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细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒
有货
为什么选择此级别
BioReagent,分子生物学级 ，适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。
储存与运输
避光,-20°C储存,避免反复冻融。超低温运输 。请查阅批次 COA 获取详细规格。
质量文档
SDS、COA、产品数据表及规格说明书均可下载。可通过批号查询获取批次 COA。
文献证明
在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。
概述
细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒（Cell Cycle and Apoptosis Kit）是一种采用 经典的碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）染色方法进行细胞周期与细 胞凋亡分析的检测试剂盒。
碘化丙啶是一种双链 DNA 的荧光染料。碘化丙啶和双链 DNA 结合 后可以产生荧光并且荧光强度和双链 DNA 的含量成正比。细胞内的 DNA 被碘化丙啶染色后，可以用流式细胞仪对细胞进行 DNA 含量测定， 然后根据 DNA 含量的分布情况，可以进行细胞周期和细胞凋亡分析。
碘化丙啶染色后，假设 G0/G1 期细胞的荧光强度为 1，那么含有双 份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2，正在进行DNA 复制的 S 期细胞的荧光强度为 1~2 之间。凋亡细胞由于细胞核发生浓缩 以及发生 DNA 片段化（DNA fragmentation）导致部分基因组 DNA 片段在染色过程中丢失，因此凋亡细胞碘化丙啶染色后呈现明显的弱染， 即荧光强度小于 1，在流式检测的荧光图上出现所谓的 sub-G1 峰，即凋 亡细胞峰。
细胞发生凋亡时，由于胞浆和染色质浓缩、核碎裂，产生凋亡小体，使细胞的光散射性质发生变化。在细胞凋亡的早期，细胞对前向角光散 射的能力显著降低，对侧向光散射的能力增加或没有变化。在细胞凋亡 的晚期，前向和侧向光散射的信号均降低，因此可通过流式细胞仪测定 细胞光散射的变化观察细胞凋亡情况。
本试剂盒通常应用于培养的贴壁或悬浮细胞的细胞周期与细胞凋亡 检测。如果用于组织的细胞周期与细胞凋亡检测，则必须把组织消化成 单细胞状态，才可以进行检测。
应用范围
细胞周期检测
储运条件
-20℃避光保存，有效期见外包装；冰袋运输。
产品特点
升级不堵管：PI 染料经结构优化后不堵管，使用更方便； 分群效果好：细胞分群效果明显。
产品组分表：
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注意事项
1. 荧光染料均存在淬灭问题，保存和使用过程中请尽量注意避光，以减 缓荧光淬灭
2. 碘化丙啶对人体有刺激性，请注意适当防护。
3. 碘化丙啶是已知的诱变剂，因此该溶液在丢弃之前需要先经过活性炭 处理。
4. 75%冰乙醇固定细胞一定要充分，否则染色不均导致结果不明显或者 偏差。建议 75%冰乙醇-20℃固定过夜。
5. 细胞固定后要保证细胞是单细胞悬液，细胞的粘连可能会影响我们的 结果。
6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
7. 本产品仅限于科研，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品和药品， 不得存放于普通住宅内。
8. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作
自备材料
1. 耗材 离心管
2. 试剂 (1)细胞株或其他细胞样品 (2)75~80%乙醇：使用无水乙醇及超纯水配 制，提前备好并于-20℃ (3)PBS (4)胰酶 (5)含 FBS 的细胞培养基
3. 仪器 流式细胞仪
操作步骤
1. 细胞样品的准备
(1) 对于贴壁细胞：小心收集细胞培养液到一离心管内备用。用胰酶消化 细胞，至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时，加入前面收集的 细胞培养液，吹打下所有的贴壁细胞，并轻轻吹散细胞。再次收集到离 心管内。1000 rpm 左右离心 3~5 min，沉淀细胞。对于特定的细胞， 如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心 吸除上清，可以残留约 50 μL 左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约 1 mL 冰浴预冷的 PBS，重悬细胞，并转移到 1.5 mL 离心管内。再次离 心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约 50 μL 左右的 PBS，以避免吸 走细胞。轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。
(2) 对于悬浮细胞：1000 rpm 左右离心 3~5 min，沉淀细胞。对于特定 的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心 力。小心吸除上清，可以残留约 50 μL 左右的培养液，以避免吸走细胞。 加入约 1 mL 冰浴预冷的 PBS，重悬细胞，并转移到 1.5 mL 离心管内。 再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约 50 μL 左右的 PBS，以 避免吸走细胞。轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。
2. 细胞固定
(1) 加入 1 mL 冰浴预冷 75~80%乙醇，轻轻吹打混匀，对于易成团的细 胞，要一边加入乙醇一边震荡混匀。如果细胞株本身极易成团，可以先 将细胞充分重悬在 250 μL 的 PBS 中，一边逐滴加入 750 μL 的无水乙 醇（预冷）。乙醇终浓度控制在 75%左右即可，PBS 体积及无水乙醇体 积可按比例调整。 注：切记是先重悬在 PBS 中，绝对不能重悬在培养基中再加无水乙醇。
(2) 将 75~80%的冰乙醇重悬的样品置于-20ºC，固定过夜。如果着急检 测，-20ºC 固定 1~2 h 也可以进行检测。乙醇固定的样品可以在-20ºC 保存 1 个月。1000 rpm 左右离心 3~5 min，沉淀细胞。对于特定的细 胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。
(3) 小心吸除上清，可以残留约 50 μL 左右的 75~80%乙醇，以避免吸走 细胞。加入约 1 mL 冰浴预冷的 PBS，重悬细胞。再次离心沉淀细胞， 尽可能将上清去除干净
3. 碘化丙啶染色液的配制
参考下表，根据待检测样品的数量配制适量的碘化丙啶染色液：
内容 | 1个样品 | 6个样品 | 12个样品 |
染色缓冲液 | 0.5 mL | 3 mL | 6 mL |
碘化丙啶染色液（20×） | 25 μL | 150 μL | 300 μL |
RNase A（50×） | 10 μL | 60 μL | 120 μL |
最终体积 | 0.535 mL | 3.21 mL | 6.42 mL |
注：1)配制好的碘化丙啶染色液短时间内可以 4ºC 保存，宜当日使用。
2) 一个样品的染色液至少可以染色 10 万个细胞。
3)若染色的样本细胞数量小于 10 万，也不建议降低染色液体积，确保染料充足，染色充分。
4. 染色
(1)每管细胞样品中加入 0.5 mL 碘化丙啶染色液，缓慢并充分重悬细胞 沉淀，室温避光孵育 15~30 min。
(2)随后可以 4ºC 或冰浴避光存放。染色完成后宜在 24 h 内完成流式检 测，最好能在当日完成流式检测。若细胞容易黏聚，建议染色后用细胞 过滤器过滤细胞。
5. 流式检测和分析
用流式细胞仪在 535 nm 激发波长，615 nm 发射波长的通道检测红色 荧光，同时检测光散射情况。采用适当分析软件进行细胞 DNA 含量分析 和光散射分析。
6. 结果示例图（图 1）
图 1 C6031 流式结果分析图
规格
英文别名
Cell Cycle and Apoptosis Kit
规格或纯度
BioReagent, 分子生物学级
英文名称
Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit
敏感性
Light sensitive
储存与运输
储存条件
避光,-20°C储存,避免反复冻融
运输条件
超低温运输
稳定性与储存
Store at -20℃ long term (36 months). Avoid freeze/thaw cycle. Store in the dark.
技术文档
高级数据
质检证书（CoA,COO,BSE/TSE 和分析图谱)
C of A & Other Certificates(BSE/TSE, COO):
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| 批号(Lot Number) | 证书类型 | 货号 |
|---|---|---|
 ZJ25F0724520 |
分析证书 | C1372320 |
技术文档和文章
溶液计算器
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