苹果酸脱氢酶 (MDH)

CAS: 9001-64-3 货号: R1506880 分子量: 70 kD EC号: 232-622-5
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级别和纯度: 生物活性 ? 生物活性级(Bioactive)—— 经验证在功能检测中保持生物活性。当分子须具有功能活性而不仅是纯度时使用。 重组 ? 重组(Recombinant)—— 通过重组表达生产,序列确定、批次稳定。适用于来源明确、无动物源的可重现蛋白。 ActiBioPure™ ? ActiBioPure™ —— 阿拉丁面向生物活性和重组产品的优质系列。当同时需要高纯度和保持生物活性时使用。 高性能 ? 高性能级 —— 纯度和性能特性经过优化。适用于普通等级无法满足的灵敏分析。 EnzymoPure™ ? EnzymoPure™ —— 阿拉丁的高质量酶解决方案系列。当酶纯度和明确活性决定检测或工艺性能时使用。 ≥40 U/mg enzyme powder; expressed in E.coli
Accession #
P61889
表达系统
E. coli
生物活性
≥40 U/mg enzyme powder
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规格
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10KU
R1506880-10KU
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为什么选择此级别

ActiBioPure™,EnzymoPure™,生物活性,重组,高性能 级 ,适用于对基线干扰要求严格的色谱和分析工作流程。

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储存与运输

-20°C储存,避免反复冻融。超低温运输 。请查阅批次 COA 获取详细规格。

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质量文档

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文献证明

在色谱分析、有机合成和交叉偶联反应领域已被 0 篇同行评审文献引用。

概述

  苹果酸脱氢酶(Malate Dehydrogenase,MDH)是一种关键的氧化还原酶,在细胞代谢中催化苹果酸与草酰乙酸的可逆转化,参与三羧酸循环(TCA 循环)和能量代谢。

应用:该酶可用于临床分析中 L-苹果酸和谷草转氨酶(GOT)的酶法测定。

原理:

试剂:

A. K-磷酸盐缓冲液:0.1M, pH7.5;
B. 草酰乙酸盐溶液:15mM [2.0mg 草酰乙酸 (MW=132.1)/ml of 冰镇 K-磷酸缓冲液 (A),此试剂稳定性较差,需置于冰浴中保存 ] (应现制现用);
C. NADH 溶液:6.0mM [4.25mg NADH·2Na,(MW=709.4 )/ml of H₂O] (应现制现用);
D. 酶稀释剂:0.1M K-磷酸盐缓冲液, pH7.5  含 0.2% BSA。

操作步骤:

1. 将反应混合物置于比色皿 ( (d=1.0 cm) ) 中,于 30℃恒温平衡约 5 分钟。

2.8 mlK- 磷酸盐缓冲液,pH7.5( A )
0.1 ml草酰乙酸盐溶液( B )
0.1 mlNADH 溶液( C )
测定混合液中的浓度
K- 磷酸盐缓冲液97mM
草酰乙酸0.49mM
还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸0.20mM

2. 加入 0.05ml 酶溶液 *, 轻轻倒置混合。

3. 在 30℃恒温的分光光度计中,将样品与水对照,记录 340nm 波长下光密度 3-4 分钟的下降值,并根据曲线初始线性段计算每分钟光密度变化值 (△OD test)。

同时,采用与测试相同的方法测定空白率 (△OD Blank), 但需将酶溶液替换为酶稀释液。

* 将酶制剂溶解于冰浴冷却的酶稀释液 (D) 中,用相同缓冲液稀释至 0.05~0.5U/ml , 冰浴保存。

计算方法:

Vt:总体积 (3.05ml)

Vs:样品体积 (0.05ml)

6.22:测定条件下 NADH 的毫摩尔消光系数 (cm²/μM)

1.0:光路长度 (cm)

df:稀释因子

C:溶解液中的酶浓度 (c mg/ml)

  Malate dehydrogenase (MDH) is a key oxidoreductase, which catalyzes the reversible conversion of malate and oxaloacetic acid in cell metabolism and participates in the TCA cycle and energy metabolism.

Application: This enzyme is useful for enzymatic determination of L-malate and of glutamate oxaloacetate transaminase (GOT) in clinical analysis.

Assay Procedure

Principle:

Reagents:

A.K-Phosphate buffer: 0.1M, pH7.5;
B.Oxaloacetate solution: 15mM [2.0mg oxaloacetic acid (MW=132.1)/ml of ice-cold K-phosphate buffer(A), This reagent is rather unstable and should be store in an ice-bath during use](Should be prepared fresh)
C.NADH solution: 6.0mM [4.25mg NADH·2Na,(MW=709.4 )/ml of H₂O] (Should be prepared fresh)
D.Enzyme diluent: 0.1M K-Phosphate buffer,pH7.5 contg.0.2% BSA

Procedure:

1.Prepare the following reaction mixture in a cuvette (d=1.0 cm) and equilibrate at 30℃ for about 5 minutes. 

2.8mlK-Phosphate buffer , pH7.5( A )
0.1mlOxaloacetate solution( B )
0.1mlNADH solution( C )
Concentration in assay mixture
K-Phosphate buffer97mM
Oxaloacetate0.49mM
NADH0.20mM

2.Add 0.05ml of the enzyme solution* and mix by gentle inversion.

3.Record the decrease in optical density at 340nm against water for 3~4minutes in a spectrophotometer thermostated at 30℃,and calculate the △OD per minute from the initial linear portion of the curve ( △OD test).

At the same time,measure the blank rate (△OD Blank) by using the same method as the test expect that the enzyme diluent is added instead of the enzyme solution.

*:Dissolve the enzyme preparation in ice-cold enzyme diluent(D)and dilute to 0.05~0.5U/ml with the same buffer and store on ice.

Calcuation:

Activity can be calculated by using the following formula:
Vt: Total volume(3.05ml)
Vs: Sample volume(0.05ml)
6.22: Millimolar extinction coefficient of NADH under the assay condition (cm²/μM)
1.0: Light path length(cm)
df: Dilution factor
C: Enzyme concentration in dissolution(c mg/ml)

规格

产品名称
苹果酸脱氢酶 (MDH)
英文别名
(S)-malate dehydrogenase (NAD(+), oxaloacetate-forming) | malate dehydrogenase | malic dehydrogenase | (S)-malate:NAD+ oxidoreductase | (S)-malate dehydrogenase (NAD+, oxaloacetate-forming) | malic dehydrogenase (ambiguous) | L-malate dehydrogenase (ambig
规格或纯度
生物活性,ActiBioPure™,高性能,EnzymoPure™,重组,≥40 U/mg enzyme powder; expressed in E.coli
生物活性
≥40 U/mg enzyme powder
表达系统
E. coli
N-末端序列
在 30℃、pH7.5 条件下,每单位可使 1 微摩尔 NADH 每分钟发生氧化反应。
来源
重组表达
CAS编号和信息
9001-64-3
酶学委员会编号
EC 1.1.1.37
分子类型
酶
产品线
生物产品
储存与运输
物理形态
冻干(Lyophilized)
浓度
≥40 U/mg enzyme powder; expressed in E.coli
复溶
Reconstitute in pure water.
储存条件
-20°C储存,避免反复冻融
运输条件
超低温运输
稳定性与储存
长期储存-20℃(12个月);复溶后建议分装,避免反复冻融。

技术文档

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批号(Lot Number) 证书类型 货号
ZJ26F0737858 分析证书 R1506880
ZJ26F0435006 分析证书 R1506880
ZJ26F0435007 分析证书 R1506880
技术文档和文章
溶液计算器

常见问题

什么是「生物活性」?
「生物活性」表示该产品经过加工和检测,适用于生物和生化应用。规格可能包括内毒素限值、微生物控制、无菌性、低 DNase/RNase/蛋白酶活性,以及在相关情况下的生物活性验证。
什么是「重组」?
「重组」是一个明确定义的分析纯度级别,适用于需要特定验证属性的工作流程。它规定了最低含量百分比、对常见杂质(水分、重金属、灼烧残渣)的受控限值,以及批间一致性。「重组」是几个纯度级别之一——请根据方法的灵敏度和监管要求进行选择。
本产品应如何储存?
请于?20 °C条件下保存。避免反复冻融。建议按单次用量分装保存。
本产品如何运输?
本产品采用保温箱配冰袋运输。收货后请立即拆包,并按上述储存条件保存。
本产品的 CAS 号、分子式和分子量是多少?
本产品的 CAS 号为 9001-64-3。
如何获取批次专用COA?
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