把生物分子装上红氧开关：ATTO MB2 NHS ester 的原理、偶联要点与应用导航
把生物分子装上红氧开关：ATTO MB2 NHS ester 的原理、偶联要点与应用导航
ATTO MB2 NHS ester 可以理解为：把经典红氧染料亚甲蓝（Methylene Blue）做成可与生物分子共价偶联的活性标签（NHS 酯与一级胺反应）。它的亮点不在“更花哨的颜色”，而在于可逆红氧开关：氧化态在~668 nm 具有强吸收，被还原后转为几乎无色的 leuko（还原态、白化/无色）形式；在有氧条件下又可被重新氧化、吸收恢复。
LMB（leucomethylene blue，白化亚甲蓝）在空气/溶解氧存在时会持续被氧化回 MB（methylene blue，亚甲蓝），这也是为什么 leuko 态往往难以在空气中长期保持；若要更稳定地控制 ON↔OFF，通常需要去氧环境或用电化学电位来驱动并锁定红氧状态。
1，什么叫“红氧开关”？
1.1 氧化/还原到底在说什么
(a) 氧化：把电子“拿走”（更缺电子）。
(b) 还原：把电子“给回来”（更富电子）。
亚甲蓝这一类染料很典型：氧化态是蓝色/强吸收，被还原后变成无色的 leucomethylene blue（白化亚甲蓝）；再遇到氧气等氧化条件又能“充回去”，吸收恢复。“有色 ↔ 无色”不是褪色，而是分子在做可逆的电子切换。
1.2 为什么很有用,亮点在哪
很多“普通染料”只能告诉你“在不在、多少”，而红氧染料多了一条信息通道：
- 不仅能看“光学信号”（吸收），还可能用电化学方式读出它的红氧状态（更像“电路读数”）。亚甲蓝体系在电化学生物传感中长期被用作红氧报告基团（redox reporter）。
- 电化学读出通常需要把探针固定在电极附近（或让其处于可控的电极界面距离内）；距离/构象变化会影响电子转移效率，否则信号可能很弱或重复性差。
2，为什么要从“游离亚甲蓝”升级到 Atto MB2？
ATTO MB2 属于“亚甲蓝衍生物”的商品化家族版本，厂商与资料通常强调的核心优势可以归纳为三点：
1. 保留经典亚甲蓝的可逆红氧开关
- ATTO MB2 仍是典型的红氧染料：可被还原为几乎无色的 leuko 形式，随后在氧化条件下（如空气/氧气）恢复到有色/强吸收的氧化态。
- 价值点：得到的不只是“有/无、多少”的光学信号，而是一个可被化学或电化学方式反复切换的“状态位点”。
2. 远红吸收 + 高消光系数
- ATTO MB2 的典型光谱常数（λabs≈668 nm，εmax≈1.0×10^5 M⁻¹·cm⁻¹，CF260=0.08，CF280=0.24；常以其 carboxy 对照体在水相中的数据给出）。其中 εmax 指最长波吸收峰处的摩尔消光系数，常用 Amax（该峰处吸光度）反推染料浓度，并用于计算标记度 DOL。
- 注意：具体 λabs/ε 会随溶剂、缓冲体系与 pH 略有漂移（常见是几 nm 级别）。
3. 性质更“可用”：可控的溶解/电荷特征 + 可共价安装
- ATTO MB2 中等亲水性、为阳离子染料；偶联到底物后染料基团净电荷约 +1。
- 注意：这里的 +1 指“染料基团”的净电荷描述；最终偶联物的整体电荷与非特异相互作用，仍会强烈受底物（蛋白/核酸）本身电荷与表面性质影响。
- ATTO MB2 提供了可反应的化学接口（如 NHS ester 等），让红氧标签能被稳定、可复现地共价安装到目标分子上，从而减少游离染料带来的漂移/流失/背景，并便于做更标准化的实验设计与对照。
小结：从“游离亚甲蓝（MB）”升级为“可共价安装、参数更标准化的红氧开关标签（ATTO MB2 家族）”。
3，NHS ester 是什么：让染料“能焊到分子上”的化学接口
如果说 ATTO MB2 是“带开关的芯片”，那么 NHS ester（N-羟基琥珀酰亚胺酯）就是它的“焊盘”——把染料共价接到生物分子上的常用化学接口。
3.1 它主要和谁反应？
NHS 酯最常见、最重要的用途是与生物分子上的一级胺（–NH₂）反应，形成稳定的酰胺键（amide bond）。蛋白质上最常见的胺来源于：
(a) N 端氨基
(b) 赖氨酸侧链（ε-氨基）
(c) 注：其他带一级胺的底物，如氨基修饰核酸、氨基化多糖/小分子，也同样适用。
3.2 为什么总强调 pH 8 左右、别用 Tris？
（1）pH 8.0–8.5：让“胺更能反应”，但别过碱
- 在 pH ~8.0–8.5 的轻碱条件下，胺更容易处于更“可进攻”的状态，偶联效率通常更高。
- 提醒：pH 越高，NHS 酯在水中的水解也会更快。所以不是越碱越好，常见做法是用轻碱缓冲、控制反应时间，并尽量减少水解窗口。
（2）别用 Tris/甘氨酸/乙醇胺等“含游离胺”的体系：会被缓冲液抢反应
- Tris、甘氨酸、乙醇胺等含有游离一级胺，会与底物一起竞争 NHS 酯，等于把染料消耗在缓冲液里，导致标记效率下降。
- 避免 “含游离胺”的缓冲液/添加剂；若样品在这类体系中，通常先脱盐/透析/凝胶过滤换到不含游离胺的缓冲体系后再做偶联。
- 部分含氨/铵体系在某些条件下可能带来竞争或干扰，因此实验上更推荐用常见的碳酸氢盐/碳酸盐缓冲来进行 NHS 偶联。
- 注：反应完成后若需要“终止/封闭”残余 NHS 酯，反而可以刻意加入 Tris 或乙醇胺做淬灭；关键在于它们应出现在“反应后”，而不是“反应中”。
（3）PBS/磷酸盐体系能不能用？
- 可以用于样品保存或前处理（如透析/脱盐），但真正进行 NHS 酯偶联时，通常再换到碳酸氢盐/碳酸盐或硼酸盐缓冲，把 pH 调到约 8.3–8.5 后启动反应，以获得更稳定的偶联效率与可控的水解窗口。
4，它能给哪些生物分子“装上开关”？
ATTO MB2 NHS ester 可用于标记 DNA、RNA、蛋白质（含抗体）。
注意：它是NHS ester（胺反应型）：对核酸而言通常指带一级胺修饰的 DNA/RNA（尤其寡核苷酸），否则需要先引入可反应胺位点再偶联。
1) 蛋白/抗体标记的核心是“抓胺来偶联，但每个蛋白的可反应胺位点不同”，所以首次建议做几个染料:蛋白摩尔比的小梯度。
典型条件为 0.1 M 碳酸氢盐缓冲液，pH 优选 8.3，室温 30–60 min；并特别提示蛋白别太稀：推荐约 2 mg/mL，低于 2 mg/mL 会降低标记效率。
2) 寡核苷酸通常用amino-modified oligo 与 NHS 酯反应，常见为碳酸盐缓冲液 pH 8–9、室温约 2 h；若需要更久，建议把 pH 下调到 7–7.5以减少水解/副反应。
无论标记蛋白/抗体还是氨基修饰寡核苷酸，反应后都应尽快去除未反应（游离）染料/水解染料，否则背景会上升且浓度与标记度（DOL）会被“自由染料”干扰。蛋白/抗体常用凝胶过滤/脱盐柱（如 Sephadex G-25）分离标记物与游离染料；对寡核苷酸则可用凝胶过滤或反相 HPLC获得更高纯度。
纯化完成后，再按说明书给出的校正因子（CF260/CF280）从 A260/A280 中扣除染料在 260/280 nm 的吸收贡献（例如：A260_corr = A260 − CF260×Amax；A280_corr = A280 − CF280×Amax，其中 Amax 为染料在其最大吸收峰处的吸光度），用校正后的浓度更可靠地计算 DOL。
5，ATTO MB2 NHS ester 实验要点清单
阶段 | 你要做什么 | 推荐条件/参数 | 最常见问题 | 快速自检 |
反应前｜缓冲体系 | 换成“不含胺”的偶联缓冲液 | 蛋白：0.1 M 碳酸氢盐，pH 优选 8.3；溶液需不含 Tris/甘氨酸/铵盐 | 用了 Tris/甘氨酸 → 染料被缓冲液“吃掉” | 反应体系里没有游离胺（Tris、氨基酸等） |
反应前｜染料溶解 | 现配染料母液，尽量避水 | 无胺、干燥 DMF 或 DMSO；母液建议现配以减少水解 | DMSO/DMF 吸潮 → NHS 水解失活；有操作指南提醒：DMF可能随储存分解出胺性杂质，会消耗活性酯。 | 母液透明、现配、全程尽量干燥避潮 |
反应前｜底物浓度 | 别把蛋白稀得太低 | 蛋白推荐 2 mg/mL；<2 mg/mL 会降低标记效率 | 蛋白太稀 → 有效碰撞少、水解占比高 | 先确认蛋白浓度≥2 mg/mL（或尽量靠近） |
反应中｜时间与比例 | 先做小范围摸索 | 建议：室温 30–60 min；首次标记建议尝试不同 dye:protein 比；一般 DOL 1–2 可作为起点 | 一上来追求高 DOL → 活性下降/聚集/背景高 | 先做 2–3 个摩尔比小梯度 |
反应后｜去游离染料 | 把“自由染料”彻底拿掉 | 凝胶过滤/凝胶渗透（推荐 Sephadex G-25）；通常先出峰是标记蛋白，后出峰是游离染料 | 纯化不干净 → 背景高、定量全错 | 看洗脱：是否出现“两段带色/吸收峰”并正确分段 |
读数与校正｜CF260/CF280 | 校正 A260/A280 里的“染料贡献” | ATTO MB2：CF260=0.08、CF280=0.24 | 把染料在 260/280 的吸收误当成核酸/蛋白 | 口头算法（同一稀释条件下测得）： （1） A260,corr = A260 − CF260 × Aλmax （2） A280,corr = A280 − CF280 × Aλmax 其中 Aλmax 为样品在染料最大吸收波长处的吸光度（ATTO MB2 约 668 nm）。 |
保存｜原料与偶联物 | 按说明书/蛋白习惯保存 | 原料：避光防潮，-20°C；偶联物：按蛋白条件，长期分装冻存避免反复冻融，使用前可离心去聚集 | 反复冻融/聚集 → 活性与重复性变差 | 分装、避光、用前短离心 |
备注：蛋白底物浓度提示：优先按说明书建议把蛋白尽量配到 ~2 mg/mL；若样品确实更稀，可通过提高染料摩尔比、缩小体积、缩短水解窗口等策略补偿，但需要做小梯度摸索。
蛋白/抗体与 amino-oligo 的关键参数对照
项目 | 蛋白/抗体 | 氨基修饰寡核苷酸（amino-oligo） |
缓冲液 | 0.1 M 碳酸氢盐，pH 优选 8.3 | 0.2 M 碳酸盐缓冲液，pH 8–9 |
底物浓度提示 | 推荐≈2 mg/mL； | 例：0.1 mM amino-oligo（示例） |
染料溶剂 | 干燥、无胺 DMF/DMSO；现配 | 干燥 DMF；示例 5 mg/mL |
反应时间 | 室温 30–60 min | 室温约 2 h；若更久，pH 降到 7–7.5 |
纯化 | 凝胶过滤（推荐 Sephadex G-25） | 凝胶过滤或反相 HPLC |
6，ATTO MB2 “开关标签”两层应用亮点
应用层级 | 能做什么 | 标签带来的“差异化能力” | 典型用途 |
层 1：可追踪化 + 红氧开关对照 | 把目标分子变成“可开关的吸收标记物” | 远红吸收特征 + 可逆红氧切换：还原→近无色 leuko，氧化→吸收恢复（ON↔OFF） | 方法学验证/对照/排错：确认偶联是否成功、纯化是否干净、信号变化是否来自标记分子而非背景；也可用于示踪与流程测试 |
层 2：可电学读出化（进阶亮点） | 同一个标签，除了“用光读”，还可“用电读” | 作为 redox reporter（红氧报告基团）：固定在电极附近可用 SWV 等读电流；当探针构象/距离变化→电子转移效率变→电流随之变化 | 电化学生物传感：将 ATTO MB2 接在 DNA/适配体探针末端，用作电化学输出端，实现对核酸杂交或蛋白靶标结合的电信号检测 |
小结：
同一个“开关标签”，既可以用光学（吸收）读，也可以在合适平台上用电化学读——这就是它区别于普通染料的核心价值。
7，导航表｜Atto MB2 相关产品：先选“用途路径”，再去对应产品表定位
典型需求/场景 | 优先看哪张表 | 为什么这张表最合适 | 在表里重点看哪些“分类关键词” |
要红氧响应染料：想把“可逆氧化还原/亚甲蓝衍生”特性写进方案，做红氧响应/恢复型标记或探针体系 | 表1 | 主推产品 Atto MB2 NHS ester 在表1；并且红氧体系常配套“共价标记/生物正交/中间体”一并选型 | 红氧活性酯（MB2）；胺标记｜NHS ester |
要给蛋白/抗体做常规胺标记：Lys/N端伯胺随机标记，做荧光抗体、蛋白示踪、常规多色面板 | 表1 | 表1集中收录各波段 NHS ester（活性酯）系列，是最常用的“伯胺偶联”入口 | 胺标记｜NHS ester（活性酯）（390/425/465/488/…/740） |
要更“定点”标记蛋白：主要标记 Cys 位点，减少随机性、提高位点可控（如定点偶联、构建更均一探针） | 表1 | 表1包含 Maleimide 与 Iodoacetamide 两条巯基路线：前者加成成稳定硫醚键，后者烷基化封闭/标记巯基 | 巯基标记｜Maleimide（定点）；巯基标记｜Iodoacetamide（烷基化） |
要做点击化学/生物正交标记：分子上已带叠氮/炔基，或要无铜快速反应（活细胞、快速标记、化学生物学） | 表1 | Click（Azide/Alkyne）与 IEDDA（Tetrazine）都在表1，属于“先装把手再点灯”的正交体系 | Click｜Azide（点击）/Click｜Alkyne（点击）；生物正交｜Tetrazine（IEDDA） |
要做糖链/羰基位点标记：氧化糖链后产生醛基/酮基，再把染料接上（糖蛋白/多糖标记） | 表1 | Hydrazide 专门用于羰基（醛/酮）位点的偶联路径，典型就是糖链氧化后标记 | 羰基/糖链｜Hydrazide |
不想买现成 NHS/Mal/Click：手里已有染料中间体或想自定义连接臂/反应路线（自建偶联、做衍生化） | 表1 | 表1有“可再偶联/中间体”品类：酸、羧酸端、胺端、spacer 胺，适合二次活化或做连接臂优化 | 中间体/可再偶联｜游离酸/羧酸；羧酸端；间隔臂胺；胺端衍生物 |
已有生物素化靶标，想做检测/富集/信号放大：用 biotin–streptavidin 体系做通用检测试剂 | 表2 | 表2是“亲和体系专区”：既有biotin-染料，也有streptavidin-染料成品探针，适合快速搭建体系 | 亲和体系｜Biotin；亲和体系｜Streptavidin 成品探针 |
要做二级探针/通用检测试剂：不想自己再把链霉亲和素和染料偶联，希望直接拿来用 | 表2 | 表2内的 streptavidin 成品探针可直接识别任何生物素化分子，省去偶联步骤，通用性最强 | Streptavidin 成品探针（488/647） |
要“直接上样就能用”的成品探针：不做化学偶联，只想快速染色/示踪/标记特定对象 | 表3 | 表3全部是“成品型”应用：膜脂质探针、葡聚糖示踪、F-actin 染色等，适合快速实验/对照 | 成品探针｜膜标记（脂质）；成品探针｜示踪（葡聚糖）；成品探针｜细胞骨架（F-actin） |
在做方法学/仪器/光谱对照：需要母体染料做亮度、谱线、稳定性、系统校准或对照 | 表3 | 表3包含“母体染料/对照”品类，适合做基础光学对照或后续衍生化参考 | 母体染料/对照 |
要标记 EV/脂质体/囊泡/膜体系：希望染料与脂质结合成“现成膜探针”快速上样 | 表3 | Atto 647N DOPE 属于成品脂质探针，常用于膜/囊泡/EV 直接标记，无需再偶联 | 成品探针｜膜标记（脂质） |
小结：
- 要“做化学偶联/构建探针” → 先看 表1（NHS / Maleimide / Click / IEDDA / Hydrazide / 中间体）。
- 要“生物素-亲和素通用检测试剂体系” → 看 表2（Biotin 与 Streptavidin 成品）。
- 要“拿来就用的成品探针/方法学对照” → 看 表3（DOPE 脂质、Dextran 示踪、F-actin 染色、母体染料对照）。
表1｜红氧活性酯（MB2） + 共价标记/生物正交 + 中间体（可再偶联）
分类 | 阿拉丁货号 | 名称 | Cas编号 | 规格或纯度 | 产品特色或应用 |
红氧活性酯（MB2） | Atto MB2 NHS ester | —— | ≥90%(HPLC), Methylene Blue derivative | 伯胺标记（NHS 酯）；亚甲蓝衍生可逆氧化还原染料，适合做红氧响应/恢复型标记与探针体系 | |
胺标记｜NHS ester（活性酯） | ATTO 390 NHS ester | 914203-48-8 | —— | 蛋白/抗体 Lys/N 端伯胺标记；短波通道对照/多色搭配 | |
胺标记｜NHS ester（活性酯） | Atto 425-NHS酯 | 892156-28-4 | ≥90% | 伯胺标记主力；适合做多色面板中靠前通道/对照 | |
胺标记｜NHS ester（活性酯） | ATTO 465 NHS ester | 1173020-88-6 | —— | 伯胺标记；蓝绿过渡通道常用，适合多重染色组合 | |
胺标记｜NHS ester（活性酯） | ATTO 488 NHS ester | 863772-22-9 | —— | 伯胺标记主力；488 通道经典选择，显微/流式常用 | |
胺标记｜NHS ester（活性酯） | ATTO 514 NHS ester | —— | —— | 伯胺标记；偏绿/黄绿通道补位，用于多色区分 | |
胺标记｜NHS ester（活性酯） | ATTO 532 NHS ester | 924660-19-5 | —— | 伯胺标记；绿黄区通道，适合与 488/594 拉开光谱 | |
胺标记｜NHS ester（活性酯） | ATTO 550 NHS ester | 1005770-00-2 | —— | 伯胺标记主力；橙红通道常用，适合降低背景/多色面板 | |
胺标记｜NHS ester（活性酯） | ATTO 594 NHS ester | —— | —— | 伯胺标记；红通道常用，适合与 488/647 组合 | |
胺标记｜NHS ester（活性酯） | ATTO 610 NHS-ester | —— | —— | 伯胺标记；红光区延展通道，用于多色补位 | |
胺标记｜NHS ester（活性酯） | ATTO 620 NHS-ester | —— | —— | 伯胺标记；红光区通道补位，适合面板扩展 | |
胺标记｜NHS ester（活性酯） | ATTO 633 NHS ester | 2982226-58-2 | —— | 伯胺标记主力；红光/远红入口通道，成像/流式常见 | |
胺标记｜NHS ester（活性酯） | ATTO 647 NHS ester | —— | —— | 伯胺标记主力；远红通道低背景，适合组织/厚样本趋势 | |
胺标记｜NHS ester（活性酯） | ATTO 665 NHS ester | —— | —— | 伯胺标记；更长波段远红通道，利于降低自发荧光干扰 | |
胺标记｜NHS ester（活性酯） | ATTO 680 NHS ester | 1537182-26-5 | —— | 伯胺标记；近红外方向选择，适合低背景/深部成像趋势 | |
胺标记｜NHS ester（活性酯） | ATTO 700 NHS ester | —— | —— | 伯胺标记；近红外通道，适合降低散射与背景（视仪器配置） | |
胺标记｜NHS ester（活性酯） | ATTO 725 NHS-Ester | —— | —— | 伯胺标记；更长波近红外通道，用于高背景样本的多色策略 | |
胺标记｜NHS ester（活性酯） | ATTO 740 NHS ester | 1448146-89-1 | —— | 伯胺标记；近红外更长波段，适合做远红/近红外面板延展 | |
巯基标记｜Maleimide（定点） | ATTO 488 maleimide | 1219127-42-0 | —— | 与 Cys 巯基选择性加成形成稳定硫醚键；用于更定点蛋白标记 | |
巯基标记｜Maleimide（定点） | ATTO 550 maleimide | 870534-97-7 | —— | 巯基定点标记；橙红通道，适合做多色中的“定点位点”标签 | |
巯基标记｜Maleimide（定点） | ATTO 647 maleimid | —— | —— | 巯基定点标记；远红通道，适合低背景定点偶联标记 | |
巯基标记｜Maleimide（定点） | ATTO 680 maleimide | 2413537-75-2 | —— | 巯基定点标记；近红外通道，适合低背景/深部成像趋势 | |
巯基标记｜Iodoacetamide（烷基化） | ATTO 488 iodacetamid | 2305285-47-4 | —— | 巯基烷基化（Cys）路线；适合需要强共价封闭/标记巯基的体系 | |
Click｜Azide（点击） | ATTO 550 azide | —— | —— | 点击化学把染料“接到”带炔基/环炔基底物上；用于生物正交标记方案 | |
Click｜Alkyne（点击） | ATTO 550 alkyne | —— | —— | 点击化学与叠氮底物配对；适合化学生物学/可控偶联体系 | |
Click｜Azide（点击） | ATTO 700 Azide | —— | —— | 近红外通道的点击化学版本；适合做低背景点击标记 | |
Click｜Alkyne（点击） | ATTO 700 Alkin | —— | —— | 近红外通道的点击化学版本；与 azide 配对使用 | |
生物正交｜Tetrazine（IEDDA） | ATTO 565 (tetrazine (MeTet) | —— | —— | IEDDA 快速无铜生物正交（常与 TCO 等配对）；适合活细胞/快速标记思路 | |
羰基/糖链｜Hydrazide | ATTO 488 hydrazid | —— | —— | 与醛/酮反应（常用于氧化糖链后羰基位点）；糖蛋白/多糖标记常用思路 | |
中间体/可再偶联｜游离酸/羧酸 | ATTO 425 Acid | 652966-03-5 | —— | 游离酸型染料；可作对照或用于自定义偶联/衍生化路线 | |
中间体/可再偶联｜羧酸端 | ATTO 488 carboxylic acid | 1443553-08-9 | —— | 羧酸端衍生物；可进一步活化（如 EDC/NHS）再与胺类偶联 | |
中间体/可再偶联｜间隔臂胺 | ATTO 550 cadaverin | —— | —— | 带 spacer 的胺端衍生物；降低位阻、提升可达性，便于后续偶联 | |
中间体/可再偶联｜胺端衍生物 | ATTO 665 amine | —— | —— | 胺端中间体；用于自定义合成/偶联或特定化学生物学连接策略 |
表2｜亲和体系（Biotin / Streptavidin）
分类 | 阿拉丁货号 | 名称 | Cas编号 | 规格或纯度 | 产品特色或应用 |
亲和体系｜Biotin | ATTO 488 biotin | —— | ≥98% | 生物素化探针；与 (链霉)亲和素高亲和结合，用于检测/富集/放大信号 | |
亲和体系｜Biotin | Atto 647N-生物素 | —— | BioReagent, 适用于荧光分析, ≥90%(HPLC) | 远红生物素化探针；适合低背景的 biotin–streptavidin 检测体系 | |
亲和体系｜Streptavidin 成品探针 | ATTO 488 streptavidin | 1430816-27-5 | —— | 成品链霉亲和素-染料二级探针；直接用于识别生物素化靶标 | |
亲和体系｜Streptavidin 成品探针 | ATTO 647 streptavidin | —— | —— | 远红 streptavidin 成品探针；生物素化体系的低背景检测/成像 |
表3｜成品探针+ 母体染料/对照
分类 | 阿拉丁货号 | 名称 | Cas编号 | 规格或纯度 | 产品特色或应用 |
成品探针｜膜标记（脂质） | Atto 647N DOPE | —— | 适用于荧光分析 | 膜/脂质体/囊泡/EV标记成品脂质探针；无需再偶联，直接上样 | |
成品探针｜示踪（葡聚糖） | ATTO488™-葡聚糖 | —— | 4 kDa | 小分子量 dextran 成品探针；常用于胞吞/扩散/示踪与对照实验 | |
成品探针｜示踪（葡聚糖） | ATTO647n™-赖氨酸-葡聚糖 | —— | 70 kDa | 高分子量远红 dextran 成品探针；用于内吞/示踪/体相分布研究 | |
成品探针｜细胞骨架（F-actin） | 鬼笔环肽–Atto 647N | —— | BioReagent, 适用于荧光分析, ≥80%(HPLC) | F-actin 染色成品探针；远红通道，适合与 488/550 等做多色共染 | |
母体染料/对照 | Atto 590 | —— | ≥95%, mixture of isomers | 染料母体/对照（异构体混合）；可用于光谱/染色对照或进一步衍生 | |
母体染料/对照 | ATTO Rho6G | —— | —— | 罗丹明类母体染料；常用于荧光性能/仪器与方法学对照（视实验目的） |
8，Atto MB2 NHS ester 实验配套化学品总览：缓冲/溶剂/色谱体系 × 偶联与封闭 × 红氧对照与验证
小表1｜缓冲盐/培养基基础组分 + 封闭/稳定组分（偶联反应、洗涤、储存常用）
分类 | Cas编号 | 阿拉丁货号 | 名称 | 规格或纯度 | 产品特色或作用 |
缓冲盐/培养基基础组分（离子强度） | 7647-14-5 | 氯化钠 | 用于植物细胞培养, ≥99.5% | 配制PBS/盐溶液与洗涤液；用于偶联后洗涤、稳定离子强度，降低非特异吸附。 | |
缓冲盐/培养基基础组分 | 7447-40-7 | 氯化钾 | 用于细胞培养, ≥99.5% | 配制PBS/细胞缓冲液、维持离子强度；用于偶联后洗涤与体系稳定。 | |
缓冲盐/培养基基础组分 | 12125-02-9 | 氯化铵 | 用于细胞培养 | 常见无机盐组分：用于培养/缓冲配方与离子强度控制；多用于体系搭建与对照（非必需偶联试剂）。注：NH4Cl 可用于培养/其它步骤；但在 NHS 偶联反应阶段按说明书建议避免使用铵盐体系。 | |
缓冲盐（磷酸盐体系） | 7778-77-0 | 磷酸二氢钾 | 用于植物细胞培养, ≥99% | 与K₂HPO₄/Na₂HPO₄等配伍配制磷酸盐缓冲液；用于偶联/洗涤/储存（注意避免含伯胺缓冲体系）。 | |
缓冲盐（磷酸盐体系） | 7758-11-4 | 磷酸氢二钾 | 无水级, 优级试剂, 适用于分析 | 与KH₂PO₄配伍配制磷酸盐缓冲液；用于偶联/洗涤/储存。 | |
缓冲盐（磷酸盐体系） | 7558-80-7 | 无水磷酸二氢钠 | 用于细胞培养, 用于昆虫细胞培养, ≥99%(T) | 配制磷酸盐缓冲液；用于反应前后样品处理、洗涤与储存。 | |
缓冲盐（磷酸盐体系） | 7558-79-4 | 磷酸氢二钠,无水 | 用于细胞培养, 用于昆虫细胞培养 | 与NaH₂PO₄配伍调pH，形成磷酸盐缓冲体系；用于偶联后的洗涤/储存。 | |
偶联缓冲体系（碳酸氢盐） | 144-55-8 | 碳酸氢钠 | 用于细胞培养, 用于昆虫细胞培养, ≥99.5% | NHS酯胺标记经典缓冲盐：常用NaHCO₃（pH≈8.3）提供伯胺去质子化环境，提高偶联效率、兼顾水解速率。 | |
偶联缓冲体系（碳酸盐） | 497-19-8 | 碳酸钠 | 无水级, 优级试剂, 适用于分析 | 配制碳酸盐缓冲液（偏碱pH）：可用于NHS酯偶联的碱性条件（注意pH越高水解越快，需权衡效率与水解）。 | |
缓冲体系（硼酸/硼酸盐） | 10043-35-3 | 硼酸 | 用于细胞培养, 用于昆虫细胞培养, ≥99.5% | 配制硼酸盐缓冲液（常在偏碱pH使用）；可用于某些标记/洗涤条件与方法学对照。 | |
缓冲体系（硼酸盐） | 1303-96-4 | 四硼酸钠，十水 | 化学纯（CP）, ≥99% | 硼酸盐缓冲体系常用盐；用于偏碱pH条件的反应/洗涤/方法学对照。 | |
封闭/终止（伯胺封闭剂） | 141-43-5 | 乙醇胺 | 用于细胞培养, ≥99% | 伯胺封闭/终止试剂：用于偶联后“封闭残余NHS酯/活化位点”（capping），降低后续非特异反应。 | |
终止/封闭（小分子伯胺） | 56-40-6 | 甘氨酸 | UltraBio™, 分子生物学级, 超纯级, ≥99%(NT) | 含伯胺：可用于淬灭/封闭残余活性酯（capping）；也常用于缓冲/电泳体系（偶联反应本身阶段应避免作为主缓冲）。 | |
稳定剂/增溶（样品储存） | 56-81-5 | 甘油 | 用于细胞培养, 用于昆虫细胞培养, ≥99%(GC) | 作为蛋白/探针储存稳定剂（防冻、减少聚集）；用于已标记蛋白/探针的保存与上样缓冲配方。 |
小表2｜溶剂 + 色谱/质谱添加剂 + 反应终止/条件调节（LC-MS/HPLC与后处理）
分类 | Cas编号 | 阿拉丁货号 | 名称 | 规格或纯度 | 产品特色或作用 |
溶剂/色谱-MS（流动相） | 75-05-8 | 乙腈 溶液 | 质谱级 (MS), UltraPureChrom™, UHPLC级, contains 0.1 % (v/v) formic acid | LC-MS/UPLC 常用有机相；用于游离染料/偶联产物的分析检测与纯化方法开发（0.1% FA 便于ESI电离）。 | |
溶剂（染料溶解/储备液） | 67-68-5 | 二甲基亚砜（DMSO） | 医药级, PharmPure™ | 常用极性溶剂：用于配制Atto MB2 NHS ester高浓度储备液并少量加入反应体系（降低水解、提高溶解度）。 | |
溶剂（无水偶联体系） | 68-12-2 | N，N-二甲基甲酰胺（DMF） | 无水级, ≥99.8% | 无水极性溶剂：用于溶解NHS酯染料、进行低水活度偶联/衍生化与方法学开发（减少水解）。 | |
酸/流动相添加剂（终止/纯化） | 76-05-1 | 三氟乙酸（TFA） | 用于蛋白测序, ≥99% | 肽/蛋白HPLC常用酸性添加剂；也可用于快速终止胺偶联（酸化使胺质子化、降低反应）。 | |
酸/流动相添加剂（pH调节） | 64-19-7 | 冰乙酸 | 优级试剂, ≥99.5% | 配制乙酸/乙酸盐体系、pH微调；也可用于终止反应/后处理（使胺质子化、降低NHS酯继续反应）。 | |
碱/催化（非亲核碱） | 121-44-8 | 三乙基胺 | 用于蛋白测序, ≥99.5%(GC), 安瓿 | 三级胺碱：用于pH微调/促进某些偶联与色谱条件；不提供可与NHS酯直接酰化的伯胺位点（但仍可能影响水解速率与体系pH）。 | |
色谱缓冲/离子对（寡核苷酸HPLC） | 5204-74-0 | 醋酸三乙铵，1 M溶液 | Ready-to-use buffer solution used for the purification of chemically synthesized oligonucleotides by HPLC. Has a pH of 7.0. | TEAA离子对体系：用于寡核苷酸/核酸相关样品（含染料标记）的HPLC纯化方法（尤其反相/离子对策略）。 |
小表3｜偶联化学试剂 + 红氧/对照体系 + 模型材料/质控标准（体系搭建与验证）
分类 | Cas编号 | 阿拉丁货号 | 名称 | 规格或纯度 | 产品特色或作用 |
偶联试剂（羧酸-胺偶联） | 25952-53-8 | Aladdin™ EDC | 分析标准品 | 碳二亚胺：用于活化羧酸与胺偶联（与NHS/水溶性NHS配套）；可用于与“羧酸端染料/载体”构建对照路线，或做衍生化/二次偶联。 | |
偶联助剂（活性酯生成） | 6066-82-6 | N-羟基琥珀酰亚胺 (NHS) | ≥98% | 与EDC配套：将羧酸活化为NHS酯提高胺偶联效率；也用于构建“非MB2 NHS酯路线”的对照/二次偶联。 | |
偶联助剂（水溶性活性酯） | 106627-54-7 | N-羟基硫代琥珀酰亚胺 钠盐 | ≥98% | 水溶性NHS类助剂：用于水相EDC偶联提高效率、减少副反应；适合在更水相条件下构建对照偶联体系。 | |
载体/模型底物（多糖） | 9004-54-0 | 葡聚糖 | 优级品 | 作为模型大分子/载体：可做“先氧化产生醛基→再与hydrazide/胺类连接”的对照路线；也常用于示踪体系的原料对照。 | |
聚合物/基材（体系构建） | 9003-05-8 | 聚丙烯酰胺(PAM) | 阴离子;分子量:16000kD-18000kD,水解度:30-40% | 高分子聚合物基材/助剂：可用于构建高黏体系/聚合物环境对照或与带胺/带电体系相互作用的条件筛选（可用于体系设计/对照）。 | |
还原剂（红氧切换/对照） | 7775-14-6 | 连二亚硫酸钠 | 适用于分析, 优级品 | 强还原剂：可将亚甲蓝类/MB2体系还原至无色leuko形态；用于可逆红氧切换实验、吸收/信号恢复对照。 | |
还原/抗氧化（红氧对照） | 50-81-7 | L -抗坏血酸 | UltraBio™, 超纯级, ≥99.5%(RT) | 温和还原剂/抗氧化剂：用于MB2/亚甲蓝体系的还原态生成与抗氧化保护，也可降低氧化应激导致的信号漂移。 | |
染料对照（母体/参考） | 61-73-4 | 亚甲基蓝 | ≥70% | Atto MB2 的母体家族染料对照：用于吸收/还原-氧化可逆性、光谱与红氧行为的参考基线。 | |
染料对照（同系物/批次对照） | 122965-43-9 | 亚甲基兰 | ≥96% | 作为亚甲蓝相关染料的对照/替代来源：用于与MB2/亚甲基蓝做光谱与红氧行为对比（具体同系物属性以实际说明书为准）。 | |
氧化还原对照（铁氰化物体系） | 14459-95-1 | 三水合六氰基铁(II)钾 | 欧洲药典（Ph.Eur）, 适用于分析, ACS, 优级品 | [Fe(CN)₆]⁴⁻：与铁氰化物(III)配对构成经典可逆红氧对；用于MB2/亚甲蓝体系的氧化还原循环、电子转移对照。提示：铁(氰)化物/亚铁(氰)化物体系应避免在强酸条件下处理；不要与 TFA、浓酸等直接混用，建议保持中性/弱碱并按实验室安全规范处置。 | |
氧化还原对照（铁氰化物体系） | 13746-66-2 | 六氰基铁酸钾(III) | 欧洲药典（Ph.Eur）, 适用于分析, ACS, 优级品 | [Fe(CN)₆]³⁻：温和氧化剂；用于将还原态染料再氧化回有色态，做红氧响应/恢复曲线对照。提示同上 | |
氧化还原/核酸体系对照（Ru(III)配合物） | 14282-91-8 | 氯化六氨合钌(III) | ≥98% | 典型可逆红氧配合物/核酸体系常用电化学探针之一：可用于红氧对照、电子转移/电化学读出条件的参考试剂（视具体方案）。 | |
分析/质控标准 | 84-65-1 | 蒽醌 | 熔点标准品 | 熔点标准品：用于质控/方法学设备校验（用于实验室分析体系规范化）。 |
注：以上为阿拉丁代表产品，更多产品规格请关注文末产品清单或用品名/CAS在阿拉丁官网搜索。
危险品化学品经营许可证（带存储）