Anti-GFP 纳米抗体磁珠

货号: G1373495
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级别和纯度: BioReagent ? 生物试剂级(BioReagent)—— 经测试适用于生命科学和分子生物学。适用于需要生物相容性的细胞培养、检测和生化工作。 Magnetic Bead Content: ≥10% (V/V); Bead Diameter: 10-30 μm
别名
Anti-GFP 磁珠 | GFP 磁珠
储存条件
2-8°C储存,禁止冷冻
运输条件
低温运输,禁止冷冻
应用
ChIP, Co-IP, IP, RIP
★
规格
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G1373495-0.1ml
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¥399.90
0.5ml
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为什么选择此级别

BioReagent 级 ,适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。

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储存与运输

2-8°C储存,禁止冷冻。低温运输,禁止冷冻 。请查阅批次 COA 获取详细规格。

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质量文档

SDS、COA、产品数据表及规格说明书均可下载。可通过批号查询获取批次 COA。

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文献证明

在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。

概述

储存缓冲液:20 mM PBS, 5% BSA

  GFP纳米抗体磁珠偶联了经过严格筛选、优化并重组表达的GFP纳米抗体,可用于捕获哺乳动物、植物、细菌、酵母、昆虫等多种生物细胞、组织提取物中的GFP或EGFP融合蛋白及其相互作用蛋白。
  实验前先将GFP或EGFP蛋白与目标蛋白在细胞或组织中融合表达;之后将GFP纳米抗体磁珠加入样本裂解液中,GFP纳米抗体与目标融合蛋白及其结合蛋白形成复合体;去除未结合的蛋白后,可以采用多种方法洗脱蛋白质,并且IP洗脱液中不会有抗体轻、重链污染。
产品特性:

磁珠直径
10-30 µm
蛋白结合量
≥1.5 mg 蛋白/mL磁珠
反应性
可特异性结合GFP或EGFP蛋白,对融合蛋白N端、C端的GFP或EGFP标签均可以识别。
应用
免疫沉淀(IP)、免疫共沉淀(Co-IP)、染色质免疫沉淀(CHIP)、RNA 结合蛋白免疫沉淀(RIP)
储存缓冲液
20 mM PBS, 5% BSA
储存条件
4℃. Do not freeze. 有效期1年

  产品优势:
1、纳米抗体,无轻重链污染。IP复合物无论采用非变性洗脱还是变性洗脱均不会出现抗体的轻、重链污染问题。
2、亲和力强。低nM级别亲和力,轻松应对低拷贝基因,或难转染细胞系。
3、结合量高。采用定向偶联技术每10 μL抗体磁珠可结合约15 μg重组蛋白。
4、特异性强。抗体磁珠通过了10株以上的空白细胞系检测不易产生非特异吸附。
5、兼容性好。无论标签在诱饵蛋白的N端或C端都可识别。
6、稳定性好。通过了40℃高温测试轻松应对物流失温,实验后忘记放冰箱等情况。

使用说明:
一、所需主要仪器
磁力架、混匀仪、低温离心机、超声破碎仪。
二、建议的缓冲液配方 

缓冲液
配方
裂解缓冲液
10 mM Tris-HCl pH 7.5, 150 mM NaCl, 0.5 mM EDTA, 0.5% NP-40(在4°C下调整pH)
漂洗缓冲液
10 mM Tris-HCl pH 7.5, 150 mM NaCl, 0.5 mM EDTA, 0.05% NP-40(在4°C下调整pH)
洗脱缓冲液
200 mM 甘氨酸 pH 2.5
2×SDS-PAGE上样缓冲液
125 mM Tris-HCl pH 6.8, 4% SDS, 20%甘油, 0.004%溴酚蓝

三、注意事项
1、请勿干燥、冷冻或剧烈涡旋磁珠,禁止长时间置于磁场,可能会引起磁珠聚团,降低结合活性。
2、为保证磁珠均匀分布,请通过反复颠倒、轻微涡旋彻底混匀瓶中磁珠。
3、请勿使用PBS漂洗磁珠,否则会导致磁珠无法被磁力架吸附。
4、实验前应在裂解缓冲液和漂洗缓冲液中加入足量的蛋白酶抑制剂,RIP实验还应添加足量的RNase抑制剂,混合均匀,冰上保存,现配现用。
5、IP实验前,应先确认样本裂解液(input)中诱饵蛋白的表达水平。
6、IP实验应设置阴性对照组,通常采用表达GFP标签空载体的样本作为对照。
7、如果使用建议的缓冲体系不能获得很好的实验结果,可自行筛选、配制缓冲液进行实验。
8、具体样品量和孵育时间依赖于每个特定体系,可能需要优化才能得到最大产量。
9、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
10、本产品仅限于科学研究使用,不得用于临床诊断或治疗。
四、操作步骤
1、样本裂解(参考)
(1) 按如下方法收集样本:

样本类型
样本量/组
收集方法
动物细胞
1×10⁷个
冷PBS漂洗2~3次,每次4℃ 500g离心5min收集沉淀,尽量吸干液体
动物组织
100~200 mg
冷PBS或生理盐水清洗干净,彻底去除血液等成分,液氮充分研磨
植物组织
200~300 mg
无菌双蒸水清洗干净,液氮充分研磨
革兰氏阴性细菌
50μL 菌体沉淀
冷PBS漂洗2~3次,每次4℃ 5000 g离心5 min收集沉淀,尽量吸干液体

(2) 将样本置于冰上,每组样本加入500 μL预冷的裂解缓冲液,吹打混匀。
(3)
a. 动物细胞:最好冰上超声至溶液基本澄清;如果无超声条件,可以置于冰上裂解30min,间隔手动混匀。
b. 动物组织、植物组织、微生物:冰上超声破碎至溶液基本澄清。
(4) 4℃ 12000 g 离心 15 min,收集上清至新的离心管中,取30 μL作为input,剩余置于冰上备用或 -80℃保存。
【注意】:
i. 当样本不能完全裂解时(溶液很浑浊),可以增加裂解缓冲液、改善裂解方法或改善超声条件继续裂解,超声条件因样本类型和超声设备而异,应提前摸索好合适的条件。
ii. 裂解缓冲液用量可随样本量增加而等比例增加,但总孵育体积最大不超过离心管体积的2/3,体积过大可以更换大规格离心管。
2、免疫共沉淀
(1) 将GFP纳米抗体磁珠上下颠倒混匀,每组取20~30 μL磁珠到新的离心管中。
(2) 加入200 µL漂洗缓冲液,颠倒混匀30次,放磁力架上静置1 min并弃上清。
(3) 重复上步操作一次。
(4) 向磁珠中加入相应组别的样本裂解液,放混匀仪上室温孵育1~2 h或4℃孵育过夜。
(5) 放磁力架上静置1 min并弃上清。
(6) 加入500 μL漂洗缓冲液,颠倒混匀30次,放磁力架上静置1 min并弃上清。
(7) 重复上步操作两次,共漂洗三次。
3、洗脱
(1) SDS-PAGE 上样缓冲液洗脱(变性洗脱法):加入50 μL 1×SDS-PAGE上样缓冲液,95℃加热5~10min。放磁力架上静置1min或5000 g离心1min,收集上清至新的离心管中。洗脱后的蛋白 -20℃保存,或直接用于SDS-PAGE和Western Blot实验,SDS-PAGE胶条可以用于质谱检测。
(2) 甘氨酸洗脱(非变性洗脱法):加入40~50 µL 甘氨酸洗脱缓冲液,涡旋震荡20 s,放混匀仪上室温洗脱 10~15 min,涡旋震荡20 s;1000 g离心20 s,放磁力架上静置1 min,收集上清至新的离心管中。洗脱后的蛋白 -80℃保存,或直接用于SDS-PAGE、Western Blot和质谱等实验。
【备注: Anti-GFP 纳米抗体磁珠没有抗体轻重链污染问题,建议首选变性洗脱法,洗脱效率更高。】  


规格

别名
Anti-GFP 磁珠 | GFP 磁珠
英文别名
Anti-GFP Magnetic Beads | GFP Magnetic Beads
规格或纯度
BioReagent, Magnetic Bead Content: ≥10% (V/V); Bead Diameter: 10-30 μm
稳定性与储存
Store at 2-8℃ long term (12 months). Do not freeze.
英文名称
Anti-GFP Nanobody Magnetic Beads
储存条件
2-8°C储存,禁止冷冻
运输条件
低温运输,禁止冷冻
产品线
生物产品
名称和识别符
分子类型
生物试剂/缓冲液
图片

Anti-GFP Nanobody Magnetic Beads (G1373495) - IP 

All lanes: GFP/EGFP Mouse Antibody (Ab186981) at 1/5000 dilution 

Lane1: HEK-293T transfected with an empty vector, whole cell lysate 

Lane2: HEK-293T transfected with an empty vector containing an EGFP-myc-tag, whole cell lysate 

Lane3: Anti-GFP Nanobody Magnetic Beads (G1373495) IP in HEK-293T transfected with an empty vector, whole cell lysate 

Lane4: Anti-GFP Nanobody Magnetic Beads (G1373495) IP in HEK-293T transfected with an empty vector containing an EGFP-myc-tag, whole cell lysate Secondary: Goat Anti-Mouse IgG H&L (HRP) (Ab179001) at 1/20000 dilution 

Predicted band size: 27 kDa Observed band size: 27, 29 kDa Exposure time: 30.0 s 

技术文档

📋 安全数据表 (SDS)

全面的危险、操作、储存及法规合规文件。

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✅ 分析证书 (COA)

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📊 产品数据表

产品规格和应用的快速参考摘要。

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🔬 规格说明书

该级别的完整质量属性和验收标准。

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高级数据

质检证书(CoA,COO,BSE/TSE 和分析图谱)
C of A & Other Certificates(BSE/TSE, COO):
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批号(Lot Number) 证书类型 货号
ZJ25F0724600 分析证书 G1373495
ZJ25F0724601 分析证书 G1373495
ZJ25F0724602 分析证书 G1373495
ZJ26F0636246 分析证书 G1373495
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常见问题

什么是「BioReagent」?
「BioReagent」表示该产品经过加工和检测,适用于生物和生化应用。规格可能包括内毒素限值、微生物控制、无菌性、低 DNase/RNase/蛋白酶活性,以及在相关情况下的生物活性验证。
本产品应如何储存?
请于2–8 °C条件下保存。请勿冷冻。冷冻可能对本品造成不可逆的损坏。
本产品如何运输?
本产品采用湿冰冷藏运输。收货后请立即拆包,并按上述储存条件保存。
如何获取批次专用COA?
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