定更加准确。
本试剂盒可以检测低达1μM的MDA,也可检测高达200μM的MDA (参考图1)。血浆、血清样品中的MDA含量通常在约2-4μM,尿液中的MDA含量通常在约5-30μM,在本试剂盒的检测范围内,可以直接用本试剂盒检测血浆、血清、尿液样品等。

不同浓度标准品使用本试剂盒的检测效果图。实测数据会因检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。
试剂盒组份:
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注意事项:
1) 醛、较高浓度的可溶性糖(例如250mM蔗糖)对反应有干扰,可溶性糖与TBA显色反应的产物在532nm也有吸收(最大吸收在450nm)。如果可溶性糖对测定有干扰,可以通过测定450nm作为参考波长进行双波长测定,消除其干扰。
2) 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
3) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法:
1. 样品的准备:
a. 血浆、血清或尿液样品制备后可以直接用于MDA测定。
b. 组织或细胞可以使用PBS或裂解液进行匀浆或裂解。对于组织,组织重量占匀浆液或裂解液的比例为10%;对于细胞,每100万细胞使用0.1ml裂解液或匀浆液。匀浆或裂解后,10,000g-12,000g离心10分钟取上清用于后续测定。对于一些特殊样品,离心不能获得澄清的上清溶液的,可以使用0.2微米孔径的过滤器过滤以获得澄清的样品溶液。匀浆或裂解等样品制备步骤宜在冰浴或4℃进行操作。
c. 对于组织或细胞样品,样品准备完毕后用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度,便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的MDA含量。
d. 本试剂盒对于样品中的常见化学成分的兼容性参考下表:

2. 试剂盒的准备工作:
a. TBA储存液的配制:称取适量TBA,用TBA配制液配制成浓度为0.37%的TBA储存液。例如18.5mg TBA用5ml TBA配制液配制,或者25mg TBA用6.76ml TBA配制液配制,最终浓度即为0.37%。TBA配制液需完全溶解后再使用,可以加热到70℃以促进溶解。TBA储存液较难溶解,需加热到70℃,并通过剧烈Vortex以促进溶解。配制好的TBA储存液室温避光保存,至少3个月内有效。
b. MDA检测工作液的配制: 根据待测定的样品数(含对照),参考下表在临检测前新鲜配制适量的MDA检测工作液

注意: MDA检测工作液较难溶解,可以70℃加热,并剧烈Vortex以促进溶解。也可以通过超声处理以促进溶解。配制好的MDA检测工作液必须当天使用。
c. 标准品的稀释:取适量标准品用蒸馏水稀释至1、2、5、10、20、50μM,用于后续制作标准曲线。如果样品中MDA的浓度很高,可以增加100、150和200μM的标准品浓度。
3. 样品测定:
a. 在离心管或其它适当容器内加入0.1ml匀浆液、裂解液或PBS等适当溶液作为空白对照,加入0.1ml上述不同浓度标准品用于制作标准曲线,加入0.1ml样品用于测定;随后加入0.2ml MDA检测工作液。可参考下表设置检测反应体系:

b. 混匀后,100℃或沸水浴加热15分钟。加热时务必注意避免液体暴沸溅出。如果使用加热块(Heat block)进行加热注意用重物压紧离心管盖;如果使用沸水浴,则需使用可把盖子锁死的离心管或螺旋盖离心管,或用Parafilm封住离心管口,用针头刺一小孔。最方便和准确的加热方法是使用带有热盖并可以加热0.5ml PCR管的PCR仪。
c. 水浴冷却至室温,1000g室温离心10分钟。取200微升上清加入到96孔板中,随后用酶标仪在532nm测定吸光度。如果不方便测定532nm的吸光度,也可以测定530-540nm之间的吸光度。可以设定450nm为参考波长进行双波长测定。
d. MDA含量的计算:对于血浆、血清或尿液等样品可以直接根据标准曲线计算获得MDA的摩尔浓度,对于细胞、或组织样品,计算出样品溶液中的MDA含量后,可以通过单位重量的蛋白含量或组织重量等来表示最初样品中的MDA含量,例如μmol/mg蛋白或μmol/mg组织。
常见问题:
没有检测到MDA。可能样品中MDA浓度过低。在检测组织或细胞的MDA时,请使用更多的组织或细胞。不要稀释样品。
应用:
脂质过氧化(MDA)检测试剂盒已用于确定丙二醛(MDA)的水平。
适用性:
适于测定组织、细胞和血浆等各类样品中的丙二醛(MDA)
原理:
本试剂盒通过MDA与硫代巴比妥酸(TBA)反应形成的比色(532 nm)/荧光 (λex= 532/λem= 553 nm) 产物测定脂质过氧化,产物与存在的MDA成比例关系。
Lipid peroxidation is the degradation of lipids that occurs as a result of oxidative damage and is a useful marker for oxidative stress. Polyunsaturated lipids are susceptible to an oxidative attack, typically by reactive oxygen species, resulting in a well-defined chain reaction with the production of end products such as malondialdehyde (MDA). Lipid peroxidation may contribute to the pathology of many diseases including atherosclerosis, diabetes, and Alzheimer′s.Lipid peroxidation (MDA) assay kit has been used to determine the levels of malondialdehyde (MDA).Suitability: Suitable for the measurement of malondialdehyde (MDA) in a variety of samples including tissue, cells and plasmaPrinciple: In this kit, lipid peroxidation is determined by the reaction of MDA with thiobarbituric acid (TBA) to form a colorimetric (532 nm)/fluorometric (λex= 532/λem= 553 nm) product, proportional to the MDA present.