从官能团到实验判断：蛋白质交联剂选择与实验要点
从官能团到实验判断：蛋白质交联剂选择与实验要点
1. 先确定实验目的
交联剂用于在两个分子之间，或同一分子内部相邻结构之间形成共价连接。蛋白质实验中，交联剂主要解决四类问题：捕获相互作用、制备偶联物、固定化蛋白、辅助结构分析。选择交联剂时，先判断实验目的，再判断可反应基团、间隔臂、溶解性、膜通透性和检测方式。交联剂选择需要同时考虑反应特异性、间隔臂长度、溶解性和具体应用场景。
实验目的 | 首选策略 | 关键判断 |
捕获蛋白相互作用 | 均双功能交联剂 | 两端反应基团相同，适合固定空间邻近关系 |
制备抗体、酶、肽段偶联物 | 异双功能交联剂 | 两端反应基团不同，可分步偶联，减少自聚合 |
固定到羧基化表面的蛋白或肽段 | 零长度偶联体系 | 直接连接表面羧基与蛋白伯胺，不引入额外间隔臂 |
交联质谱分析 | 可解析或可裂解交联剂 | 控制交联程度，降低样品复杂度 |
常见选择逻辑：
问题 | 对应选择 |
是否只研究细胞表面蛋白 | 优先选择水溶、膜不通透交联剂 |
是否需要进入细胞内部 | 选择膜通透交联剂 |
是否需要后续拆分复合物 | 选择可裂解间隔臂 |
是否需要长期稳定连接 | 选择不可裂解连接 |
是否需要保留抗体或酶活性 | 降低修饰度，优先考虑分步偶联或定点偶联 |
2. 按目标官能团选择反应化学
蛋白质交联常用的反应位点包括伯胺、巯基和羧基。伯胺主要来自赖氨酸侧链和蛋白质N端；巯基主要来自游离半胱氨酸；羧基主要来自天冬氨酸、谷氨酸、蛋白质C端或羧基化材料表面。
目标基团 | 常用反应体系 | 代表试剂 | 常用条件 | 应避免的成分或条件 |
伯胺 | N-羟基琥珀酰亚胺酯（NHS酯）或磺基-N-羟基琥珀酰亚胺酯（磺基-NHS酯） | 双磺基琥珀酰亚胺基辛二酸酯（BS3）、二琥珀酰亚胺基辛二酸酯（DSS） | 常用酸碱度7.2至8.5 | 三羟甲基氨基甲烷（Tris）、甘氨酸、赖氨酸、乙醇胺 |
巯基 | 马来酰亚胺反应 | 磺基-SMCC、SMCC、N,N′-双马来酰亚胺己烷（BMH） | 常用酸碱度6.5至7.5 | 二硫苏糖醇（DTT）、β-巯基乙醇等含巯基还原剂 |
羧基加伯胺 | 1-乙基-3-(3-二甲氨丙基)碳二亚胺（EDC）联合NHS或磺基-NHS | EDC/NHS、EDC/磺基-NHS | 活化阶段常用酸碱度 4.5 至 7.2；活化后与伯胺反应常在 7 至 8 附近进行 | 外源伯胺、外源羧酸、含干扰成分的保护剂 |
伯胺 | 亚氨酸酯反应 | 二甲基庚二亚氨酸酯（DMP） | 酸碱度8至9效率较高 | Tris、甘氨酸等伯胺缓冲液 |
补充说明
1. NHS 酯类反应
NHS 酯与伯胺反应形成稳定酰胺键，常用于赖氨酸侧链和蛋白质 N 端修饰。NHS 酯在水相中会发生水解，且缓冲液 pH 升高时水解加快。Tris 和甘氨酸可用于反应结束后的终止，但不宜在反应开始时存在。
2. 马来酰亚胺类反应
马来酰亚胺在 pH 6.5 至 7.5 时优先与巯基反应，形成稳定硫醚键。DTT 和 β-巯基乙醇等含巯基还原剂会竞争反应位点，用于还原处理后通常需要先脱盐或更换缓冲液。
3. EDC 羧基活化反应
EDC 属于零长度偶联剂，先活化羧基形成反应性中间体，再与伯胺形成酰胺键。EDC 本身不保留在最终连接结构中，因此适合需要短连接距离的羧基-伯胺偶联和表面固定化。
4. DMP 亚氨酸酯反应
DMP 属于亚氨酸酯类交联剂，不属于 NHS 酯。它与伯胺反应，常用于蛋白质胺-胺交联和抗体固定到蛋白 A、蛋白 G 载体等体系。
3. 用间隔臂控制交联结果
间隔臂决定两个被连接基团之间的距离，也影响交联产物的柔性、亲水性、膜通透性和后续分析难度。
选择点 | 实验影响 | 适用情况 |
短间隔臂 | 空间限制更严格，交联效率可能较低 | 判断近距离相互作用 |
长间隔臂 | 更容易连接目标基团，空间解释精度降低 | 目标基团距离不确定 |
聚乙二醇间隔臂 | 提高亲水性，降低疏水聚集 | 偶联物易沉淀或需要提高溶解性 |
二硫键间隔臂 | 可被还原剂裂解 | 需要比较还原和非还原条件下的复合物 |
不可裂解间隔臂 | 连接更稳定 | 制备长期使用的蛋白偶联物 |
常见试剂差异：
试剂 | 反应类型 | 溶解性和膜通透性 | 适合用途 |
BS3 | 胺-胺 | 水溶、膜不通透 | 细胞表面蛋白交联 |
DSS | 胺-胺 | 水不溶、膜通透 | 细胞内或膜相关蛋白交联 |
DTSSP | 胺-胺 | 水溶，中间二硫键可还原裂解 | 需要还原拆分的蛋白复合物 |
磺基-SMCC | 胺-巯基 | 水溶 | 抗体、酶、肽段分步偶联 |
SMCC | 胺-巯基 | 水不溶，需先用有机溶剂溶解 | 可接受少量有机溶剂的偶联体系 |
DMP | 胺-胺 | 水溶、膜通透 | 抗体固定到蛋白A/G载体、蛋白复合物交联 |
4. 关键操作条件
交联反应失败常由缓冲液不兼容、交联剂水解、目标基团不可及、投料过量或纯化不足引起。反应前应先把样品换入兼容缓冲液，并用小规模梯度确定条件。
反应体系 | 推荐缓冲液 | 酸碱度 | 终止或纯化 |
NHS酯-伯胺 | 磷酸盐、碳酸盐、硼酸盐、4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸（HEPES）缓冲液 | 7.2至8.5常用 | 用Tris或甘氨酸终止；脱盐或透析去除小分子 |
马来酰亚胺-巯基 | 磷酸盐或HEPES缓冲液，可加入乙二胺四乙酸（EDTA）减少金属催化氧化 | 6.5至7.5常用 | 去除游离交联剂；必要时用游离巯基终止 |
EDC/NHS羧基活化 | 2-(N-吗啉代)乙磺酸（MES）缓冲液常用 | 4.5至7.2常用 | 活化后加入含伯胺分子；反应后封闭残余活性位点 |
DMP亚氨酸酯反应 | 磷酸盐、硼酸盐、碳酸盐或HEPES缓冲液 | 8至9效率较高 | 可用酸或伯胺终止，随后去除过量小分子 |
操作控制点：
环节 | 要点 |
交联剂配制 | NHS酯、马来酰亚胺、亚氨酸酯类试剂尽量现配现用 |
投料比例 | 设置低、中、高摩尔比梯度，避免一次使用高过量条件 |
反应时间 | 从短时间开始筛选，常用30分钟至2小时范围内优化 |
蛋白浓度 | 蛋白浓度过高易产生多聚体，过低可能交联效率不足 |
有机溶剂 | DSS、SMCC等水不溶试剂需先溶于二甲基亚砜或二甲基甲酰胺，控制终浓度 |
后处理 | 脱盐、超滤、透析或体积排阻色谱用于去除游离交联剂和副产物 |
5. 三个常见实验场景
5.1 捕获细胞表面受体-配体相互作用
项目 | 选择 |
推荐试剂 | BS3；需要还原裂解时选择DTSSP |
选择原因 | 水溶、膜不通透，优先固定细胞表面邻近蛋白 |
反应缓冲液 | 不含伯胺的磷酸盐或HEPES缓冲液 |
关键对照 | 未加交联剂对照、竞争配体对照、还原/非还原条件对照 |
检测方式 | 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）、免疫印迹、免疫沉淀、液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS） |
常见问题：
现象 | 原因 | 处理 |
高分子拖尾 | 交联剂过量、反应时间过长、蛋白浓度过高 | 降低交联剂比例，缩短反应时间 |
无明显复合物 | 表面伯胺不可及、反应条件不合适、交联剂水解 | 更换交联剂长度，现配试剂，优化酸碱度 |
背景信号高 | 细胞内蛋白参与、裂解条件过强、洗涤不足 | 使用膜不通透试剂，增加洗涤和阴性对照 |
5.2 制备抗体-肽段或抗体-酶偶联物
项目 | 选择 |
推荐试剂 | 磺基-SMCC |
选择原因 | 一端连接抗体或载体蛋白上的伯胺，另一端连接肽段或酶上的巯基 |
反应方式 | 分步偶联 |
中间处理 | 第一步后必须去除游离交联剂 |
结果验证 | SDS-PAGE、体积排阻色谱、抗原结合实验、酶活测定 |
推荐流程：
步骤 | 操作重点 |
第一步 | 用磺基-SMCC修饰抗体或载体蛋白伯胺 |
纯化 | 脱盐或体积排阻色谱去除游离磺基-SMCC |
第二步 | 加入含游离巯基的肽段、酶或小分子；若对象本身无可用游离巯基，可先用 2-亚氨基硫杂环戊烷盐酸盐（Traut’s Reagent）或 SATA 引入巯基 |
优化 | 设置肽段或酶的投料梯度 |
验证 | 同时检测偶联效率和功能保留率 |
常见问题：
现象 | 原因 | 处理 |
偶联效率低 | 巯基氧化、游离还原剂干扰、马来酰亚胺水解 | 现还原后脱盐，快速进入偶联 |
抗体结合能力下降 | 赖氨酸随机修饰影响结合区 | 降低修饰度，改用定点巯基偶联 |
出现聚集 | 多位点交联、投料过高 | 降低交联剂和肽段比例，增加纯化步骤 |
5.3 将蛋白固定到羧基磁珠或羧基表面
项目 | 选择 |
推荐体系 | EDC联合NHS或磺基-NHS |
选择原因 | 羧基活化后与蛋白伯胺形成稳定酰胺键 |
适合对象 | 羧基磁珠、羧基微球、羧基芯片、羧基化板面 |
关键对照 | 未加EDC对照、未加蛋白对照、封闭后空白表面对照 |
结果验证 | 固定量、洗涤后保留量、结合能力、酶活或抗原识别能力 |
推荐流程：
步骤 | 操作重点 |
表面活化 | 羧基表面与EDC/NHS反应 |
加入蛋白 | 使用不含外源伯胺的蛋白溶液 |
封闭 | 用乙醇胺等封闭残余活性位点 |
洗涤 | 去除非共价吸附蛋白 |
验证 | 比较固定量和功能保留率 |
常见问题：
现象 | 原因 | 处理 |
固定量低 | 羧基活化不足、蛋白缓冲液不兼容 | 优化活化时间和缓冲液 |
固定量高但活性低 | 随机偶联影响活性位点 | 降低表面活化强度，调整蛋白方向性 |
背景吸附高 | 表面封闭不足 | 优化封闭剂和洗涤条件 |
6. 结果验证与失败排查
交联成功不能只看是否出现高分子条带，还要判断产物是否符合实验目的。用于结构分析时，需要关注交联位点是否可解释；用于偶联物制备时，需要关注功能是否保留；用于固定化时，需要关注洗涤后稳定性和活性。交联联合质谱可用于分析蛋白构象和蛋白相互作用，但交联过度、样品复杂度高和数据解析不足都会降低结果可靠性。
检测方法 | 回答的问题 |
SDS-PAGE | 是否出现二聚体、多聚体或分子量上移 |
免疫印迹 | 目标蛋白是否进入交联复合物 |
体积排阻色谱 | 是否存在聚集体、游离蛋白和目标偶联物 |
LC-MS/MS | 交联位点是否支持空间邻近 |
酶活测定 | 偶联或固定化后酶是否保留活性 |
抗原结合实验 | 抗体偶联后是否保留识别能力 |
表面结合实验 | 固定化蛋白是否稳定保留并能结合目标分子 |
失败现象 | 常见原因 | 处理 |
交联不足 | 目标基团不可及、试剂水解、酸碱度不合适 | 换用更长间隔臂，现配试剂，优化酸碱度 |
交联过度 | 交联剂过量、反应时间过长 | 降低投料比例，缩短反应时间 |
蛋白沉淀 | 疏水交联剂过多、有机溶剂过高、蛋白被过度修饰 | 换用水溶性交联剂，降低有机溶剂终浓度 |
偶联后功能下降 | 修饰位点影响活性区或结合界面 | 降低修饰度，改用定点偶联或更长间隔臂 |
马来酰亚胺反应失败 | 巯基氧化或还原剂竞争反应 | 现还原、脱盐、快速偶联 |
EDC固定化背景高 | 表面封闭不足或非特异吸附 | 增加空白表面对照，优化封闭和洗涤 |
质谱结果复杂 | 交联过度、样品太复杂、未设置对照 | 降低交联程度，先用纯化体系验证 |
7. 蛋白质交联剂选择与实验要点相关代表化学品分类、特色与应用（表1—表6）
表1｜交联反应缓冲液、配液介质与有机溶剂
分类 | Cas编号 | 阿拉丁货号 | 名称 | 规格或纯度 | 产品特色与应用 |
羧基活化缓冲液 | 4432-31-9 | 吗啉乙磺酸 | 用于植物细胞培养, ≥99.5% | 配制不含伯胺的反应体系，常用于碳二亚胺活化羧基和羧基材料固定化 | |
硼酸盐缓冲组分 | 10043-35-3 | 硼酸 | 分子生物学级, ≥99.5%(T) | 配制硼酸盐缓冲液，可用于亚氨酸酯类交联和部分伯胺修饰体系 | |
碳酸氢盐缓冲组分 | 144-55-8 | 碳酸氢钠 | 分子生物学级, ≥99.7% | 配制碳酸氢盐缓冲液，常用于活性酯与蛋白伯胺反应 | |
磷酸盐缓冲组分 | 7558-79-4 | 磷酸氢二钠,无水 | 分子生物学级, ≥99.5%(T) | 与磷酸二氢钠配制磷酸盐缓冲液，用于蛋白交联、巯基偶联和洗脱体系 | |
Tris缓冲体系组分 | 77-86-1 | 三(羟甲基)氨基甲烷 (Tris 碱) | 用于细胞培养, ≥99.9%(T) | 常作终止剂或缓冲液组分；含伯胺，活性酯反应起始阶段通常避免加入 | |
有机共溶剂 | 67-68-5 | 二甲基亚砜（DMSO） | 医药级, PharmPure™ | 溶解水不溶交联剂和疏水修饰试剂，便于小体积加入蛋白反应液 | |
碳酸盐缓冲组分 | 497-19-8 | 碳酸钠 | 无水级,PharmPure™,JP,BP,欧洲药典（Ph.Eur）,NF | 配制碳酸盐缓冲液，用于伯胺去质子化条件下的活性酯偶联 | |
有机共溶剂 | 68-12-2 | N，N-二甲基甲酰胺（DMF） | 无水级, ≥99.8% | 溶解疏水性交联剂、保护性巯基化试剂和部分光交联试剂 | |
HEPES缓冲体系组分 | 7365-45-9 | N-2-羟乙基哌嗪-N'-2-乙磺酸(HEPES) | 无动物源,用于细胞培养,≥99.5%,超低内毒素 | 适合温和蛋白反应条件，常用于巯基偶联和细胞表面交联缓冲体系 | |
磷酸盐缓冲组分 | 10049-21-5 | 一水磷酸二氢钠 | 欧洲药典（Ph.Eur）, 适用于分析, ACS, 优级品 | 与磷酸氢二钠配制磷酸盐缓冲液，用于蛋白交联、洗涤和脱盐前配液 |
表2｜广谱固定剂、还原剂、终止/封闭剂与检测辅助试剂
分类 | Cas编号 | 阿拉丁货号 | 名称 | 规格或纯度 | 产品特色与应用 |
醛类广谱固定/交联剂 | 111-30-8 | 戊二醛(50%) | 照相级, 50% in H2O | 醛类强交联固定剂，可用于蛋白固定、酶固定化和载体表面活化 | |
金属离子螯合添加剂 | 6381-92-6 | 乙二胺四乙酸二钠,二水 | 用于植物细胞培养, ≥99% | 螯合金属离子，减缓巯基氧化，常用于巯基偶联和蛋白保存体系 | |
巯基还原剂 | 60-24-2 | β-巯基乙醇 | 用于细胞培养, 适用于电泳, 分子生物学级, ≥99% | 还原二硫键，常用于样品预处理；巯基偶联前通常需去除 | |
反应终止/封闭剂 | 141-43-5 | 乙醇胺 | 用于细胞培养, ≥99% | 封闭残余活性酯或活化表面，常用于固定化和亲和载体偶联后处理 | |
巯基还原剂 | 3483-12-3 | DL-二硫苏糖醇(DTT) | 用于电泳, ≥99% | 还原二硫键，也可裂解含二硫键连接；巯基偶联前通常需脱盐去除 | |
醛类广谱固定/交联剂 | 50-00-0 | 甲醛溶液 | 分子生物学级, ≥36.0% in H2O(T),contains 10~15% Methanol as stabilizer | 常用于细胞固定和蛋白相互作用捕获，适合需要较温和固定条件的体系 | |
巯基还原剂 | 51805-45-9 | 三 2-羰基乙基 磷盐酸盐 盐酸盐（TCEP HCl） | UltraBio™, 适用于电泳, SDS-PAGE tested | 无巯基还原剂，适合释放游离半胱氨酸；后续进行马来酰亚胺偶联时通常不必预先去除，其他巯基偶联体系按试剂说明判断是否脱盐 | |
反应终止/封闭剂 | 56-40-6 | 甘氨酸 | UltraBio™, 分子生物学级, 超纯级, ≥99%(NT) | 常用于活性酯反应终止和固定后淬灭残余醛基 | |
巯基定量检测试剂 | 69-78-3 | 5,5＇二硫代双(2-硝基苯甲酸)（DTNB） | ≥98% | 用于定量游离巯基，评估还原效果和巯基化程度 | |
脱保护/裂解辅助试剂 | 5470-11-1 | 盐酸羟胺 | PrimorTrace™, ≥99.99% metals basis | 用于去除乙酰保护基释放巯基，也可用于部分可裂解连接的后处理 | |
反应终止/封闭剂 | 56-87-1 | L-赖氨酸 | Moligand™, 10mM in Water | 含伯胺，可用于活性酯终止、表面封闭和竞争性阻断 | |
醛类广谱固定/交联剂 | 30525-89-4 | 多聚甲醛 | AR | 甲醛聚合体，配制固定液常用，适用于细胞和组织固定 |
表3｜羧基活化、巯基引入与保护性巯基化辅助试剂
分类 | Cas编号 | 阿拉丁货号 | 名称 | 规格或纯度 | 产品特色与应用 |
零长度羧基活化剂 | 25952-53-8 | 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐 | ≥98% | 零长度羧基活化剂，用于羧基与伯胺直接偶联和表面固定化 | |
伯胺巯基化试剂 | 4781-83-3 | 2-亚氨基硫杂环戊烷盐酸盐 | ≥98% | 将伯胺转化为巯基，便于后续马来酰亚胺、碘乙酰基或吡啶二硫基偶联 | |
羧基活化辅助剂 | 6066-82-6 | N-羟基琥珀酰亚胺 (NHS) | ≥98% | 与碳二亚胺配合形成活性酯，提高羧基与伯胺偶联效率 | |
水溶性羧基活化辅助剂 | 106627-54-7 | N-羟基磺基琥珀酰亚胺钠盐 | ≥98% | 提高水相中活化酯稳定性，适合蛋白与羧基材料偶联 | |
受保护巯基引入试剂 | 84271-78-3 | N-琥珀酰亚胺基-S-乙酰硫代丙酸酯 | ≥95% | 向蛋白或肽段引入受保护巯基，脱保护后可进行定向巯基偶联 | |
受保护巯基引入试剂 | 76931-93-6 | S-乙酰基硫代乙醇酸 N-琥珀酰亚胺酯 | ≥94% | 向伯胺分子引入短链受保护巯基，适用于后续巯基交联和标记 |
表4｜同双功能胺反应型交联剂（NHS酯型、PEG间隔臂型、可裂解型与质谱型）
分类 | Cas编号 | 阿拉丁货号 | 名称 | 规格或纯度 | 产品特色与应用 |
质谱可裂解胺-胺交联剂 | 1351828-03-9 | Disuccinimidyl sulfoxide | ≥99% | 质谱可裂解胺-胺交联剂，适合交联质谱分析蛋白互作和构象约束 | |
聚乙二醇间隔臂胺-胺交联剂 | 1008402-79-6 | Bis-PEG17-琥珀酰亚胺酯 | ≥98% | 长聚乙二醇间隔臂活性酯，用于提高偶联物亲水性并减少聚集 | |
不可裂解NHS酯型胺-胺交联剂 | 68528-80-3 | 二(N-羟基琥珀酰亚胺)辛二酸酯 | ≥98% | 疏水性胺-胺同双功能交联剂，适合可溶蛋白和膜相关体系交联 | |
聚乙二醇间隔臂胺-胺交联剂 | 756526-03-1 | 双-PEG5-琥珀酰亚胺酯 | ≥98% | 中等聚乙二醇间隔臂活性酯，可提高水溶性和偶联后可分散性 | |
不可裂解NHS酯型胺-胺交联剂 | 79642-50-5 | 双琥珀酰亚胺戊二酸酯 | ≥98% | 较短间隔臂胺-胺交联剂，适合较近距离的蛋白空间邻近捕获 | |
可还原裂解NHS酯型胺-胺交联剂 | 57757-57-0 | 3,3'-二硫代二丙酸二(N-羟基丁二酰亚胺)酯 [交联剂] | ≥97% | 含二硫键的胺-胺交联剂，交联后可在还原条件下拆分复合物 | |
酯键可裂解NHS酯型胺-胺交联剂 | 70539-42-3 | EGS交联剂（EGNHS） | ≥96% | 含酯键的胺-胺交联剂，用于需要后续化学裂解的偶联体系 | |
质谱可裂解胺-胺交联剂 | 1240387-33-0 | 尿素交联剂 – C₄-臂，NHS 酯（DSBU、BuUrBU） | ≥95%(NMR) | 质谱可裂解脲基交联剂，适合蛋白复合物和构象研究 | |
水溶性磺基NHS酯型胺-胺交联剂 | 82436-77-9 | BS3交联剂 | ≥90% | 水溶性胺-胺同双功能交联剂，常用于细胞表面蛋白交联 | |
水溶性酯键可裂解胺-胺交联剂 | 167410-92-6 | Sulfo-EGS | —— | 水溶性含酯键胺-胺交联剂，适合水相蛋白偶联和后续裂解分析 |
表5｜亚氨酸酯类胺-胺交联剂与巯基-巯基交联剂
分类 | Cas编号 | 阿拉丁货号 | 名称 | 规格或纯度 | 产品特色与应用 |
亚氨酸酯型胺-胺交联剂 | 34490-86-3 | 辛二亚氨酸二甲酯二盐酸盐 | ≥98%(T) | 亚氨酸酯胺-胺交联剂，在弱碱性条件下与伯胺反应，适合蛋白复合物交联 | |
亚氨酸酯型胺-胺交联剂 | 58537-94-3 | 庚二酰亚胺酸二甲酯二盐酸盐 | ≥98% | 常用于抗体固定到蛋白A、蛋白G载体，减少免疫沉淀洗脱时抗体污染 | |
可还原亚氨酸酯型胺-胺交联剂 | 38285-78-8 | 3,3'-二硫代丙亚氨酸二甲酯二盐酸盐 | ≥95% | 含二硫键的亚氨酸酯交联剂，可在还原条件下裂解 | |
短链巯基-巯基交联剂 | 5132-30-9 | 1,2-二(马来酰亚胺)乙烷 | ≥98% | 短间隔臂巯基-巯基交联剂，适合两个半胱氨酸位点之间近距离连接 | |
中链巯基-巯基交联剂 | 28537-70-4 | 1,4-双(马来酰亚胺基)丁烷 | ≥96% | 中等间隔臂巯基-巯基交联剂，用于半胱氨酸位点桥连 | |
长链巯基-巯基交联剂 | 4856-87-5 | 1,6-二(马来酰亚胺基)己烷 | ≥97% | 较长间隔臂巯基-巯基交联剂，可用于蛋白巯基桥连和构象限制 |
表6｜胺-巯基异双功能交联剂与光反应型交联剂
分类 | Cas编号 | 阿拉丁货号 | 名称 | 规格或纯度 | 产品特色与应用 |
芳香马来酰亚胺-NHS酯胺-巯基异双功能交联剂 | 58626-38-3 | 3-马来酰亚胺基苯甲酸-N-琥珀酰亚胺酯[交联剂] | ≥98%(HPLC) | 芳香型胺-巯基异双功能交联剂，用于伯胺分子与含巯基分子的偶联 | |
环己烷马来酰亚胺-NHS酯胺-巯基异双功能交联剂 | 64987-85-5 | 4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷羧酸 -N-琥珀酰亚胺酯(SMCC) | ≥98%(HPLC) | 环己烷间隔臂胺-巯基异双功能交联剂，常用于抗体、酶、蛋白和肽段偶联 | |
脂肪链马来酰亚胺-NHS酯胺-巯基异双功能交联剂 | 80307-12-6 | 4-马来酰亚胺基丁酸-N-琥珀酰亚胺酯[交联剂] | ≥98%(HPLC) | 较短脂肪链胺-巯基异双功能交联剂，可用于蛋白与小分子或肽段偶联 | |
长链环己烷马来酰亚胺-NHS酯胺-巯基异双功能交联剂 | 125559-00-4 | 6-[[4-(N-马来酰亚胺甲基)环己基]甲酰氨基]己酸 N-琥珀酰亚胺酯 | ≥98%(HPLC) | 长链胺-巯基异双功能交联剂，适合需要一定空间间隔的偶联体系 | |
PEG间隔臂马来酰亚胺-NHS酯胺-巯基异双功能交联剂 | 756525-99-2 | 马来酰亚胺-PEG4-NHS酯 | ≥98% | 聚乙二醇间隔臂胺-巯基异双功能交联剂，用于提高偶联物亲水性并减少聚集 | |
芳香马来酰亚胺-NHS酯胺-巯基异双功能交联剂 | 79886-55-8 | N-琥珀酰亚胺基4-(对-马来酰亚胺基苯基)丁酸酯 | ≥97%(HPLC) | 芳香间隔臂胺-巯基异双功能交联剂，适合蛋白之间定向偶联 | |
光反应型异双功能交联剂 | 1239017-80-1 | NHS-双吖丙啶(SDA) | ≥97% | 一端连接伯胺，一端经光照捕获邻近分子，适合瞬时相互作用研究 | |
卤代乙酰基胺-巯基异双功能交联剂 | 72252-96-1 | SIAB（N-琥珀酰亚胺（4-碘乙酰基）氨基苯甲酸酯） | ≥97% | 碘乙酰基胺-巯基异双功能交联剂，可与巯基形成稳定硫醚键 | |
卤代乙酰基胺-巯基异双功能交联剂 | 57159-62-3 | 3-(溴乙酰胺基)琥珀酰亚胺基丙酸酯 | ≥95% | 溴乙酰基胺-巯基异双功能交联剂，用于伯胺与巯基之间的共价连接 | |
吡啶二硫基胺-巯基异双功能交联剂 | 1334177-95-5 | NHS-PEG4-SPDP | ≥95% | 聚乙二醇化吡啶二硫基交联剂，形成可还原二硫键连接，适合可拆分偶联物 | |
吡啶二硫基胺-巯基异双功能交联剂 | 68181-17-9 | SPDP (3- [2-吡啶基二硫代]琥珀酰亚胺基丙酸酯) | ≥95% | 经典吡啶二硫基胺-巯基异双功能交联剂，形成可还原二硫键连接 | |
卤代乙酰基胺-巯基异双功能交联剂 | 39028-27-8 | 碘乙酸 N-羟基琥珀酰亚胺酯 | ≥95% | 短链碘乙酰基胺-巯基异双功能交联剂，适合低间隔臂巯基偶联 | |
长链吡啶二硫基胺-巯基异双功能交联剂 | 158913-22-5 | SPDP-C6-琥珀酰亚胺酯 | ≥90% | 长链吡啶二硫基交联剂，适合需要一定间隔的可裂解偶联 | |
水溶性长链吡啶二硫基胺-巯基异双功能交联剂 | 169751-10-4 | SPDP-C6-磺基-琥珀酰亚胺酯 | ≥90% | 水溶性长链吡啶二硫基交联剂，适合水相条件下蛋白与巯基分子偶联 | |
水溶性马来酰亚胺-磺基NHS酯胺-巯基异双功能交联剂 | 185332-92-7 | 磺基-N-琥珀酰亚胺基4-马来酰亚胺基丁酸钠盐 | ≥90% | 水溶性马来酰亚胺活性酯交联剂，适合蛋白与含巯基分子偶联 | |
水溶性芳香马来酰亚胺-磺基NHS酯胺-巯基异双功能交联剂 | 92921-25-0 | m-马来酰亚胺苯甲酸琥珀酰亚胺酯 钠盐 | ≥80% | 水溶性芳香马来酰亚胺交联剂，可用于水相蛋白偶联和表面修饰 | |
水溶性环己烷马来酰亚胺-磺基NHS酯胺-巯基异双功能交联剂 | 92921-24-9 | 4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸-3-磺基-N-羟基琥珀酰亚胺酯钠盐 | —— | 水溶性环己烷间隔臂胺-巯基异双功能交联剂，常用于抗体、酶和蛋白偶联 |
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参考文献
[1] Hermanson GT. Bioconjugate Techniques. 3rd ed. Amsterdam: Academic Press; 2013.
[2] Mattson G, Conklin E, Desai S, Nielander G, Savage MD, Morgensen S. A practical approach to crosslinking. Molecular Biology Reports. 1993;17(3):167-183. doi:10.1007/BF00986726.
[3] Thermo Fisher Scientific. Amine-Reactive Crosslinker Chemistry.
[4] Thermo Fisher Scientific. Sulfhydryl-Reactive Crosslinker Chemistry.
[5] Thermo Fisher Scientific. Carbodiimide Crosslinker Chemistry.
[6] Thermo Fisher Scientific. Imidoester Crosslinkers: DMA, DMP, DMS, DTBP.
[7] Chavez JD, Bruce JE. Chemical cross-linking with mass spectrometry: a tool for systems structural biology. Current Opinion in Chemical Biology. 2019;48:8-18. doi:10.1016/j.cbpa.2018.08.006.
[8] Piersimoni L, Kastritis PL, Arlt C, Sinz A. Cross-Linking Mass Spectrometry for Investigating Protein Conformations and Protein-Protein Interactions. Chemical Reviews. 2022;122(7):7500-7531. doi:10.1021/acs.chemrev.1c00786.
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