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干扰素刺激基因在抗病毒免疫中的作用：RIG-I、MDA5、IFI35与ISG表达调控

· · 发布于 2026年7月23日 · 更新于 2026年7月23日 ·

干扰素刺激基因（ISG）是细胞抗病毒状态建立的核心执行层。病毒RNA被RIG-I、MDA5等模式识别受体识别后，可经MAVS、TBK1、IRF3/IRF7和NF-κB诱导I型/III型干扰素产生，再通过JAK-STAT通路驱动ISG表达。IFI35等ISG相关调控因子可参与干扰素反应强度、持续时间和炎症输出的精细调节。

关键词：干扰素刺激基因；RIG-I；MDA5；IFI35；ISG；抗病毒免疫；I型干扰素；JAK-STAT

1 干扰素刺激基因与抗病毒免疫的研究逻辑

1.1 ISG的功能定位

（1）抗病毒效应执行

ISG是干扰素信号激活后诱导表达的一组效应基因，覆盖病毒入侵限制、病毒RNA降解、蛋白翻译抑制、病毒复制复合体干扰、颗粒装配抑制和感染细胞免疫标记等多个环节。常见ISG包括ISG15、MX1、OAS1、OAS2、IFIT1、IFIT2、IFIT3、RSAD2、PKR/EIF2AK2、IFITM1/2/3和BST2等。

（2）信号放大与反馈调控

ISG不只是抗病毒终末效应分子，也可参与上游信号调节。部分ISG能增强病毒核酸识别或促进干扰素反应，另一些则限制过度炎症和持续性JAK-STAT激活。抗病毒免疫研究中，应同时关注ISG的效应功能和反馈调控功能。

（3）细胞类型依赖性

不同细胞中ISG表达谱差异明显。上皮细胞、巨噬细胞、树突状细胞、肝细胞、神经细胞和肿瘤细胞对病毒感染、dsRNA模拟物、I型干扰素或III型干扰素的响应不同。实验设计不能只检测单一ISG，而应结合细胞类型、病毒类型和感染阶段选择指标组合。

1.2 抗病毒信号的基本轴线

（1）病毒RNA识别

RIG-I和MDA5是胞质RNA病毒识别中的关键RLR（RIG-I-like receptor）成员。RIG-I更偏向识别带5′-三磷酸、短双链区域或特定末端结构的病毒RNA；MDA5更常与较长双链RNA或复制中间体相关。两者识别对象不同，但均可经MAVS连接下游抗病毒信号。

（2）干扰素诱导

RIG-I或MDA5激活后，MAVS在线粒体外膜形成信号平台，进一步激活TBK1、IKKε、IRF3、IRF7和NF-κB。IRF3/IRF7促进IFNB1、IFNA亚型和部分干扰素相关基因转录，NF-κB则驱动炎症因子和趋化因子表达，如TNF、IL6、CXCL10和CCL5。

（3）ISG表达执行

分泌出的IFN-β、IFN-α或IFN-λ与相应受体结合后，激活JAK1、TYK2、STAT1和STAT2，形成ISGF3复合物并进入细胞核，诱导ISRE依赖的ISG表达。此时，细胞进入抗病毒预警状态，对病毒复制和传播形成限制。

表1 RIG-I/MDA5-IFN-ISG抗病毒信号框架

分析层面	核心分子	推荐检测方法	判读重点
病毒RNA识别	RIG-I/DDX58、MDA5/IFIH1	qPCR、Western blot、IF、敲低/敲除	区分病毒RNA识别受体来源和激活条件
接头蛋白信号	MAVS	Western blot、IF、线粒体定位分析	判断RLR信号是否进入MAVS平台
激酶激活	TBK1、IKKε、p-TBK1	Western blot、磷酸化抗体检测	评价IRF3激活前的关键节点
转录因子激活	IRF3、p-IRF3、IRF7、NF-κB p65	Western blot、核转位、报告基因	判断干扰素和炎症因子转录启动
干扰素产生	IFNB1、IFNA、IFNL1/2/3	qPCR、ELISA、报告基因	区分I型和III型干扰素反应
ISG表达	ISG15、MX1、OAS1、IFIT1、RSAD2、IFI35	qPCR、Western blot、RNA-seq	评价抗病毒状态建立程度
抗病毒效应	病毒RNA、病毒蛋白、感染率、病毒滴度	qPCR、TCID50、Plaque assay、IF	将信号变化与病毒复制结果关联

2 RIG-I与MDA5在病毒RNA识别中的分工

2.1 RIG-I信号特征

（1）识别短RNA和5′-三磷酸结构

RIG-I由DDX58编码，属于胞质RNA传感器，常识别具有5′-三磷酸或5′-二磷酸末端、短双链结构或特定病毒RNA构象的RNA。许多负链RNA病毒、部分正链RNA病毒复制中间体和人工5′ppp RNA可诱导RIG-I激活。

（2）CARD结构域介导MAVS激活

RIG-I在结合病毒RNA后构象发生变化，暴露N端CARD结构域，并与MAVS发生相互作用。MAVS激活后进一步招募下游激酶复合体，引发IRF3/IRF7和NF-κB通路启动。

（3）实验判读要点

RIG-I表达升高不等同于RIG-I激活。研究中应结合RIG-I蛋白构象、MAVS下游信号、p-TBK1、p-IRF3、IFNB1和ISG表达判断。若RIG-I升高但IFNB1和ISG无明显变化，可能代表预激活状态、反馈诱导或识别底物不足。

2.2 MDA5信号特征

（1）识别长dsRNA或病毒复制中间体

MDA5由IFIH1编码，常与长双链RNA、病毒复制中间体和部分正链RNA病毒识别相关。Poly(I:C)高分子量形式常用于模拟MDA5相关dsRNA刺激，但实际响应仍受递送方式、细胞类型和内体TLR3背景影响。

（2）寡聚化和信号阈值

MDA5对长dsRNA的识别通常伴随沿RNA分子组装和寡聚化。其信号启动具有一定阈值特征，低水平或短片段dsRNA未必足以诱导强烈MDA5信号。高剂量刺激则可能引发强干扰素反应和细胞毒性，需要同步评估细胞活性。

（3）与RIG-I的互补关系

RIG-I和MDA5对病毒类型和RNA构象的偏好不同，但在许多病毒感染中可存在交叉或阶段性协同。早期感染中RIG-I可能更快响应特定病毒RNA，复制中后期MDA5可能对累积dsRNA中间体产生更强贡献。判断二者作用时，应采用敲低、敲除或特异性刺激物比较。

2.3 RIG-I/MDA5结果判读

（1）按病毒类型判断

流感病毒、VSV、SeV等常用于RIG-I相关信号研究；EMCV、部分小RNA病毒和长dsRNA模拟物常用于MDA5相关研究。不同病毒复制方式、RNA结构和免疫逃逸蛋白不同，不能用一种病毒模型概括所有RLR信号。

（2）按刺激方式判断

转染5′ppp RNA、短dsRNA或病毒RNA提取物更适合评价RIG-I；高分子量Poly(I:C)胞质递送更适合评价MDA5；若Poly(I:C)未转染而直接加到培养基中，结果可能更多涉及TLR3或内吞途径。

（3）按下游信号判断

RIG-I/MDA5均通过MAVS进入TBK1-IRF3和NF-κB通路，因此单看IFNB1或ISG上升无法区分具体上游受体。应结合DDX58、IFIH1敲低/敲除、MAVS缺失、刺激物类型和病毒模型综合判读。

表2 RIG-I与MDA5抗病毒识别特征比较

比较维度	RIG-I/DDX58	MDA5/IFIH1
主要识别对象	5′-三磷酸RNA、短dsRNA、特定病毒RNA结构	长dsRNA、病毒复制中间体、高分子量dsRNA
典型刺激物	5′ppp RNA、短dsRNA、部分病毒RNA	高分子量Poly(I:C)、长dsRNA、特定RNA病毒复制产物
关键接头蛋白	MAVS	MAVS
主要下游通路	TBK1-IRF3、NF-κB	TBK1-IRF3、NF-κB
常见读数	IFNB1、CXCL10、ISG15、MX1、p-IRF3	IFNB1、IFIT1、OAS1、MX1、p-IRF3
优化重点	刺激RNA构型、转染效率、RIG-I激活状态	dsRNA长度、胞质递送、刺激剂量和细胞毒性
判读风险	RIG-I表达升高不等于激活	Poly(I:C)结果可能混入TLR3信号

3 IFI35在干扰素反应中的调控位置

3.1 IFI35的基本特征

（1）干扰素诱导表达

IFI35属于干扰素诱导相关蛋白，可在病毒感染、I型干扰素刺激或炎症信号激活后上调。其表达变化常与ISG表达谱同步出现，因此可作为干扰素反应状态的指标之一。

（2）反馈调控属性

IFI35并非典型病毒RNA传感器，也不是直接抗病毒酶。其更适合被理解为干扰素反应中的调控因子，可能参与调节RLR相关信号、炎症输出或ISG表达强度。研究IFI35时，应关注其对IFNB1、ISG15、MX1、OAS1、IFIT1和CXCL10等指标的影响。

（3）细胞背景依赖性

IFI35的作用可能受细胞类型、病毒种类、刺激强度和时间窗影响。某些模型中IFI35可能表现为负反馈调节因子，限制过度干扰素反应；在另一些炎症或感染背景中，其表达升高也可能伴随更强的免疫激活状态。实验中不宜仅根据IFI35上调就判断其促进或抑制抗病毒免疫。

3.2 IFI35与RIG-I/MDA5信号的关系

（1）位于识别信号下游

IFI35通常不作为病毒RNA的直接识别受体，而是处在干扰素诱导反应和反馈调节层面。RIG-I或MDA5激活后，IFNB1和ISG程序启动，IFI35可作为其中一个被诱导的基因进入调控网络。

（2）影响反应幅度

若敲低IFI35后IFNB1、ISG15、IFIT1、MX1或CXCL10表达升高，提示其可能限制干扰素反应；若敲低后这些基因下降，则提示其可能支持抗病毒信号维持。具体结论必须与病毒复制读数和上游磷酸化信号联用。

（3）与病毒复制结果关联

IFI35表达改变是否具有抗病毒意义，应通过病毒RNA拷贝数、病毒蛋白、感染细胞比例或病毒滴度判断。若IFI35敲低改变ISG表达但病毒复制无明显变化，说明其可能主要影响信号表型，而非决定性抗病毒效应。

3.3 IFI35实验设计

（1）表达诱导实验

可用IFN-β、IFN-α、病毒感染、5′ppp RNA或Poly(I:C)刺激细胞，检测IFI35的时间依赖性表达。建议设置2 h、6 h、12 h、24 h和48 h等时间点，以区分早期信号基因、经典ISG和后期反馈因子。

（2）敲低或过表达实验

IFI35功能验证可采用siRNA、shRNA、CRISPR或过表达系统。敲低效率需同时在mRNA和蛋白层面确认。过表达实验应避免表达量远高于生理诱导水平，否则可能引入非生理蛋白互作或应激反应。

（3）通路分层检测

评价IFI35对抗病毒信号的影响时，应分层检测p-TBK1、p-IRF3、IFNB1、IFNL1、STAT1/STAT2磷酸化、ISG表达和病毒复制。只检测单一ISG难以定位IFI35作用发生在RLR识别层、干扰素产生层还是JAK-STAT响应层。

表3 IFI35功能研究的检测框架

研究问题	推荐指标	方法	判读重点
IFI35是否被干扰素诱导	IFI35 mRNA、IFI35蛋白	qPCR、Western blot、IF	明确诱导时间窗和细胞类型差异
IFI35是否影响RLR信号	p-TBK1、p-IRF3、IFNB1、CXCL10	Western blot、qPCR、ELISA	判断其是否作用于干扰素产生层
IFI35是否影响JAK-STAT	p-STAT1、p-STAT2、IRF9、ISG15、MX1	Western blot、qPCR	判断其是否作用于干扰素响应层
IFI35是否影响病毒复制	病毒RNA、病毒蛋白、感染率、病毒滴度	RT-qPCR、IF、Plaque assay	将信号变化与抗病毒效应关联
IFI35是否参与反馈调节	IFI35敲低/过表达后ISG变化	siRNA、过表达、RNA-seq	判断正调控或负反馈属性
IFI35是否具有细胞特异性	不同细胞系或原代细胞	qPCR、Western blot、感染实验	避免用单一细胞模型外推

4 ISG表达调控与抗病毒效应

4.1 ISG表达启动

（1）I型干扰素通路

IFN-β和IFN-α与IFNAR1/IFNAR2结合后，激活JAK1和TYK2，随后促进STAT1与STAT2磷酸化。STAT1、STAT2和IRF9形成ISGF3复合物并结合ISRE元件，诱导一系列ISG表达。

（2）III型干扰素通路

IFN-λ通过IFNLR1和IL10RB受体复合物激活类似的JAK-STAT信号，主要在上皮屏障组织中发挥抗病毒作用。呼吸道、肠道和肝脏上皮模型中，IFN-λ与ISG表达的关系尤其值得单独分析。

（3）直接ISG诱导

部分ISG可在RLR激活后不完全依赖分泌型干扰素而被直接诱导，尤其是早期IRF3或NF-κB相关基因。若需要区分直接诱导和干扰素自分泌放大，可使用JAK抑制剂、IFNAR阻断抗体或条件培养基转移实验。

4.2 典型ISG功能分组

（1）病毒RNA降解与复制抑制

OAS1、OAS2、OAS3和RNase L轴可促进病毒RNA降解；PKR/EIF2AK2可通过eIF2α磷酸化抑制蛋白翻译；IFIT家族可识别异常帽结构或特定病毒RNA特征，限制病毒复制。

（2）病毒进入与释放限制

IFITM1、IFITM2和IFITM3可影响病毒膜融合和进入过程；BST2/Tetherin可限制部分包膜病毒颗粒释放。此类ISG的作用与病毒生命周期阶段密切相关，检测时应结合病毒进入、复制和释放分阶段实验。

（3）泛素样修饰和免疫调节

ISG15可通过ISGylation影响宿主和病毒蛋白功能，也可作为干扰素反应强度的常用标志。MX1/MX2、RSAD2/Viperin、GBP家族等则通过不同机制干扰病毒复制、装配或细胞内定位。

4.3 ISG表达判读

（1）单基因不足以代表抗病毒状态

单一ISG上调只能说明某一通路节点被激活，不能代表完整抗病毒状态。建议至少检测ISG15、MX1、OAS1、IFIT1、RSAD2和CXCL10等多个指标，并结合病毒复制读数判断功能意义。

（2）mRNA与蛋白不同步

ISG mRNA通常较早上升，蛋白表达则受翻译、稳定性和病毒免疫逃逸影响。若mRNA明显升高但蛋白不变，应排查时间点、抗体灵敏度、病毒蛋白翻译抑制和样本处理方式。

（3）过强ISG反应可能伴随细胞损伤

高强度干扰素或dsRNA刺激可诱导细胞周期抑制、凋亡、焦亡或代谢压力。抗病毒实验中应同步检测细胞活性、死亡率和炎症因子，避免将细胞毒性导致的病毒减少误判为特异性抗病毒效应。

表4 常见ISG与抗病毒效应方向

ISG/通路	主要功能方向	推荐检测方法	判读重点
ISG15	ISGylation、干扰素反应标志、免疫调节	qPCR、Western blot、ELISA	可作为ISG反应强度指标，但需结合功能读数
MX1/MX2	干扰病毒复制或核衣壳运输	qPCR、Western blot	病毒类型依赖性明显
OAS1/OAS2/OAS3	激活RNase L，促进RNA降解	qPCR、Western blot、RNase L相关检测	适合RNA病毒复制抑制研究
IFIT1/IFIT2/IFIT3	识别异常RNA结构，抑制翻译或复制	qPCR、Western blot	对病毒RNA帽结构和复制方式敏感
IFITM1/2/3	限制病毒进入和膜融合	qPCR、Western blot、感染率检测	需结合病毒进入实验
RSAD2/Viperin	干扰病毒复制、脂质代谢和颗粒形成	qPCR、Western blot	常作为广谱抗病毒ISG指标
PKR/EIF2AK2	抑制蛋白翻译，诱导抗病毒应激	Western blot、p-eIF2α	需区分抗病毒效应与细胞毒性
BST2/Tetherin	限制包膜病毒释放	qPCR、Western blot、病毒释放检测	适合包膜病毒释放阶段研究
CXCL10	干扰素诱导趋化因子	qPCR、ELISA	反映炎症和免疫细胞募集信号

5 实验模型与方法选择

5.1 病毒感染模型

（1）真实病毒感染

真实病毒感染可同时呈现病毒入侵、复制、免疫逃逸和ISG反馈调控，适合评价RIG-I/MDA5-IFN-ISG轴的功能意义。实验需根据病毒生物安全等级、MOI、感染时间和细胞类型设计，并同步检测病毒复制和宿主信号。

（2）假病毒或复制子系统

假病毒和复制子系统适合在较低生物安全风险下研究病毒进入、复制元件或报告信号。此类模型更便于高通量筛选，但不能完整反映真实病毒的免疫逃逸蛋白和复制周期。

（3）病毒模拟物刺激

5′ppp RNA、Poly(I:C)、病毒RNA提取物或合成dsRNA可用于拆解RIG-I/MDA5信号。模拟物实验更适合机制定位，但需要注意递送方式、剂量和细胞毒性，不能完全替代病毒感染结果。

5.2 信号检测方法

（1）qPCR

qPCR适合检测DDX58、IFIH1、IFI35、IFNB1、IFNL1、ISG15、MX1、OAS1、IFIT1、RSAD2和CXCL10等转录水平变化。时间点设计应覆盖早期识别、干扰素产生和ISG放大阶段。

（2）Western blot

Western blot可检测RIG-I、MDA5、IFI35、p-TBK1、p-IRF3、p-STAT1、ISG15、MX1和OAS1等蛋白变化。对通路激活研究而言，磷酸化蛋白和总蛋白应同时检测，避免将表达变化误判为激活变化。

（3）免疫荧光与流式

免疫荧光可观察IRF3、p65或STAT1核转位，以及病毒蛋白和ISG细胞定位。流式适合分析感染细胞比例、ISG阳性细胞群和细胞死亡。对于异质性强的感染模型，单细胞水平检测比整体裂解样本更有信息量。

5.3 功能验证方法

（1）敲低与敲除

DDX58、IFIH1、MAVS、IFI35、STAT1或关键ISG的敲低/敲除可用于确定功能位置。敲低实验应设置非靶向对照、多个siRNA序列和救援实验，避免脱靶效应影响结论。

（2）干扰素补偿实验

若RIG-I或MDA5缺失导致ISG下降，可外源加入IFN-β或IFN-λ判断下游JAK-STAT是否仍可响应。若外源干扰素能恢复ISG表达，说明缺陷主要位于干扰素产生层；若不能恢复，则需考虑受体或STAT通路异常。

（3）病毒复制读数

抗病毒功能必须通过病毒读数验证。常见指标包括病毒RNA拷贝数、病毒蛋白表达、感染细胞比例、病毒滴度、斑块形成和细胞病变。只检测ISG上升不能证明抗病毒效应增强。

表5 RIG-I/MDA5-IFI35-ISG研究方法组合

实验目的	推荐处理	核心读数	关键对照
区分RIG-I与MDA5贡献	5′ppp RNA、Poly(I:C)、病毒感染	DDX58、IFIH1、IFNB1、ISG15	DDX58/IFIH1敲低或敲除
判断IFI35是否被诱导	IFN-β、病毒感染、dsRNA刺激	IFI35 mRNA和蛋白	未刺激对照、时间梯度
分析IFI35调控作用	IFI35 siRNA或过表达	IFNB1、ISG15、MX1、病毒RNA	非靶向siRNA、救援实验
区分干扰素产生与响应	病毒感染后加入JAK抑制剂或外源IFN	p-IRF3、p-STAT1、ISG	IFNAR/JAK-STAT对照
评价ISG抗病毒功能	关键ISG敲低后感染病毒	病毒滴度、病毒蛋白、感染率	细胞活性和敲低效率
评价炎症输出	感染或dsRNA刺激	CXCL10、IL6、TNF、CCL5	细胞死亡和刺激剂量控制

6 干扰素与ISG研究相关试剂与材料选型

表6 RIG-I、MDA5、IFI35、TBK1与IRF3信号节点检测和干预产品

应用模块	货号	产品名称	级别/规格	体系定位
RIG-I检测	Ab125359	Recombinant RIG-I/DDX58 Antibody	ExactAb™，Validated，重组，3.0mg/mL	用于检测RIG-I/DDX58蛋白表达，适合病毒感染、Poly(I:C)或IFN诱导实验
RIG-I检测	Ab325619	Recombinant RNA Sensor RIG-I Antibody	敲低验证	用于RIG-I表达验证和DDX58敲低实验中的蛋白检测
MDA5蛋白/对照	M572896	MDA5	≥80%（SDS-PAGE）	可作为MDA5相关实验中的蛋白对照或方法学材料
MDA5检测	Ab114669	Recombinant MDA5 Antibody	重组，ExactAb™，已验证，敲低验证，见COA	用于检测MDA5/IFIH1蛋白表达，适合dsRNA刺激和病毒感染模型
MDA5检测	EJ1515165	人黑色素瘤分化相关基因5（MDA5）酶联免疫吸附测定试剂盒	BioReagent	用于人源样本MDA5水平检测
MDA5干预	I1487871	IFIH1 Human Pre-designed siRNA Set A		用于敲低MDA5/IFIH1，验证MDA5对IFNB1和ISG表达的贡献
MDA5检测	Ab327522	IFIH1 Mouse mAb	敲低验证	用于IFIH1/MDA5蛋白检测和敲低验证
MDA5检测	Ab327382	Recombinant IFIH1 Antibody	敲低验证	用于IFIH1蛋白检测，适合MDA5相关通路研究
IFI35检测	Ab109390	IFI35 Antibody	无载体，ExactAb™，无叠氮钠，已验证，高性能，见COA	用于IFI35蛋白诱导检测，适合IFN、病毒感染或Poly(I:C)刺激实验
IFI35干预	I1464042	IFI35 Human Pre-designed siRNA Set A		用于敲低IFI35，分析其对IFNB1、ISG15、MX1、CXCL10和病毒复制的调节作用
IFI35蛋白/对照	rp329494	Recombinant Human IFI35 Protein	≥97%（SDS-PAGE）	可用于IFI35抗体验证、蛋白互作或体外功能研究
MAVS干预	M1490873	MAVS Human Pre-designed siRNA Set A		用于敲低MAVS，验证RIG-I/MDA5信号是否依赖MAVS传递
TBK1蛋白/对照	rp329534	Recombinant Human TBK1 Protein	≥90%（SDS-PAGE）	用于TBK1抗体验证、激酶相关实验或方法学对照
TBK1检测	Ab117042	Recombinant NAK/TBK1 Antibody	重组，ExactAb™，已验证，见COA	用于检测总TBK1蛋白水平
p-TBK1检测	Ab327296	Recombinant Phospho-NAK/TBK1（S172）Antibody	敲低验证	用于检测TBK1 S172磷酸化，评价RLR下游激酶激活
p-TBK1检测	Ab117037	Recombinant TBK1（phospho S172）Antibody	重组，ExactAb™，已验证，见COA	用于检测p-TBK1，判断IRF3激活上游信号
TBK1干预	T1487313	TBK1 Human Pre-designed siRNA Set A		用于敲低TBK1，验证IFNB1和ISG诱导是否依赖TBK1
TBK1干预	T1490076	TBK1 siRNA-1		用于TBK1敲低和通路定位
TBK1干预	T1490174	TBK1 siRNA-2		用于TBK1敲低重复验证
TBK1干预	T1490153	TBK1 siRNA-3		用于多序列敲低验证，降低脱靶解释风险
TBK1抑制	T1497837	TBK1-IN-1	Moligand™，10mM in DMSO	用于抑制TBK1，分析IRF3磷酸化和IFNB1诱导
TBK1抑制	T659201	TBK1-IN-1	≥98%	用于TBK1依赖性抗病毒信号验证
TBK1/IKKε抑制	T1447808	TBK1/IKKε-IN-1		用于抑制TBK1/IKKε通路，分析IRF3相关IFN产生
TBK1/IKKε抑制	T422323	TBK1/IKKε-IN-1（化合物1）	10mM in DMSO	用于TBK1/IKKε依赖性通路干预
TBK1/IKKε抑制	T414271	TBK1/IKKε-IN-1（化合物1）	≥96%	用于TBK1/IKKε相关抗病毒通路研究
TBK1/IKKε抑制	T412376	TBK1/IKKε-IN-2	≥98%	用于TBK1/IKKε通路抑制剂比较
TBK1/IKKε抑制	T421157	TBK1/IKKε-IN-2	10mM in DMSO	用于细胞实验中TBK1/IKKε信号阻断
TBK1/IKKε抑制	T650039	TBK1/IKKε-IN-4	≥99%	用于高纯度TBK1/IKKε抑制实验
TBK1/IKKε抑制	T1495632	TBK1/IKKε-IN-4	Moligand™，10mM in DMSO	用于细胞水平通路抑制
TBK1降解	T614344	TBK1 PROTAC 3i	Moligand™	用于TBK1蛋白降解模型，分析TBK1缺失对IFN-ISG轴的影响
TBK1降解	T287400	TBK1PROTAC®3i，TANK结合激酶1（TBK1）降解剂	Moligand™，≥98%（HPLC）	用于TBK1蛋白降解验证，需结合总TBK1和p-TBK1检测
TBK1 KO对照	P750943	TBK1基因敲除HEK293T细胞RIPA裂解液		用于TBK1抗体特异性验证和KO对照
TBK1 KO对照	P750944	TBK1基因敲除HEK293T细胞Trizol裂解液		用于TBK1 mRNA或转录水平对照验证
TBK1检测	EJ1513649	人TANK结合激酶1（TBK1）酶联免疫吸附测定试剂盒	BioReagent	用于人源样本TBK1水平检测
p-TBK1检测	EJ1514438	人磷酸化TANK结合激酶1（P-TBK1）酶联免疫吸附测定试剂盒	BioReagent	用于人源样本p-TBK1水平检测
TBK1检测	EJ1512557	小鼠TANK结合激酶1（TBK1）酶联免疫吸附测定试剂盒	BioReagent	用于小鼠样本TBK1检测
p-TBK1检测	EJ1512963	小鼠磷酸化TANK结合激酶1（p-TBK1）酶联免疫吸附测定试剂盒	BioReagent	用于小鼠样本p-TBK1检测
IRF3干预	I1487942	IRF3 Human Pre-designed siRNA Set A		用于敲低IRF3，验证IFNB1和ISG诱导对IRF3的依赖性
IRF3检测	Ab111215	Recombinant IRF3 Antibody	ExactAb™，Validated，重组，0.3mg/mL	用于检测IRF3总蛋白表达
IRF3检测	Ab111210	Recombinant IRF3 Antibody	重组，已验证，ExactAb™，见COA	用于IRF3蛋白检测和通路分析
IRF3检测	EJ1514089	人干扰素调节因子3（IRF3）酶联免疫吸附测定试剂盒	BioReagent	用于人源样本IRF3水平检测
IRF3检测	EJ1512780	小鼠干扰素调节因子3（IRF3）酶联免疫吸附测定试剂盒	BioReagent	用于小鼠样本IRF3水平检测

表7 JAK-STAT与ISG表达检测和功能验证相关产品

应用模块	货号	产品名称	级别/规格	体系定位
STAT1蛋白/对照	rp230930	Recombinant Human STAT1 Protein	无载体，His标签，≥95%（SDS-PAGE），见COA	用于STAT1抗体验证、标准品或通路研究对照
STAT1蛋白/对照	rp214403	Recombinant Human STAT1 Protein	无载体，生物活性，ActiBioPure™，≥90%（SDS-PAGE），见COA	可用于STAT1相关功能和方法学验证
STAT1蛋白/对照	rp329828	Recombinant Mouse STAT1 Protein	≥90%（SDS-PAGE）	用于小鼠STAT1检测或抗体验证
p-STAT1检测	Ab326907	Recombinant Phospho-STAT1（S727）Antibody	敲低验证	用于检测STAT1 S727磷酸化，评价IFN-JAK-STAT激活状态
STAT1检测	Ab326909	Recombinant STAT1 Antibody	敲低验证	用于STAT1总蛋白检测
STAT1检测	Ab129384	Recombinant STAT1 Antibody	重组，ExactAb™，敲低验证，已验证，见COA	用于STAT1蛋白表达检测和干扰素响应分析
STAT1检测	Ab326906	Recombinant STAT1 Antibody	敲低验证	用于STAT1检测和敲低验证
STAT1干预	S1475931	STAT1 Human Pre-designed siRNA Set A		用于敲低STAT1，验证ISG表达是否依赖JAK-STAT通路
STAT1检测	Ab327500	STAT1 Mouse mAb	敲低验证	用于STAT1蛋白检测
STAT1抑制	S1432448	STAT1/3-IN-1		用于干预STAT1/3相关信号，需结合p-STAT1验证
STAT1 KO对照	P750773	STAT1基因敲除HEK293T细胞RIPA裂解液		用于STAT1抗体特异性验证和KO对照
STAT1 KO对照	P750774	STAT1基因敲除HEK293T细胞Trizol裂解液		用于STAT1转录水平KO对照
STAT1检测	EJ1513809	人信号传导子及转录激活子1（STAT1）酶联免疫吸附测定试剂盒	BioReagent	用于人源样本STAT1水平检测
p-STAT1检测	EJ1514444	人磷酸化信号传导子及转录激活子1（p-STAT1）酶联免疫吸附测定试剂盒	BioReagent	用于人源样本p-STAT1检测
STAT1检测	EJ1515475	小鼠信号传导转录激活因子1（STAT1）酶联免疫吸附测定试剂盒	BioReagent	用于小鼠样本STAT1水平检测
STAT1体内干预	I1459890	In vivo Stat1 Mouse Pre-designed siRNA-1		用于小鼠体内STAT1敲低实验
STAT1体内干预	I1459889	In vivo Stat1 Mouse Pre-designed siRNA-2		用于体内STAT1敲低重复验证
STAT1体内干预	I1459945	In vivo Stat1 Mouse Pre-designed siRNA-3		用于多序列体内STAT1干预设计
STAT2检测	Ab327519	Recombinant STAT2 Antibody	敲除验证	用于STAT2蛋白检测和KO验证
STAT2干预	S1485883	STAT2 Human Pre-designed siRNA Set A		用于敲低STAT2，验证ISGF3和ISG诱导依赖性
STAT2 KO对照	P750775	STAT2基因敲除HEK293T细胞RIPA裂解液		用于STAT2抗体验证和KO对照
STAT2 KO对照	P750776	STAT2基因敲除HEK293T细胞Trizol裂解液		用于STAT2转录水平KO对照
STAT2检测	EJ1513812	人信号传导转录激活因子2（STAT2）酶联免疫吸附测定试剂盒	BioReagent	用于人源样本STAT2水平检测
ISG15干预	I1472959	ISG15 Human Pre-designed siRNA Set A		用于敲低ISG15，验证ISG15对抗病毒效应或ISGylation的作用
ISG15检测	Ab111307	Recombinant ISG15 Antibody	重组，ExactAb™，已验证，高性能，见COA	用于ISG15蛋白检测和ISG反应评价
ISG15检测	Ab326649	Recombinant ISG15 Antibody	敲低验证	用于ISG15敲低实验中的蛋白验证
ISG15检测	EJ1514492	人类泛素蛋白（ISG15）酶联免疫吸附测定试剂盒	BioReagent	用于人源样本ISG15水平检测
ISG15检测	EJ1512845	小鼠泛素交叉反应蛋白（ISG15）酶联免疫吸附测定试剂盒	BioReagent	用于小鼠样本ISG15检测
MX1检测	Ab116582	MX1 Antibody	无载体，ExactAb™，无叠氮钠，已验证，见COA	用于MX1蛋白检测，评价经典抗病毒ISG诱导
MX1干预	M1488866	MX1 Human Pre-designed siRNA Set A		用于敲低MX1，分析其在特定病毒复制限制中的作用
OAS1干预	O1487294	OAS1 Human Pre-designed siRNA Set A		用于敲低OAS1，研究OAS-RNase L轴与RNA病毒复制限制
IFIT1干预	I1482059	IFIT1 Human Pre-designed siRNA Set A		用于敲低IFIT1，验证异常病毒RNA识别和翻译抑制相关作用
IFIT1B干预	I1470945	IFIT1B Human Pre-designed siRNA Set A		用于IFIT1B相关ISG功能研究
RSAD2干预	R1461714	RSAD2 Human Pre-designed siRNA Set A		用于敲低RSAD2/Viperin，验证其对病毒复制和细胞代谢相关抗病毒效应的影响

7 常见问题

7.1 RIG-I和MDA5都能诱导ISG，实验中如何区分二者作用？

应通过刺激物、病毒模型和基因干预联合区分。5′ppp RNA更偏向RIG-I，长dsRNA或高分子量Poly(I:C)更常用于MDA5相关研究；最终仍需通过DDX58或IFIH1敲低/敲除验证具体贡献。

7.2 IFI35是抗病毒效应基因还是调控因子？

IFI35更适合被视为干扰素诱导的调控因子，而非典型直接抗病毒酶。其功能方向需要根据敲低或过表达后IFNB1、ISG表达和病毒复制结果判断，不能仅凭表达上调定义为抗病毒增强。

7.3 ISG15、MX1、OAS1和IFIT1是否可以任选一个作为ISG指标？

不建议只选一个。不同ISG的诱导动力学和抗病毒机制不同，单一指标容易造成误判。建议至少选择3–5个ISG，并同时检测病毒复制和细胞活性。

7.4 Poly(I:C)刺激是否一定代表MDA5激活？

不一定。Poly(I:C)的分子量、递送方式和细胞类型决定其主要识别路径。转染进入胞质的高分子量Poly(I:C)更适合研究MDA5；直接加入培养基时，TLR3信号可能占主要贡献。

7.5 RIG-I或MDA5表达升高是否说明细胞正在识别病毒？

不一定。RIG-I和MDA5本身可被干扰素诱导，表达升高可能只是细胞处于抗病毒预警状态。应结合p-TBK1、p-IRF3、IFNB1、MAVS依赖性和病毒复制变化判断是否存在真实识别激活。

RIG-I和MDA5是病毒RNA识别层的关键受体，IFI35位于干扰素诱导和反馈调控网络中，ISG则构成抗病毒效应执行层。研究该通路时，应从病毒识别、干扰素产生、JAK-STAT响应、ISG表达和病毒复制结果逐层验证，避免将单一基因表达变化直接等同于抗病毒功能改变。

干扰素刺激基因在抗病毒免疫中的作用：RIG-I、MDA5、IFI35与ISG表达调控

干扰素刺激基因在抗病毒免疫中的作用：RIG-I、MDA5、IFI35与ISG表达调控

1 干扰素刺激基因与抗病毒免疫的研究逻辑

2 RIG-I与MDA5在病毒RNA识别中的分工

3 IFI35在干扰素反应中的调控位置

4 ISG表达调控与抗病毒效应

5 实验模型与方法选择

6 干扰素与ISG研究相关试剂与材料选型

7 常见问题

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