RAS突变驱动胰腺癌、结直肠癌和肺癌等多种肿瘤，但因结构口袋浅、GTP结合紧密，长期难以成药。RAS(ON)抑制剂、分子胶和PROTAC的出现，使RAS干预从阻断信号走向清除致癌蛋白。

        关键词：RAS；KRAS；NRAS；HRAS；RAS(ON)；小GTP酶；E3连接酶；分子胶；PROTAC；蛋白降解

1 RAS为什么是重要肿瘤靶点

1.1 RAS不是通路名称，而是蛋白靶点

        RAS靶点通常指KRAS、NRAS和HRAS编码的Ras蛋白。Ras蛋白属于小GTP酶，通过GDP结合态和GTP结合态之间的转换控制信号输出。正常细胞中，RAS活化具有刺激依赖性和短暂性；肿瘤细胞中，致癌突变可使RAS长期维持GTP结合活性态，持续驱动细胞增殖、存活、代谢适应和迁移侵袭。因此，RAS既是分子开关，也是可被抑制剂、分子胶或PROTAC识别和干预的蛋白靶点。

1.2 KRAS、NRAS和HRAS的差异

        KRAS、NRAS和HRAS同属RAS原癌基因家族，但不能在实验设计和药物筛选中简单互相替代。KRAS编码K-Ras蛋白，是当前RAS靶向药物开发中最核心的成员；NRAS编码N-Ras蛋白，常与黑色素瘤和血液系统肿瘤相关；HRAS，即Harvey Rat Sarcoma Viral Oncogene Homolog，编码H-Ras蛋白，是RAS家族的经典成员之一，更常用于脂质化、膜定位和HRAS选择性干预研究。

1.3 RAS结构决定其靶向难度

        Ras蛋白具有GTP结合结构域、Switch I区、Switch II区和C端膜定位相关区域。GTP结合结构域决定其小GTP酶属性，但RAS与GTP/GDP结合紧密，直接竞争核苷酸结合位点难度很高。Switch I和Switch II区在GDP/GTP状态转换中发生构象变化，决定RAS与RAF、PI3K、RalGDS等效应蛋白的结合能力，也是RAS(ON)药物识别的重要区域。C端高变区和CaaX基序参与脂质化修饰与膜定位，使RAS信号依赖特定膜区室和空间构象。

2 RAS突变如何持续激活致癌信号

2.1 GDP/GTP分子开关

        RAS的信号状态由GDP/GTP循环决定。GDP结合态通常为低活性状态，GTP结合态即RAS(ON)状态，可结合下游效应蛋白并启动信号转导。GEF如SOS1促进GDP释放和GTP结合，使RAS进入ON状态；GAP如NF1促进GTP水解，使RAS回到OFF状态。致癌突变削弱GTP水解或GAP介导失活后，RAS便会长时间维持活性构象。

2.2 G12、G13和Q61突变

        RAS致癌突变多集中在G12、G13和Q61位点。G12和G13位于GTP结合口袋附近，可影响GAP介导的GTP水解；Q61直接参与GTP水解反应的催化过程。KRAS G12C、G12D、G12V、G13D和NRAS Q61等突变在结构构象、下游依赖、药物结合口袋和耐药路径上均存在差异，不能只用“RAS突变”笼统概括。

2.3 下游信号输出

        活性RAS主要通过RAF-MEK-ERK、PI3K-AKT和RalGDS-Ral等分支调节肿瘤细胞行为。RAF-MEK-ERK通路与增殖和转录输出密切相关，常用p-MEK、p-ERK、DUSP6等指标判断；PI3K-AKT通路参与存活、代谢和抗凋亡，常用p-AKT、p-mTOR和细胞活性指标评价；Ral和Rho/Rac相关分支参与囊泡运输、细胞骨架、迁移和侵袭。单一p-ERK读数不能覆盖全部RAS生物学效应，也不能直接证明RAS是否被降解。

图1 RTK介导的RAS GDP/GTP循环及主要下游信号通路

3 RAS为什么从“难成药”变成可靶向

3.1 传统成药障碍

        RAS曾长期被认为难以成药，核心原因包括核苷酸结合位点难以竞争、蛋白表面缺乏深口袋、Switch区构象动态性强，以及RAS功能依赖膜定位和效应蛋白互作。体外能够结合RAS的候选物，未必能在细胞内接近正确构象或有效阻断信号。因此，RAS药物开发的关键逐渐从“竞争GTP结合”转向“识别突变口袋、活性构象和蛋白互作界面”。

3.2 突变特异性抑制剂

        突变特异性抑制剂利用特定突变形成的结构差异实现选择性结合。KRAS G12C抑制剂是这一方向的代表，通过突变半胱氨酸形成共价结合，从而限制KRAS信号输出。该策略选择性强、机制清晰，但覆盖范围有限，难以直接扩展到G12D、G12V、Q61等所有RAS突变背景。评价这类药物时，应重点确认突变型/野生型选择性、RAS-效应蛋白互作下降和MAPK通路抑制，而不应只看细胞增殖是否下降。

3.3 RAS(ON)活性构象抑制剂

        RAS(ON)抑制剂将识别对象从单一突变口袋拓展到GTP结合活性构象。daraxonrasib等RAS(ON)多选择性策略的核心，是识别活性RAS并阻断RAS与下游效应蛋白之间的信号连接。这类策略的意义在于证明活性RAS构象本身可以成为药物开发入口。若候选物只表现为p-ERK下降，但没有证明GTP态RAS选择性或RAS-效应蛋白互作下降，就不能充分支持RAS(ON)靶向机制。

4 E3连接酶如何把RAS干预推进到蛋白降解

4.1 E3连接酶在RAS降解中的角色

        E3连接酶不是RAS家族成员，也不是RAS下游通路，而是泛素-蛋白酶体系统中的底物选择节点。RAS降解研究中，RAS是待清除的靶蛋白，E3连接酶负责将靶蛋白引入泛素化流程。小分子结合RAS并不会自动导致降解，只有当RAS与E3连接酶形成有利于泛素转移的空间关系，才可能出现蛋白酶体依赖性降解。

4.2 PROTAC与分子胶降解机制

        PROTAC通过双功能分子将RAS结合端和E3连接酶配体连接起来，使RAS与CRBN、VHL等E3系统形成三元复合物。分子胶降解剂则通过诱导或稳定蛋白互作，使E3连接酶识别新的底物。二者都依赖E3连接酶，但作用方式不同；更重要的是，分子胶式抑制剂与分子胶降解剂不能混为一谈，前者可阻断信号但未必诱导蛋白降解。

（1）RAS结合端

        决定候选物识别KRAS、NRAS、HRAS，还是特定突变型或RAS(ON)构象。

（2）连接臂或诱导界面

        决定RAS与E3连接酶之间的空间距离、取向和柔性，直接影响是否适合泛素转移。

（3）E3连接酶系统

        决定候选物募集CRBN、VHL或其他E3系统，并影响降解效率、细胞背景依赖性和脱靶风险。

4.3 CRBN和VHL的选择

        CRBN和VHL是靶向蛋白降解研究中常用的E3连接酶系统。二者在配体结构、复合物构象、底物谱和细胞表达背景方面不同，因此更换E3系统后，降解效率变化不一定来自RAS结合端本身，也可能来自三元复合物取向、泛素化位点可及性或E3表达差异。RAS降解剂开发不能只优化靶点亲和力，还要验证E3依赖性和蛋白酶体依赖性。

5 RAS抑制与RAS降解如何区分

5.1 功能抑制不等于蛋白降解

        RAS功能抑制的核心是降低RAS信号输出，总RAS蛋白可以保持不变。突变特异性抑制剂和RAS(ON)抑制剂可降低RAS-RAF互作、p-MEK、p-ERK和细胞增殖，但这并不说明RAS被清除。RAS靶向降解则必须看到总KRAS、NRAS或HRAS水平下降，并进一步证明泛素化增强、E3依赖性和蛋白酶体依赖性。

5.2 实验评价重点

        RAS抑制剂评价应覆盖靶点结合、GTP态/GDP态构象选择、RAS-效应蛋白互作和下游通路输出。RAS降解剂评价则必须增加E3募集、RAS泛素化、总RAS下降、蛋白酶体依赖性和E3依赖性验证。只观察细胞增殖下降或p-ERK下降，不能证明靶向降解成立。

6 RAS靶向耐药与联合干预

6.1 抑制剂耐药

        RAS抑制剂耐药常来自靶点改变和通路补偿。靶点层面包括二级突变、药物结合口袋改变和RAS构象变化；通路层面包括RTK反馈激活、SHP2/SOS1依赖增强、MAPK通路恢复和PI3K-AKT补偿。若原靶点被抑制但p-ERK或p-AKT恢复，应优先排查旁路RTK、SHP2/SOS1和下游通路突变。

6.2 降解剂耐药

        RAS降解剂还可能受到蛋白稳态系统限制。CRBN或VHL表达下降、E3复合物功能异常、蛋白酶体活性改变、RAS结合表位变化或细胞内定位改变，都可能削弱降解效率。此类耐药不一定表现为候选物无法结合RAS，也可能表现为E3募集失败、泛素化不足或蛋白酶体处理能力下降。

6.3 联合干预方向

        联合干预应根据耐药来源选择节点。上游反馈明显时，可围绕RTK、SHP2或SOS1进行干预；下游MAPK或PI3K-AKT恢复时，应评估MEK、ERK、PI3K或AKT相关节点；降解效率不足时，则需要重新评估E3连接酶表达、连接臂结构、三元复合物稳定性和蛋白酶体依赖性。联合策略不能只看细胞活性下降，还应判断是否真正压制耐药环节。

7 RAS靶向研究相关产品

        RAS靶向研究的关键已经从“能否抑制下游信号”扩展到“能否识别活性构象并清除致癌蛋白”。RAS GTP酶决定靶点状态和构象识别，E3连接酶决定泛素化和蛋白酶体降解是否发生。围绕这两类核心工具建立实验体系，是理解RAS(ON)抑制剂、分子胶和PROTAC作用机制的基础。

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