参数	指标
基质	6%高交联琼脂糖
配基	-CH(COOH)N(CH2COOH)2
平均粒径	90 μm(45-165μm)
Ni2+离子容量	15-25 μmol Ni2+/mL
动态载量	30-35 mg His-Tagged protien/mL wet gel(40KD)
推荐流速	150-300 cm/h
最高流速	600 cm/h
最高耐压	0.3 MPa (3 bar)
避免使用	螯合剂（EDTA、柠檬酸等）、强还原剂（DTT 等）
pH(工作范围)	3-12
pH(在位清洗)	2-14
保存	4-30℃（20%乙醇）

使用方法

本品可广泛应用于 his 标签蛋白等生物分子的分离纯化，但因对不同标签蛋白的结合能力不同，不同蛋白活性保存条件不同等原因，建议用户进行方法筛选。以下提供一种参考工艺：

平衡：使用 10CV 的 buffer A（20 mM PB+0.5 M NaCl, pH 7.4 或其它中性/弱碱性高盐缓冲液）进行柱子平衡（平衡至基线）。

上样：上样适量样品（固体样品请使用 buffer A 配制，液体样品可使用 buffer A 进行透析）；为了减少杂蛋白在层析柱上的吸附，可在确保目标蛋白吸附的情况下适当增加样品缓冲液中的咪唑（具体浓度根据优化结果确定，并与平衡缓冲液的咪唑浓度保持一致）。

洗涤：使用 5CV 的 buffer A 洗涤柱子（淋洗至基线）。

洗脱：使用 buffer B（20 mM PB + 0.5 M NaCl + 0.5 M 咪唑，pH 7.4；洗脱缓冲液中一般含有竞争试剂咪唑，并加入 0.1-1.0 M 的 NaCl 以抑制离子交换作用）进行洗脱。可以采用线性洗脱和阶梯式梯度洗脱两种方式进行。

（备注：洗脱一般有两种方式：一是采用竞争试剂，如咪唑（0-0.5 M）、组氨酸（0-0.05M）、氯化铵（0-2 M）等将蛋白质从柱子上置换下来；二是减小 pH 值，洗脱目标蛋白，大多数蛋白质在 pH 4~6 的范围内可被洗下来。用竞争试剂咪唑或减小 pH 值的方法洗脱蛋白质，金属离子仍结合在柱子上；若用竞争试剂组氨酸或氯化铵洗脱蛋白质，会将金属离子和蛋白质的复合物一起洗下来）。

中和：收集洗脱产物，使用碱性缓冲液（20 mM PB + 0.5 M NaCl + 0.5 M 咪唑，pH 7.4；）将抗体稀释至稳定 pH 值。

再生：在进行一定次数的使用后（具体使用次数和上样中的污染物有关），需要对柱子进行再生，以下提供一种方法：

首先用 2-3 CV 的纯水清洗层析柱，然后用 5 CV 的 20 mM PB + 0.5 M NaCl +50 mM EDTA，pH 7.4 淋洗柱子，再分别用 5 CV 的 20 mM PB + 0.5 M NaCl，pH 7.4 溶液和 5 CV 的纯水清洗柱子，去除柱上残留的 EDTA。

选择合适的金属离子（Ni2+或 Cu2+、Zn2+、Co2+、Fe3+等）溶解于中性或弱酸性溶液中，浓度为 0.2 mol/ml（如选择 Fe3+则必须在低 pH 3.0 下螯合，以防止 Fe3+产生沉淀），过滤后使用。

将介质与金属离子溶液混合置于摇床上震荡过夜，在进行装柱。

在位清洗：为了避免不同样品间的相互干扰，或者当介质污染比较严重时（反压增加），需要对介质进行在位清洗。在位清洗前，需要预先剥离介质上鳌合的金属离子。在位清洗时，可采用反向冲洗的方法。

（1）对于以离子键结合的蛋白，可用 2-3 CV 以上的 2 M NaCl 清洗，并用 3 CV 以上的纯水冲洗。

（2）对沉淀蛋白、以疏水性结合的蛋白或脂蛋白，可用 2-3 CV 的 1M NaOH 清洗（10-20min），并用 5-10 CV 平衡液和 3 CV 以上的纯水冲洗。

（3）对疏水性结合的蛋白、脂蛋白和脂类物质，可用 5-10 CV 的 70%乙醇或 30%异丙醇清洗（15-20 min），并用 5-10 CV 的纯水冲洗。

此外，也可用 2 CV 含去污剂的碱性或酸性溶液清洗。如用 0.1-0.5%的非离子去污剂+0.1M 乙酸冲洗 1-2 h，并用 5-10 CV 的 70%乙醇冲洗去除去污剂，然后用 5-10 CV 的纯水冲洗。

规格

别名

Ni-NTA金属螯合亲和层析介质 | His标签蛋白纯化亲和层析介质 | 组氨酸标签蛋白分离纯化介质 | NI-NTA琼脂糖凝胶填料 | NNTA亲和层析介质

英文别名

Ni-NTA Agarose Resin | Ni-NTA Resin (His-Tag) | Ni-NTA Affinity Resins

规格或纯度

BioReagent, 用于蛋白分析, 30-35 mg His-Tagged protein/mL wet gel; 75 μm

稳定性与储存

Store at 2-8℃ (5 Years). Upon receipt, it is recommended to aliquot.Desiccated.

英文名称

Ni-NTA Affinity Resin (His tag)

储存条件

2-8°C储存

运输条件

低温运输

产品线

生物产品

名称和识别符

分子类型

生物试剂/缓冲液

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批号(Lot Number)	证书类型	货号
ZJ25F0723999	分析证书	N928428
ZJ25F0723998	分析证书	N928428

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「BioReagent」表示该产品经过加工和检测，适用于生物和生化应用。规格可能包括内毒素限值、微生物控制、无菌性、低 DNase/RNase/蛋白酶活性，以及在相关情况下的生物活性验证。

本产品如何运输？

本产品采用湿冰冷藏运输。收货后请立即拆包，并按上述储存条件保存。

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