从分析仪器到合成装置：常规分析型 HPLC 重构自动化流动固相多肽合成的新思路
从分析仪器到合成装置：常规分析型 HPLC 重构自动化流动固相多肽合成的新思路
一、为什么常规分析型 HPLC 驱动的自动化流动多肽合成值得关注
多肽合成并不是一个新问题。自 Merrifield 建立固相多肽合成以来，树脂载体、保护基策略、偶联试剂和加热方式持续演进，目标始终是提高链延伸效率、减少副反应并更可靠地获得目标序列。过去十余年，自动化流动多肽合成进一步证明，肽链组装可以在更快的循环时间和更高的自动化程度下进行：2017 年的代表性工作已将每个氨基酸残基的总合成时间压缩到约 40 秒，2020 年又把自动化快速流动化学合成的链长推进到 164 aa。
但这一方向长期存在一个现实限制：许多方法依赖专门设计或定制搭建的流动合成设备，实验室即使理解原理，也未必具备直接开展实验的装置条件。2025 年 Winssinger 团队在 ChemRxiv 发表的预印本《Peptides on Tap: Automated Flow Synthesis with Standard HPLC》提出了一个更具可及性的做法：直接利用配置有自动进样、稳定输液、温控和在线 UV 检测模块的分析型 HPLC，在装填树脂的短保护柱中完成自动化流动固相多肽合成。
该工作已在毫克尺度上完成 30 aa 的 GLP-1 和 20 aa 的比伐卢定合成，说明这一思路不仅停留在装置改造层面，而是具备实际的合成能力。由于该工作目前以预印本（preprint，尚未经正式同行评议的公开论文稿件）形式发布，这一方法更适合被理解为一项已经完成关键实验验证、但仍需进一步同行评议和外部检验的新方法。
二、常规分析型 HPLC 实现自动化流动固相多肽合成的基本构成与关键设计
Romanens, P.; Barluenga, S.; Dockerill, M.; Winssinger, N. Peptides on Tap: Automated Flow Synthesis with Standard HPLC. ChemRxiv, 2025, Version 1. DOI: 10.26434/chemrxiv-2025-6v687.
这项工作本质上仍属于自动化流动固相多肽合成，而不是液相多肽合成。作者将约 10 mg 树脂装填到一支 20 × 2 mm 的短保护柱中，再借助一套配置有自动进样器、高压输液、柱温控制和在线 UV/DAD 检测模块的分析型 HPLC，让活化后的 Fmoc 氨基酸溶液、脱保护试剂和洗涤溶剂按预设顺序流经树脂床，完成偶联、脱保护与清洗循环。真正承载肽链的是树脂，因此反应发生的位置仍然是固相；这项工作的关键，不是改变多肽合成的反应本质，而是把实验室常见的分析型 HPLC 重新组织成一套可执行固相多肽合成循环的自动化装置。
常规分析型 HPLC 在该方法中的具体分工
HPLC 部件 | 在该方法中的作用 | 对实验的意义 |
自动进样器 | 注入氨基酸活化液、脱保护试剂和洗涤溶剂 | 使每一步成为可编程、可重复执行的定量操作 |
输液系统 | 控制流速与停留时间 | 决定试剂与树脂床的接触效率 |
柱温箱 | 提供受控加热条件 | 加快偶联与脱保护过程 |
装填树脂的短保护柱 | 作为实际反应区 | 保持整个过程仍属于固相多肽合成 |
DAD/UV 检测器 | 在线记录 Fmoc 脱保护相关吸收 | 使合成过程具有实时可观察性 |
这项方法之所以能够成立，关键可概括为三点：
1. 运行条件是可编程、可重复控制的。
系统在 80 °C 下运行；活化后的氨基酸溶液以 0.1 mL/min 的流速通过树脂床，对应约 1 分钟的暴露时间；脱保护采用 20% 哌啶/DMF。这意味着偶联、脱保护和洗涤都被转化为可设置的进样顺序、流速、温度和停留时间，而不再依赖人工逐步操作。
2. 在线检测使过程不再依赖事后判断。
作者利用 DAD 在 360 nm 对 Fmoc 脱保护相关信号进行监测，从而把“脱保护是否完成”“循环是否稳定”这类问题转化为实时数据。对条件筛选、方法优化和过程控制来说，这一点非常重要。
3. 偶联体系的选择兼顾了效率与工艺可控性。
作者采用 T-BEC/Oxyma，而不是只沿用常见的 HATU 主路线。Oxyma 被广泛视为相较苯并三唑类添加剂风险更低的替代物；关于肽偶联试剂热稳定性的研究和 TBEC/Oxyma 的后续工作，也为这一组合的使用提供了依据。
三、这项方法在合成效率、立体化学和代表肽验证中的表现
1. 基础效率
作者先以五聚苯丙氨酸作为模型肽优化条件。在 LC-MS 评估下，粗品纯度可超过 93%，单步完成度可超过 99%。说明该方法在基础偶联和脱保护循环上已经具备较高的完成度。
在此基础上，作者进一步合成了一条包含 20 种天然氨基酸 的 20-mer 序列，用来观察不同残基在该流程中的表现。说明该方法并不只适用于少数简单残基，而是对多种常见侧链类型具有较好的兼容性。但这仍属于覆盖性验证，尚不能等同于系统适用范围已经建立。
2. 立体化学
作者专门考察了差向异构化问题。对脯氨酸、丝氨酸和半胱氨酸等测试，未观察到明显差向异构化。对更敏感的组氨酸，若使用新鲜配制并在数分钟内投入使用的 Fmoc-His(Trt)-OH 活化液，差向异构化约为 3.6%；在室温下采用 HATU/iPr2EtN 并预活化 5 分钟的对照条件下，该值约为 4.8%。如果把组氨酸活化液放置 4 小时后再使用，差向异构化会显著升高到 20% 以上；若改用 Fmoc-His(Bom)-OH，则可进一步降到 1% 以下。
这些结果说明，该方法并不会天然消除差向异构化风险；不过在作者所考察的模型残基和优化条件下，立体化学可以维持在可接受水平。对组氨酸这类敏感残基，活化液的新鲜度与保护基选择仍然十分关键。
3. 代表序列
作者没有把验证停留在短肽层面，而是选择了两条具有实际意义的代表序列：GLP-1 和 比伐卢定。其中，GLP-1 为 30 aa，在该条件下可于 4 小时内完成；比伐卢定为 20-mer，完成时间为 2 小时 40 分。
结果上，GLP-1 的粗品以目标产物为主，但仍存在少量末端组氨酸截短副产物；比伐卢定则未观察到可检测的截短产物。按报道数据，在 10 mg 树脂的小规模条件下，GLP-1 粗品获得量为 4.98 mg，理论值为 9.56 mg，折算后约为 52.1%。这个量级不是放大生产路线，但已足以支撑不少研究级样品制备、方法学验证和后续生物学测试。
4. 功能验证
作者没有只停留在 LC-MS 或粗品纯度层面，而是进一步比较了粗比伐卢定和常规 SPPS 后纯化对照样品的凝血酶抑制活性。按报道结果，两者活性相当，粗比伐卢定的 Ki 为 1.8 nM。这说明这套方法得到的粗品并不只是“分析上看起来差不多”，而是已经能够在功能层面达到可用水平。
这项方法的关键实验结果及其含义
证据 | 原始结果 | 说明的问题 |
模型肽优化 | 五聚苯丙氨酸粗品纯度 >93%，单步完成度 >99% | 基础偶联与脱保护循环具有较高完成度 |
20-mer 覆盖测试 | 合成了一条包含 20 种天然氨基酸的序列 | 方法不局限于少数简单残基 |
组氨酸差向异构化评估 | His(Trt) 新鲜活化约 3.6%；HATU/iPr2EtN 对照约 4.8%；久置活化液 >20%；His(Bom) <1% | 对敏感残基需要精细管理，但立体化学控制具有可用性 |
GLP-1 合成 | 30 aa，4 小时完成；4.98 mg 粗品，对应理论值 9.56 mg | 方法已进入中长肽范围，且具有研究级产出能力 |
比伐卢定合成 | 20-mer，2 小时 40 分完成 | 方法适用于具有实际意义的代表肽序列 |
比伐卢定活性 | 粗品凝血酶抑制活性与对照样品相当，Ki = 1.8 nM | 粗品质量已足以支撑功能验证 |
四、常规分析型 HPLC 的自动化流动固相多肽合成的实际意义
1. 降低了自动化流动多肽合成的进入门槛。把原本常与定制装置绑定的自动化流动多肽合成，转移到实验室更常见的分析型 HPLC 上，从而提高方法可及性。
2. 把合成执行与过程监测结合在了一台仪器中。 该方法利用 HPLC 自带的在线 UV/DAD 检测，对 Fmoc 脱保护过程进行实时记录，使偶联—脱保护循环不再完全依赖离线判断，这对条件优化和过程控制都有实际价值。
3. 更适合研究级、小规模的多肽制备与验证。 现有结果表明，这种做法能够在毫克尺度上完成中长肽合成，并支持后续活性验证，因此更适合方法学研究、序列验证和功能测试，不是直接面向放大生产。
五、常规分析型 HPLC 的自动化流动固相多肽合成更适合哪些研究任务
研究任务 | 适配度 | 原因 |
快速获得毫克级中长肽用于研究验证、生化测试或部分细胞实验 | 较高 | 研究成果已给出 GLP-1 和比伐卢定的研究尺度合成结果，说明该方法能够提供毫克级样品并支持后续功能验证 |
比较不同偶联条件、保护基或序列行为 | 高 | 在线 UV/DAD 监测有利于判断脱保护过程和条件变化对合成循环的影响 |
希望利用现有分析型 HPLC 开展小规模自动化多肽合成 | 高 | 这项工作的核心意义之一，就是把原本依赖专门装置的流程转移到常见分析型 HPLC 上 |
面向工业放大或常规大批量供样 | 低 | 该工作展示的是分析尺度、毫克级产出，尚不足以支持放大生产场景判断 |
作为所有困难序列的一般性解决方案 | 低 | 现有结果表明方法具有较广残基兼容性，但 GLP-1 仍出现少量末端组氨酸截短副产物，说明复杂序列问题并未被完全解决 |
六、标准 HPLC 驱动自动化流动多肽合成相关产品选型指引（表1-表5）
当前研究或实验需求 | 建议优先看哪张表 | 为什么先看这张表 | 典型关注点 |
想搭建或优化用于自动化流动固相多肽合成的树脂反应区，例如选择装柱树脂、考虑树脂装载方式、判断预溶胀和主反应溶剂 | 表1 | 这类工作首先要解决“反应在哪里进行、树脂如何处理、体系用什么溶剂”的问题；树脂类型、树脂膨胀状态和主反应溶剂会直接影响装柱可行性、传质和后续偶联表现 | Rink Amide-AM 树脂、2-氯代三苯甲基氯树脂、DMF、NMP、二氯甲烷、1,2-二氯乙烷 |
想优化链延伸循环本身，例如偶联效率、脱保护速度、切割条件、副反应控制 | 表2 | 这类任务的核心在于试剂体系选择，包括脱保护碱、偶联剂、添加剂和切割后处理试剂；通常先看表2，才能决定后面单体和序列如何配套 | 哌啶、DIPEA、DIC、DCC、T-BEC、Oxyma、HOBt、HOAt、HBTU、HATU、PyBOP、TFA、TIPS |
已经确定目标肽序列，准备直接选用可上机的 Fmoc 保护氨基酸单体 | 表3 | 这一步关注的是“哪些单体可以直接进入 Fmoc 固相多肽合成流程”，尤其是带侧链保护的关键残基；表3最适合直接对应上机备料 | Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-His(Trt)-OH、Fmoc-His(3-Bom)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH |
想先从目标序列组成出发，理解有哪些氨基酸残基、哪些位点可能更敏感，再决定买哪些 Fmoc 单体 | 表4 | 表4不是直接上机用单体表，而是帮助读者先从天然氨基酸层面理解序列组成、残基性质和可能的合成难点，再与表3对应选单体 | His、Cys、Arg、Lys、Asp、Ser、Thr、Trp、Val、Ile、Pro 等残基的性质与潜在合成难点 |
想评估某条肽序列是否可能属于“较难合成”的类型，例如位阻较大、杂环残基较多、含硫或含羟基位点较多 | 先看表4，再看表3 | 先用表4判断序列由哪些残基构成，再到表3看这些残基对应的受保护单体是否需要特别关注；这种读法更适合前期路线评估 | β-支化残基（Val、Ile）、His、Cys、Ser、Thr、Arg、Lys 等 |
想比较不同偶联体系，筛选更适合常规位点和困难位点的缩合条件 | 表2 | 偶联体系的选择决定了活化方式、反应速度和副反应风险；这一步主要看偶联剂和添加剂的搭配，而不是先看氨基酸本身 | DIC/Oxyma、T-BEC/Oxyma、HATU/DIPEA、HBTU/DIPEA、PyBOP 等体系 |
想重点处理组氨酸、半胱氨酸、赖氨酸、精氨酸等更容易引出保护或副反应问题的残基 | 先看表3，再联看表2 | 先确定合适的受保护单体，再回到偶联和脱保护体系选择；这类问题通常不能只看单体，也不能只看偶联剂 | Fmoc-His(Trt)-OH、Fmoc-His(3-Bom)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH |
想做合成后粗肽检测、UHPLC/LC-MS 分析、样品复溶或纯度评估 | 表5 | 这类工作主要发生在合成后，关注的是分析和纯化流动相，而不是前面的装柱或偶联步骤 | 乙腈溶液、水 |
想把合成出来的肽用于细胞实验、培养体系评价或后续生物学研究 | 表5 | 这一步不再是“怎么把肽做出来”，而是“样品做出来之后怎么进入后续评价体系”；表5中的培养相关原料更适合这一阶段 | L-谷氨酸溶液、L-谷氨酰胺溶液、L-天冬酰胺 |
想从零开始梳理一套完整的实验思路：树脂装柱 → 偶联脱保护 → 单体备料 → 合成后分析 | 按“表1 → 表2 → 表3 → 表5”的顺序看；需要看序列性质时插入表4 | 这个顺序最符合实际实验流程：先确定固相体系和溶剂，再确定循环试剂，再准备单体，最后进入分析和后续应用；表4更适合在做序列判断和难点预判时穿插查看 | 适合新建路线、方法复现、条件优化和从整体上理解整套产品体系 |
表1｜固相载体、树脂装柱相关材料与主反应/预处理溶剂
分类 | Cas编号 | 阿拉丁货号 | 名称 | 规格或纯度 | 产品特色与应用 |
固相载体/酸敏装载树脂 | 42074-68-0 | 聚合物键合型 2-氯代三苯甲基氯 | 200-400目，标记范围：1.0-1.5 mmol/g Cl负载，1%交联 | 常用的酸敏装载树脂，适合多肽初始氨基酸装载和固相链延伸；切割条件较温和，常用于制备 C 端羧酸肽或后续进一步转化的树脂负载中间体。 | |
固相载体/酰胺型多肽树脂 | 183599-10-2 | Rink Amide-AM 树脂 | 0.3~0.8mmol/g, 100~200 mesh, 1% DVB | 常用的酰胺型固相多肽合成树脂，切割后通常得到 C 端酰胺化多肽；适合装填到小型反应柱或保护柱中进行自动化流动固相合成。 | |
树脂预溶胀/洗涤溶剂 | 75-09-2 | 二氯甲烷 | 无水级, ≥99.8%, 含有40-150ppm的戊烯作为稳定剂 | 常用于固相树脂的预溶胀、洗涤和溶剂置换，有助于改善树脂膨胀状态和传质性能；也常用于上柱前的树脂处理。 | |
树脂预溶胀/洗涤溶剂 | 107-06-2 | 1,2-二氯乙烷 | 无水级, ≥99.8%, H2O ≤0.005% | 可用于部分树脂体系的预溶胀、洗涤或溶剂切换，在需要调节树脂床状态和改善部分组分溶解性时具有实用价值。 | |
自动化流动固相多肽合成主反应溶剂 | 68-12-2 | N，N-二甲基甲酰胺（DMF） | 无水级, ≥99.8% | Fmoc 固相多肽合成中最常用的主反应溶剂之一，适用于氨基酸活化、偶联、脱保护和洗涤等步骤，是多肽链延伸过程中的基础溶剂。 | |
备用极性反应溶剂 | 872-50-4 | N-甲基吡咯烷酮（NMP） | 无水级, ≥99.5% | 常用的高极性非质子溶剂，可作为 DMF 的替代或补充，用于改善部分受保护氨基酸、偶联试剂或树脂体系的溶解和反应表现。 |
表2｜偶联、脱保护、切割与后处理相关试剂
分类 | Cas编号 | 阿拉丁货号 | 名称 | 规格或纯度 | 产品特色与应用 |
Fmoc脱保护关键碱 | 110-89-4 | 哌啶(易制毒) | 生物技术级,≥99.5% | Fmoc 保护策略中最常用的脱保护碱之一，常与 DMF 配合用于脱除 Fmoc 保护基，是每轮链延伸循环中的基础试剂。 | |
偶联活化常用有机碱 | 7087-68-5 | N,N-二异丙基乙胺 | 精馏级, ≥99.5% | 多肽偶联中常用的有机碱，可与 HATU、HBTU、PyBOP 等偶联试剂配合进行羧酸活化和缩合反应，也常用于中和和条件调节。 | |
经典碳二亚胺偶联剂 | 693-13-0 | N,N′-二异丙基碳二亚胺(DIC) | ≥98.5% | 常用的碳二亚胺偶联剂，通常与 Oxyma、HOBt 或 HOAt 配合使用，用于氨基酸偶联和肽键构建，是固相多肽合成中的常见基础试剂。 | |
传统/对照性碳二亚胺偶联剂 | 538-75-0 | N,N'-二环己基碳二亚胺(DCC) | ≥99% | 经典的羧酸活化试剂，可用于酰胺化、酯化和多肽偶联；在多肽合成中常作为传统碳二亚胺体系的代表试剂。适合作为传统对照体系 | |
碳二亚胺偶联剂/本文主线关键试剂 | 1433-27-8 | 1-叔丁基-3-乙基碳二亚胺 | ≥98% | 一种适用于多肽偶联的碳二亚胺试剂，常与 Oxyma 配合使用，用于氨基酸活化和肽键形成，适合自动化和流动条件下的偶联反应。 | |
偶联添加剂/本文主线关键试剂 | 3849-21-6 | 2-肟氰乙酸乙酯 | ≥98% | 即 Oxyma，常作为多肽偶联添加剂使用，可与碳二亚胺类试剂配合提高偶联效率，并帮助降低部分副反应发生。 | |
偶联添加剂/传统促进剂 | 123333-53-9 | 1-羟基苯并三唑一水合物 | ≥97% | 即 HOBt·H2O，经典偶联促进剂，常与 DIC、DCC 等碳二亚胺类试剂配合使用，用于提高羧酸活化效率并改善偶联表现。 | |
偶联添加剂/高活性促进剂 | 39968-33-7 | 1-羟基-7-偶氮苯并三氮唑（HOAt） | ≥99% | 高活性偶联添加剂，常与碳二亚胺或脲鎓/鏻盐类偶联试剂配合使用，有助于提升困难偶联的效率。 | |
脲鎓型常用偶联试剂 | 94790-37-1 | 苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU) | ≥99% | 常用的脲鎓型偶联试剂，可与 DIPEA 配合进行氨基酸活化和肽键构建，适用于常规 Fmoc 固相多肽合成。 | |
脲鎓型高效偶联试剂 | 148893-10-1 | O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU) | ≥99% | 高效脲鎓型偶联试剂，适合难偶联位点、位阻较大残基或快速活化条件下的肽键构建。 | |
鏻盐型偶联试剂 | 128625-52-5 | 1H-苯并三唑-1-基氧三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐 | ≥98% | 即 PyBOP，常用的鏻盐型偶联试剂，适用于多肽合成中的羧酸活化和酰胺键形成。 | |
多肽切割/纯化酸性试剂 | 76-05-1 | 三氟乙酸（TFA） | 用于蛋白测序, ≥99% | 多肽合成中最常用的强酸之一，可用于从酸敏树脂上切下肽链并同步脱除多数侧链保护基；也常作为反相 HPLC 纯化流动相添加剂。 | |
多肽切割捕获剂 | 6485-79-6 | 三异丙基硅烷（TIPS） | ≥98.5% | TFA 切割体系中的常见捕获剂，可清除反应过程中形成的活性中间体，减少敏感残基发生副反应。 |
表3｜可直接用于自动化流动 Fmoc 固相多肽合成的关键 Fmoc 单体
分类 | Cas编号 | 阿拉丁货号 | 名称 | 规格或纯度 | 产品特色与应用 |
关键 Fmoc 保护氨基酸单体（组氨酸低差向异构化选择） | 84891-19-0 | Fmoc-His(3-Bom)-OH | ≥99% | 组氨酸的受保护 Fmoc 单体，适用于 His 残基的固相多肽合成；Bom 保护方式有助于改进部分组氨酸偶联和差向异构化控制。 | |
直接上机 Fmoc 单体（含羟基残基） | 71989-33-8 | FMOC-O-叔丁基-L-丝氨酸 | ≥98% | 丝氨酸的受保护 Fmoc 单体，适用于 Ser 残基的链延伸；tBu 保护可避免侧链羟基参与副反应。 | |
直接上机 Fmoc 单体（构象敏感残基） | 71989-31-6 | Fmoc-L-脯氨酸 | ≥98% | 脯氨酸的 Fmoc 单体，可直接用于固相多肽合成；适合引入 Pro 残基并用于考察序列构象对偶联表现的影响。 | |
直接上机 Fmoc 单体（芳香疏水残基） | 35661-40-6 | Fmoc-L-苯丙氨酸 | ≥98% | 苯丙氨酸的 Fmoc 单体，属于常用基础单体之一，适用于构建疏水性或芳香性多肽序列。 | |
直接上机 Fmoc 单体（精氨酸受保护残基） | 154445-77-9 | Fmoc-Pbf-精氨酸 | ≥98% | 精氨酸的受保护 Fmoc 单体，Pbf 保护可减少胍基副反应，适用于 Arg 残基的稳定引入和后续全脱保护处理。 | |
直接上机 Fmoc 单体（半胱氨酸受保护残基） | 103213-32-7 | Fmoc-S-三苯甲基-L-半胱氨酸 | ≥98% | 半胱氨酸的受保护 Fmoc 单体，Trt 保护有助于减少硫醇氧化和侧反应，适合含硫肽段的组装。 | |
直接上机 Fmoc 单体（组氨酸受保护残基） | 109425-51-6 | N-Fmoc-N'-三苯甲基-L-组氨酸 | ≥98% | 组氨酸的常用受保护 Fmoc 单体，适用于 His 残基的固相链延伸；Trt 保护可提升组装过程中的化学稳定性。 | |
直接上机 Fmoc 单体（赖氨酸受保护残基） | 71989-26-9 | Nε-芴甲氧羰基-Nα-叔丁氧羰基-L-赖氨酸 | ≥98% | 赖氨酸的受保护 Fmoc 单体，Boc 保护 ε-氨基可避免侧链参与副反应，适用于 Lys 残基的稳定引入。 |
表4｜目标多肽序列对应的天然氨基酸参考物
分类 | Cas编号 | 阿拉丁货号 | 名称 | 规格或纯度 | 产品特色与应用 |
目标多肽序列对应的天然氨基酸参考物（最简单残基） | 56-40-6 | 甘氨酸 | UltraBio™, 分子生物学级, 超纯级, ≥99%(NT) | 可用于多肽序列组成、氨基酸性质和分析对照研究；若用于固相多肽合成，通常应选用相应的 Fmoc 保护衍生物。 | |
目标多肽序列对应的天然氨基酸参考物（中性脂肪族残基） | 56-41-7 | L-丙氨酸 | UltraBio™, 超纯级, ≥99.5%(NT) | 可作为 Ala 残基的基础参考物，用于序列分析、方法学研究或对照实验；实际链延伸通常使用 Fmoc-Ala-OH。 | |
目标多肽序列对应的天然氨基酸参考物（β-支化疏水残基） | 72-18-4 | L -缬氨酸 | UltraBio™, ≥99.5%(NT) | 可用于 Val 残基的组成分析和性质参考；在固相多肽合成中一般使用对应的 Fmoc 保护单体。 | |
目标多肽序列对应的天然氨基酸参考物（疏水脂肪族残基） | 61-90-5 | L-亮氨酸 | UltraBio™, 超纯级, ≥99.5%(NT) | 可用于 Leu 残基的组成分析和序列设计参考；实际固相组装时通常选用 Fmoc-Leu-OH。 | |
目标多肽序列对应的天然氨基酸参考物（β-支化疏水残基） | 73-32-5 | L -异亮氨酸 | UltraBio™, ≥99.5%(NT) | 可作为 Ile 残基的基础参考物，用于氨基酸组成分析和位阻性质判断；实际合成多采用 Fmoc-Ile-OH。 | |
目标多肽序列对应的天然氨基酸参考物（构象敏感残基） | 147-85-3 | L-脯氨酸 | UltraBio™, ≥99.5% | 可用于 Pro 残基的结构与构象研究；在固相多肽合成中常以 Fmoc-Pro-OH 形式用于链延伸。 | |
目标多肽序列对应的天然氨基酸参考物（含硫疏水残基） | 63-68-3 | L-甲硫氨酸 | Moligand™, ≥99% | 可作为 Met 残基的组成参考物，用于序列分析和方法开发；实际合成时通常采用 Fmoc-Met-OH。 | |
目标多肽序列对应的天然氨基酸参考物（芳香疏水残基） | 63-91-2 | L-苯丙氨酸 | Moligand™, ≥99% | 可用于芳香疏水残基分析和模型肽设计；实际固相组装中一般使用 Fmoc-Phe-OH。 | |
目标多肽序列对应的天然氨基酸参考物（芳香含酚残基） | 60-18-4 | L-酪氨酸 | UltraBio™, Moligand™, ≥99% | 可用于 Tyr 残基的组成和结构参考；在固相多肽合成中通常采用侧链受保护的 Fmoc-Tyr(tBu)-OH。 | |
目标多肽序列对应的天然氨基酸参考物（芳香杂环残基） | 73-22-3 | L-色氨酸 | UltraBio™, ≥99.5%(NT) | 可用于 Trp 残基的组成分析和方法学参考；实际合成中通常使用受保护的 Fmoc-Trp(Boc)-OH。 | |
目标多肽序列对应的天然氨基酸参考物（含羟基极性残基） | 56-45-1 | (S)-(+)-丝氨酸 | Moligand™, 适用于合成 | 可作为 Ser 残基的基础参考物，用于序列分析和合成设计；在固相多肽合成中通常选用 Fmoc-Ser(tBu)-OH。 | |
目标多肽序列对应的天然氨基酸参考物（含羟基极性残基） | 72-19-5 | L-苏氨酸 | UltraBio™, 超纯级, ≥99.5%(NT) | 可用于 Thr 残基的组成分析和极性残基研究；实际固相合成中通常使用受保护的 Fmoc-Thr(tBu)-OH。 | |
目标多肽序列对应的天然氨基酸参考物（酸性残基） | 56-84-8 | L-天冬氨酸 | UltraBio™, 超纯级, ≥99.5%(T) | 可作为 Asp 残基的基础参考物，用于序列组成和方法对照研究；实际固相合成中通常使用侧链受保护的 Fmoc-Asp(OtBu)-OH。 | |
目标多肽序列对应的天然氨基酸参考物（杂环/差向异构化敏感残基） | 71-00-1 | L-组氨酸 | UltraBio™, ≥99.5%(NT) | 可用于 His 残基的组成分析和方法学研究；在固相多肽合成中一般采用受保护的 Fmoc-His(Trt)-OH 或其他相应衍生物。 | |
目标多肽序列对应的天然氨基酸参考物（碱性氨基残基） | 56-87-1 | L-赖氨酸 | Moligand™, ≥98%, Metal＜500ppm | 可用于 Lys 残基的组成分析和结构参考；实际固相多肽合成中通常采用 Fmoc-Lys(Boc)-OH。 | |
目标多肽序列对应的天然氨基酸参考物（碱性胍基残基） | 74-79-3 | L-精氨酸 | Moligand™, ≥99%(HPLC) | 可用于 Arg 残基的组成分析和氨基酸性质研究；实际固相合成中通常采用侧链受保护的 Fmoc-Arg(Pbf)-OH。 | |
目标多肽序列对应的天然氨基酸参考物（含硫敏感残基） | 52-90-4 | L-半胱氨酸 | UltraBio™, ≥98.5%(RT) | 可用于 Cys 残基的基础研究和对照分析；实际固相多肽合成中通常选用受保护的 Fmoc-Cys(Trt)-OH。 |
表5｜多肽分析/纯化流动相与下游生物评价相关原料
分类 | Cas编号 | 阿拉丁货号 | 名称 | 规格或纯度 | 产品特色与应用 |
多肽分析/纯化流动相试剂 | 75-05-8 | 乙腈 溶液 | 质谱级 (MS), UltraPureChrom™, UHPLC级, contains 0.1 % (v/v) formic acid | 适用于 UHPLC 和 LC-MS 分析，可作为反相多肽检测和质谱兼容流动相使用，也常用于粗肽纯度评估和样品表征。 | |
多肽分析/纯化流动相试剂 | 7732-18-5 | 水 | 质谱级 (MS), UltraPureChrom™, UHPLC级 | 适用于配制多肽分析和纯化用水相流动相，也可用于样品复溶、稀释和检测前处理。 | |
下游生物评价/培养相关氨基酸补充剂 | 56-86-0 | L-谷氨酸溶液 (0.2 mol/L, 无菌) | 无菌过滤,BioReagent,用于细胞培养,0.2 mol/L | 适合用于细胞培养体系补充、培养基配制或多肽样品后续生物学评价相关实验。 | |
下游生物评价/培养相关氨基酸补充剂 | 56-85-9 | L-谷氨酰胺溶液 (0.1 mol/L, 无菌) | 无菌过滤,BioReagent,用于细胞培养,0.1 mol/L | 常用于细胞培养体系补充和功能实验相关培养条件配置，适合多肽样品后续生物学研究使用。 | |
下游生物评价/培养相关氨基酸补充剂 | 70-47-3 | L-天冬酰胺 | Moligand™, BioReagent, 用于细胞培养, 用于昆虫细胞培养 | 适合用于细胞培养、昆虫细胞培养和相关生物学实验中的营养补充与培养体系配置。 |
注：以上为阿拉丁代表产品，更多产品规格请关注文末产品清单或可用“品名/CAS/货号”在阿拉丁官网检索。
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参考文献
[1] Merrifield, R. B. Solid Phase Peptide Synthesis. I. The Synthesis of a Tetrapeptide. Journal of the American Chemical Society, 1963, 85(14), 2149–2154. DOI: 10.1021/ja00897a025.
[2] Mijalis, A. J.; Thomas, D. A.; Simon, M. D.; Adamo, A.; Beaumont, R.; Jensen, K. F.; Pentelute, B. L. A fully automated flow-based approach for accelerated peptide synthesis. Nature Chemical Biology, 2017, 13(5), 464–466. DOI: 10.1038/nchembio.2318.
[3] Hartrampf, N.; Saebi, A.; Poskus, M.; Gates, Z. P.; Callahan, A. J.; Cowfer, A. E.; Hanna, S.; Antilla, S.; Schissel, C. K.; Quartararo, A. J.; Ye, X.; Mijalis, A. J.; Simon, M. D.; Loas, A.; Liu, S.; Jessen, C.; Nielsen, T. E.; Pentelute, B. L. Synthesis of proteins by automated flow chemistry. Science, 2020, 368(6494), 980–987. DOI: 10.1126/science.abb2491.
[4] Schiefelbein, K.; Hartrampf, N. Flow-based Methods in Chemical Peptide and Protein Synthesis. CHIMIA, 2021, 75(6), 480. DOI: 10.2533/chimia.2021.480. PMID: 34233808.
[5] Romanens, P.; Barluenga, S.; Dockerill, M.; Winssinger, N. Peptides on Tap: Automated Flow Synthesis with Standard HPLC. ChemRxiv, 2025. DOI: 10.26434/chemrxiv-2025-6v687.
[6] Sperry, J. B.; Minteer, C. J.; Tao, J. Y.; Johnson, R.; Duzguner, R.; Hawksworth, M.; Oke, S.; Richardson, P. F.; Barnhart, R.; Bill, D. R.; Giusto, R. A.; Weaver, J. D. Thermal Stability Assessment of Peptide Coupling Reagents Commonly Used in Pharmaceutical Manufacturing. Organic Process Research & Development, 2018, 22(10), 1262–1275. DOI: 10.1021/acs.oprd.8b00193.
[7] Subirós-Funosas, R.; Prohens, R.; Barbas, R.; El-Faham, A.; Albericio, F. Oxyma: an efficient additive for peptide synthesis to replace the benzotriazole-based HOBt and HOAt with a lower risk of explosion. Chemistry – A European Journal, 2009, 15(37), 9394–9403. DOI: 10.1002/chem.200900614.
[8] Pawlas, J.; Choi, J. H.; von Bargen, C.; Maibom-Thomsen, S.; Rasmussen, J. H.; Ludemann-Hombourger, O. Elevating 1-tert-Butyl-3-ethylcarbodiimide (TBEC) as a Reagent for Sustainable Peptide Synthesis: Quality Assessment and Minimizing Racemization, Precipitation, and Radical-Induced Side Reactions by TBEC/Oxyma Couplings in an Environmentally Sensible Solvent. Organic Process Research & Development, 2023, 27(7), 1348–1364. DOI: 10.1021/acs.oprd.3c00120.
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