计算溶液所需的质量、体积或浓度。
微量样本总RNA快速提取试剂盒
有货
为什么选择此级别
BioReagent,分子生物学级 ，适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。
储存与运输
室温,-20°C储存。超低温运输 。请查阅批次 COA 获取详细规格。
质量文档
SDS、COA、产品数据表及规格说明书均可下载。可通过批号查询获取批次 COA。
文献证明
在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。
概述
本产品为超微量RNA提取的专用试剂盒，适用于从超微量的细胞、组织、昆虫、植物、真菌、细菌等样品中提取总RNA。处理范围一般为细胞（10³–10⁶）或者组织（<3 mg）。本试剂盒具有安全、高效、快速、方便的特点，配有独家研发的DNA清除柱和RNA裂解、结合试剂，得到的RNA无DNA残留，优化的RNA助提剂Trace RNA Enhancer可以提高RNA的提取质量。提取得到的RNA可以直接用于Northern杂交、斑点杂交、mRNA纯化、体外翻译、RNA分解酶的保护分析、RT-PCR、Real Time RT-PCR和构建cDNA文库等各种分子生物学实验。
注意事项
1. 操作人员应戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套，并使用无RNase的塑料制品及枪头，避免RNase污染。
2. 本试剂盒可除去大部分DNA污染，无需DNase I 消化即可用于下游实验，但不同的样本或样本的不同投入量核酸含量差异较大，若下游实验对RNA纯度要求比较严格，可选择性的进行DNase I 消化。
3. 推荐使用新鲜样本进行提取，若无法及时提取，样本应液氮冷冻后冻存于-70℃以下。同时应避免反复冻融，否则影响RNA提取得率和质量。
4. 对于线虫、螨虫和花粉等微量样本，需要单独购买匀浆管C。
操作步骤
使用前准备：在12 mL Buffer RW2 中加入48 mL的无水乙醇。
1. 匀浆处理
将研磨好的植物、动物、真菌等样本（细菌、细胞样本无需研磨）加入到预先装有 600 μL Buffer MCL、10 μL Proteinase K 和 5 μL Trace RNA Enhancer 的 1.5 mL RNase-Free 离心管中，立即剧烈涡旋振荡 30 sec 使其充分混匀裂解，14,000 rpm（20,000 × g）离心 2 min。
注意：对于线虫、螨虫和花粉等微量样本，在匀浆管 C 中加入 600 μL Buffer MCL 和 10 μL Proteinase K，然后加入组织样本，使用组织研磨仪研磨 30–60 sec，共 2 次（调整机器 Hz，防止离心管被打碎）。加入 5 μL Trace RNA Enhancer，立即剧烈涡旋振荡 30 sec 使其充分混匀裂解，14,000 rpm（18,630 × g）离心 2 min。
2. 吸取全部上清液至基因组清除柱 DE（清除柱放在收集管中），14,000 rpm（18,630 × g）离心 30 sec，弃去清除柱，收集滤液。
3. 向滤液中加入 0.7 倍滤液体积 的 Buffer RB（此时可能会出现沉淀或絮状物，属正常现象），混匀后将混合液转移至吸附柱 RM（吸附柱放在收集管中），14,000 rpm（18,630 × g）离心 2 min，弃废液，将吸附柱放回收集管中。
4. 向吸附柱中加入 700 μL Buffer RW，12,000 rpm（13,680 × g）离心 30 sec，弃废液，将吸附柱放回收集管中。
5. 向吸附柱中加入 500 μL Buffer RW2（使用前请先加入无水乙醇），12,000 rpm（13,680 × g）离心 30 sec，弃废液，将吸附柱放回收集管中。
6. 重复步骤 5。
7. 12,000 rpm（13,680 × g）离心 2 min。
8. 将吸附柱转移至一个新的 1.5 mL RNase-Free 离心管中，打开吸附柱管盖，室温放置 1 min，以彻底晾干吸附柱中的无水乙醇。向吸附膜中间部位悬空滴加 10–15 μL RNase-Free ddH₂O，室温放置 1 min，12,000 rpm（13,680 × g）离心 30 sec。得到的 RNA 可直接用于下游实验，或于 -80℃ 以下保存。
注意：RNase-Free ddH₂O 体积不应小于 10 μL，体积过小影响回收率。若要提高 RNA 的产量，可将第一次洗脱液重新加入吸附柱进行洗脱，或将 RNase-Free ddH₂O 置于 65℃ 预热。
RNA 完整性、浓度及纯度检测
完整性：
RNA 可用普通琼脂糖凝胶电泳（电泳条件：胶浓度 1%–1.2%；0.5× TBE 电泳缓冲液；120–150 V，15–25 min）检测完整性。由于 rRNA 占 RNA 总量的 80% 以上，电泳后 UV 下应能看到非常明显的 rRNA 条带。不同物种 rRNA 类型及大小会有差异：
动物：28S（4.7–5.0 kb）、18S（1.9 kb）、5S（120 bp）
植物：25S（3.7 kb）、18S（1.9 kb）、5S（120 bp）
大肠杆菌：23S（2.9 kb）、16S（1.5 kb）、5S（120 bp）
昆虫/软体动物：18S 通常会比 28S 条带亮。
条带模糊且弥散拖尾一般表明 RNA 严重降解，建议重新电泳或提取，否则 qPCR 可能出 Ct 值，但准确性与重复性不佳。
浓度：
通过测量分光光度计中 260 nm 处的吸光度（A₂₆₀）确定 RNA 浓度，用 RNase-Free ddH₂O 进行调零，260 nm 处 1 个单位的吸光度相当于 40 μg/mL RNA。
纯度：
A₂₆₀/A₂₈₀ 比值可以用来评估核酸纯度。A₂₆₀/A₂₈₀ 比值在 1.8–2.1 之间时，意味着高纯度的 RNA。A₂₆₀/A₂₈₀ 比值同时依赖于 pH 值及离子强度；当 pH 升高时，A₂₈₀ 读数会降低，而 A₂₆₀ 则不受影响，这会导致 A₂₆₀/A₂₈₀ 比值的升高。由于水通常都具有酸性 pH 值，它会降低 A₂₆₀/A₂₈₀ 比值。我们推荐使用弱碱性 pH 的缓冲溶液（例如 TE，pH 8.0）作为稀释液及空白对照，以确保得到精确、可重复的读数。
This product is a dedicated kit for ultra‑micro RNA extraction, suitable for extracting total RNA from ultra‑micro amounts of cells, tissues, insects, plants, fungi, bacteria, and other samples. The typical processing range is 10³–10⁶ cells or <3 mg of tissue. This kit is safe, efficient, rapid, and convenient. It includes a proprietary DNA removal column and RNA lysis/binding reagents, yielding RNA free of DNA contamination. The optimized Trace RNA Enhancer improves RNA extraction quality. The extracted RNA can be directly used in various molecular biology experiments, including Northern blot, dot blot, mRNA purification, in vitro translation, RNase protection assay, RT‑PCR, real‑time RT‑PCR, and cDNA library construction.
Precautions
Operators should wear disposable masks and gloves, change gloves frequently during the experiment, and use RNase‑free plasticware and tips to avoid RNase contamination.
This kit removes most DNA contamination, allowing RNA to be used directly in downstream experiments without DNase I digestion. However, nucleic acid content varies significantly among different samples or different input amounts. If downstream experiments require very high RNA purity, optional DNase I digestion can be performed.
Fresh samples are recommended for RNA extraction. If extraction cannot be performed immediately, samples should be frozen in liquid nitrogen and stored below -70°C. Avoid repeated freeze‑thaw cycles, as this will affect RNA yield and quality.
For micro samples such as nematodes, mites, and pollen, homogenization tube C must be purchased separately.
Protocol
Preparation before use: Add 48 mL of absolute ethanol to 12 mL of Buffer RW2.
1. Homogenization
Add ground plant, animal, fungal, or other samples (bacterial and cell samples do not require grinding) to a 1.5 mL RNase‑Free centrifuge tube pre‑filled with 600 μL Buffer MCL, 10 μL Proteinase K, and 5 μL Trace RNA Enhancer. Immediately vortex vigorously for 30 seconds to lyse thoroughly. Centrifuge at 14,000 rpm (20,000 × g) for 2 minutes.
Note: For micro samples such as nematodes, mites, and pollen, add 600 μL Buffer MCL and 10 μL Proteinase K to homogenization tube C, then add the tissue sample. Grind using a tissue grinder for 30–60 seconds, twice (adjust the machine frequency to avoid breaking the tube). Add 5 μL Trace RNA Enhancer, immediately vortex vigorously for 30 seconds to mix and lyse thoroughly, then centrifuge at 14,000 rpm (18,630 × g) for 2 minutes.
2. Transfer all supernatant to a Genomic DNA Removal Column DE (placed in a collection tube). Centrifuge at 14,000 rpm (18,630 × g) for 30 seconds. Discard the removal column and keep the flow‑through.
3. Add 0.7 volumes of Buffer RB relative to the flow‑through volume (precipitation or flocculent material may appear – this is normal). Mix well, then transfer the mixture to a Spin Column RM (placed in a collection tube). Centrifuge at 14,000 rpm (18,630 × g) for 2 minutes. Discard the flow‑through and return the column to the collection tube.
4. Add 700 μL Buffer RW to the column. Centrifuge at 12,000 rpm (13,680 × g) for 30 seconds. Discard the flow‑through and return the column to the collection tube.
5. Add 500 μL Buffer RW2 (ensure absolute ethanol has been added before use) to the column. Centrifuge at 12,000 rpm (13,680 × g) for 30 seconds. Discard the flow‑through and return the column to the collection tube.
6. Repeat step 5.
7. Centrifuge at 12,000 rpm (13,680 × g) for 2 minutes.
8. Transfer the column to a new 1.5 mL RNase‑Free centrifuge tube. Open the lid and let stand at room temperature for 1 minute to completely air‑dry any residual ethanol. Add 10–15 μL RNase‑Free ddH₂O to the center of the membrane without touching it. Let stand at room temperature for 1 minute, then centrifuge at 12,000 rpm (13,680 × g) for 30 seconds. The obtained RNA can be used directly in downstream experiments or stored below -80°C.
Note: The volume of RNase‑Free ddH₂O should not be less than 10 μL; smaller volumes will reduce recovery. To increase RNA yield, reload the first eluate onto the column for a second elution, or preheat the RNase‑Free ddH₂O to 65°C.
RNA Integrity, Concentration, and Purity Assessment
Integrity:
RNA integrity can be assessed by standard agarose gel electrophoresis (conditions: 1–1.2% gel, 0.5× TBE running buffer, 120–150 V for 15–25 minutes). Since rRNA accounts for more than 80% of total RNA, very distinct rRNA bands should be visible under UV after electrophoresis. The types and sizes of rRNA vary among species:
Animals: 28S (4.7–5.0 kb), 18S (1.9 kb), 5S (120 bp)
Plants: 25S (3.7 kb), 18S (1.9 kb), 5S (120 bp)
E. coli: 23S (2.9 kb), 16S (1.5 kb), 5S (120 bp)
Insects/Mollusks: The 18S band is typically brighter than the 28S band.
If the bands are smeared and diffuse, it generally indicates severe RNA degradation. Re‑run the gel or re‑extract the RNA. Otherwise, qPCR may still yield Ct values, but accuracy and reproducibility will be poor.
Concentration:
Determine RNA concentration by measuring absorbance at 260 nm (A₂₆₀) using a spectrophotometer. Use RNase‑Free ddH₂O for blanking. One absorbance unit at 260 nm corresponds to 40 μg/mL RNA.
Purity:
The A₂₆₀/A₂₈₀ ratio is used to assess nucleic acid purity. A ratio between 1.8 and 2.1 indicates high‑purity RNA. The A₂₆₀/A₂₈₀ ratio is dependent on pH and ionic strength; as pH increases, A₂₈₀ decreases while A₂₆₀ remains unchanged, leading to an increased ratio. Because water is typically acidic, it can lower the A₂₆₀/A₂₈₀ ratio. We recommend using a weakly alkaline buffer (e.g., TE, pH 8.0) as the diluent and blank control to obtain accurate, reproducible readings.
规格
别名
超微量RNA快速提取试剂盒 | 微量RNA双柱试剂盒
英文别名
Total RNA Micro Kit
规格或纯度
BioReagent,分子生物学级
英文名称
Micro Sample Total RNA Rapid Extraction Kit
应用
RNA Extraction
储存与运输
储存条件
室温,-20°C储存
运输条件
超低温运输
稳定性与储存
各组分在相应的储存条件下保质期15个月。
组分与储存
| M1521407 | 组件名称 | 50T | 储存温度 |
| M1521407A | Buffer MCL | 33 mL | RT. |
| M1521407B | Buffer RB | 20 mL | RT. |
| M1521407C | Buffer RW | 38 mL | RT. |
| M1521407D | Buffer RW2 | 12 mL | RT. |
| M1521407E | RNase-Free ddH₂O | 15 mL | RT. |
| M1521407F | Proteinase K | 0.7 mL | RT. |
| M1521407G | 基因组清除柱DE (含2mL收集管) | 1 EA×50 | RT. |
| M1521407H | 吸附柱RM (含2mL收集管) | 1 EA×50 | RT. |
| M1521407I | RNase-Free离心管 (1.5 mL) | 1 EA×50 | RT. |
| M1521407J | Trace RNA Enhancer | 280 μL | -20℃. |
M1521407A, M1521407B, M1521407C, M1521407D, M1521407E, M1521407F, M1521407G, M1521407H, M1521407I：室温保存，15个月。
M1521407J：4℃可存放1个月，长期置于-20℃保存。
若Buffer MCL产生沉淀，使用前可在37℃水浴中预热5-10 min以溶解沉淀，不影响效果。
技术文档
高级数据
质检证书（CoA,COO,BSE/TSE 和分析图谱)
C of A & Other Certificates(BSE/TSE, COO):
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| 批号(Lot Number) | 证书类型 | 货号 |
|---|---|---|
 ZJ26F0636354 |
分析证书 | M1521407 |
技术文档和文章
溶液计算器
常见问题
什么是「分子生物学级」？
「分子生物学级」表示该产品经过加工和检测，适用于分子生物学和蛋白质组学。典型规格包括：低或不可检测的核酸酶/蛋白酶活性、低内毒素、受控的微生物限度，以及高批间重现性。
什么是「BioReagent」？
「BioReagent」表示该产品经过加工和检测，适用于生物和生化应用。规格可能包括内毒素限值、微生物控制、无菌性、低 DNase/RNase/蛋白酶活性，以及在相关情况下的生物活性验证。
本产品应如何储存？
请于?20 °C条件下保存。需冷冻保存以维持规定的有效期。
本产品如何运输？
本产品采用保温箱配冰袋运输。收货后请立即拆包，并按上述储存条件保存。
如何获取批次专用COA？
每个订单都会随附分析证书（COA），您也可以从账户订单历史中下载。如需订购前的COA，请联系您的客户代表，或使用PDP上的"申请COA"按钮——我们将提供代表性批次的COA。
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