电泳缓冲液怎么选:TAE、TBE、MOPS与蛋白电泳缓冲体系比较
电泳缓冲液怎么选:TAE、TBE、MOPS与蛋白电泳缓冲体系比较
电泳缓冲液决定样品迁移速度、条带分辨率、发热程度和后续回收效果。选择时应先区分DNA、RNA还是蛋白样品,再根据目标分子大小、凝胶类型、是否变性、是否回收和后续检测方式确定缓冲体系。
关键词:电泳缓冲液;TAE;TBE;MOPS;SDS-PAGE;Tris-Glycine;Tris-Tricine;RNA电泳
1 电泳缓冲液的作用原理
1.1 维持pH与电荷状态
电泳依赖带电分子在电场中的定向迁移,缓冲液的首要作用是维持稳定pH,使核酸或蛋白处于可重复的带电状态。DNA和RNA依靠磷酸骨架负电荷向阳极迁移;SDS-PAGE中,SDS使蛋白变性并获得近似统一的负电荷,分离主要由分子量决定;Native PAGE则保留蛋白天然构象,迁移同时受分子大小、形状和自身净电荷影响。
1.2 提供导电离子与控制发热
缓冲液中的离子负责传导电流。离子强度过低时,迁移慢、条带易扩散;离子强度过高时,电流增大、发热明显,容易出现条带弯曲、凝胶升温、RNA降解或蛋白迁移异常。实际选择中,应把缓冲液浓度、电压、运行时间和凝胶厚度一起控制,而不是只更换一种缓冲液。
1.3 决定分辨率与后续兼容性
不同缓冲体系的缓冲容量、离子组成和电导率不同,会改变条带清晰度、迁移速度和下游实验兼容性。TAE更适合常规DNA分析和胶回收,TBE更适合小片段核酸分辨,MOPS常用于RNA变性电泳,Tris-Glycine-SDS适合常规蛋白电泳,Tris-Tricine更适合低分子量蛋白和多肽。
表1 电泳缓冲液影响实验结果的关键因素
影响因素 | 对实验结果的影响 | 常见异常 | 优先处理方式 |
pH | 影响分子电荷和迁移稳定性 | 条带拖尾、迁移异常 | 使用新鲜缓冲液,确认配方和稀释倍数 |
离子强度 | 影响电流、迁移速度和发热 | 迁移慢或胶温升高 | 调整缓冲液浓度和运行电压 |
缓冲容量 | 决定长时间运行稳定性 | 后期条带弥散 | 长时间或高分辨实验选TBE、MOPS等体系 |
电导率 | 影响热量产生 | “笑脸”条带、胶面升温 | 降低电压,避免缓冲液过浓 |
添加剂 | 支持变性、还原或稳定 | RNA二级结构、蛋白未充分变性 | 根据RNA、SDS-PAGE或Native PAGE选择体系 |
新鲜程度 | 影响背景和重复性 | 条带不稳定、背景升高 | 高要求实验使用新鲜工作液 |
2 核酸电泳缓冲液分类
2.1 TAE缓冲液
(1)组成与原理
TAE由Tris、乙酸和EDTA组成,离子强度相对较低,DNA迁移较快。EDTA可螯合二价金属离子,降低部分核酸酶活性。TAE缓冲容量弱于TBE,适合中短时间常规DNA电泳,不适合长时间高电压运行。
(2)适用场景
TAE适合PCR产物检测、质粒酶切鉴定、大片段DNA分离和DNA胶回收。若电泳后需要连接、克隆、酶切或测序,TAE通常更合适,因为其对下游酶反应的干扰相对较小。
(3)选择要点
当实验目标是“确认条带并回收DNA”时优先选TAE;当目标是“小片段精细分辨”时不宜只依赖TAE,应考虑TBE或聚丙烯酰胺核酸凝胶。
2.2 TBE缓冲液
(1)组成与原理
TBE由Tris、硼酸和EDTA组成,缓冲容量较强,适合长时间运行和小片段核酸分离。硼酸盐体系能提高pH稳定性,使小片段DNA或寡核苷酸条带更清晰,但高电压运行时更容易发热。
(2)适用场景
TBE适合小片段DNA、寡核苷酸、核酸PAGE和需要高分辨率的电泳实验。对于100 bp以下片段或长度差异较小的DNA片段,TBE通常比TAE更容易获得清晰分辨。
(3)选择要点
当实验目标是“分得开小片段”时优先选TBE;当目标是“胶回收后直接做酶反应”时应谨慎使用TBE,回收后需充分纯化,避免硼酸盐影响后续反应。
2.3 SB缓冲液
(1)组成与特点
SB通常指硼酸钠缓冲体系,离子强度低,可在较高电压下快速运行,适合快速筛查DNA样品。它的优势是速度快、发热较低,但通用性和常规接受度通常不如TAE和TBE。
(2)适用场景
SB适合快速确认PCR扩增、酶切是否成功或样品是否存在明显条带。若需要精确判断片段大小、进行胶回收或分析复杂条带,TAE或TBE更稳妥。
2.4 RNA电泳缓冲液
(1)MOPS变性体系
MOPS缓冲液常用于甲醛变性琼脂糖凝胶,可降低RNA二级结构对迁移的影响,适合总RNA完整性分析、Northern blot前处理和较大RNA片段检测。RNA实验中,缓冲液、上样液、水和耗材均应保持RNase-free。
(2)尿素-PAGE体系
尿素变性PAGE适合小RNA、寡核苷酸和短RNA探针分析。尿素破坏二级结构,聚丙烯酰胺凝胶提供高分辨率,适合短片段差异分析,但对制胶、变性和温度控制要求更高。
表2 核酸电泳缓冲液选择
缓冲液类型 | 适用样品 | 主要优势 | 不适合场景 |
TAE | 常规DNA、大片段DNA、胶回收片段 | 迁移较快,胶回收兼容性好 | 长时间高分辨小片段分析 |
TBE | 小片段DNA、寡核苷酸、核酸PAGE | 缓冲容量强,小片段分辨率高 | 直接胶回收后进行酶反应 |
SB | 快速DNA筛查 | 运行快,发热较低 | 精细分辨和复杂样品分析 |
MOPS变性体系 | 总RNA、较大RNA片段 | 适合RNA完整性分析 | 非变性DNA常规检测 |
尿素-PAGE体系 | 小RNA、寡核苷酸 | 短片段分辨率高 | 常规大片段DNA筛查 |
3 蛋白电泳缓冲液分类
3.1 Tris-Glycine-SDS体系
(1)原理与适用范围
Tris-Glycine-SDS是经典SDS-PAGE运行体系,与Laemmli凝胶配合使用。SDS使蛋白变性并统一负电荷,Tris-Glycine不连续缓冲体系帮助蛋白在浓缩胶中堆积、在分离胶中按分子量分离。该体系适合多数重组蛋白表达验证、纯化过程监测、Western blot前电泳和常规分子量分析。
(2)选择要点
目标蛋白位于中等分子量范围时,Tris-Glycine-SDS通常是首选;若蛋白小于10 kDa或为多肽,条带容易靠近前沿并分辨不足,应考虑Tris-Tricine或Bis-Tris/MES体系。
3.2 Tris-Tricine-SDS体系
(1)原理与适用范围
Tricine替代Glycine作为尾随离子,可改善低分子量蛋白和多肽的分离效果。该体系适合小蛋白、短肽、截短表达产物、肽类药物相关样品和低分子量蛋白纯度分析。
(2)选择要点
小蛋白在Tris-Glycine体系中跑不清、跑到染料前沿或条带压缩时,应优先换用Tris-Tricine体系。该体系需要匹配相应凝胶配方,不能只更换运行缓冲液而沿用不合适的凝胶条件。
3.3 Bis-Tris/MES与Bis-Tris/MOPS体系
(1)MES体系
Bis-Tris/MES通常适合低至中等分子量蛋白,pH较温和,条带锐利,常见于预制胶系统。若目标蛋白偏小且希望获得较稳定的重复性,可选择MES运行液。
(2)MOPS体系
Bis-Tris/MOPS更适合中等至较高分子量蛋白。相比MES,MOPS对较大蛋白迁移更友好,适合常规中高分子量蛋白分离和Western blot前电泳。
(3)选择要点
Bis-Tris体系强调“胶和运行缓冲液匹配”。MES、MOPS不应随意替换到传统Tris-Glycine胶中,否则可能出现迁移异常、条带压缩或分辨率下降。
3.4 Native PAGE缓冲体系
(1)Native PAGE
Native PAGE不加入SDS或强变性剂,蛋白迁移受分子量、构象、复合物状态和自身电荷共同影响。该体系适合观察天然复合物、寡聚状态或保留部分活性的蛋白迁移,但不能直接按条带位置判断精确分子量。
(2)Blue Native PAGE
Blue Native PAGE利用考马斯亮蓝赋予蛋白复合物负电荷,同时尽量维持复合物结构,适合膜蛋白复合物、线粒体复合物和大分子复合物分析。选择该体系时需控制温和去污剂、样品盐浓度和蛋白复合物稳定性。
表3 蛋白电泳缓冲液选择
缓冲体系 | 适用目标 | 主要优势 | 选择注意点 |
Tris-Glycine-SDS | 多数常规蛋白 | 通用性强,适合表达和纯度检测 | 小蛋白分辨率有限 |
Tris-Tricine-SDS | 低分子量蛋白、多肽 | 小蛋白条带更清晰 | 需匹配专用凝胶体系 |
Bis-Tris/MES | 低至中等分子量蛋白 | pH温和,小蛋白分辨较好 | 通常与预制胶体系匹配 |
Bis-Tris/MOPS | 中等至较高分子量蛋白 | 适合中高分子量蛋白分离 | 不能随意替代传统SDS-PAGE运行液 |
Tris-Glycine Native | 天然蛋白、复合物 | 可保留部分天然构象 | 迁移不只取决于分子量 |
Blue Native体系 | 膜蛋白复合物、大复合物 | 适合复合物状态分析 | 需优化去污剂和样品条件 |
4 电泳缓冲液选择方法
4.1 按样品类型选择
(1)DNA样品
常规PCR产物、酶切片段和胶回收优先考虑TAE;小片段DNA、寡核苷酸或高分辨分析优先考虑TBE;只做快速筛查时可考虑SB。若后续需要连接、克隆或测序,TAE通常更稳妥。
(2)RNA样品
RNA样品不能只按DNA电泳思路处理。总RNA完整性分析应选MOPS变性体系,小RNA或寡核苷酸分析应选尿素-PAGE,并全程使用RNase-free水、缓冲液和耗材。
(3)蛋白样品
常规分子量分析选Tris-Glycine-SDS;低分子量蛋白或多肽选Tris-Tricine或Bis-Tris/MES;中高分子量蛋白可选Tris-Glycine或Bis-Tris/MOPS;需要保留复合物或活性时选Native PAGE或Blue Native PAGE。
4.2 按实验目的选择
表4 电泳缓冲液选择路径
实验目的 | 推荐体系 | 选择理由 |
常规PCR产物检测 | TAE或TBE | 两者均可满足条带确认 |
DNA胶回收 | TAE | 对后续酶切、连接和克隆更友好 |
小片段DNA分辨 | TBE或核酸PAGE | 分辨率更高,条带更集中 |
RNA完整性分析 | MOPS变性体系 | 降低RNA二级结构影响 |
小RNA分析 | 尿素-PAGE体系 | 适合短片段精细分离 |
常规蛋白表达验证 | Tris-Glycine-SDS | 通用、稳定、易比较 |
小蛋白或多肽检测 | Tris-Tricine-SDS | 低分子量区域分辨率更好 |
预制胶蛋白分析 | Bis-Tris/MES或MOPS | 与预制胶体系匹配 |
蛋白复合物分析 | Native PAGE或Blue Native PAGE | 保留复合物状态 |
5 常见异常与优化
5.1 条带弯曲或“笑脸”现象
条带弯曲通常来自电压过高、缓冲液过浓、电流过大或散热不均。DNA电泳可降低电压、增加缓冲液体积或使用新鲜工作液;蛋白电泳应检查运行缓冲液稀释倍数、凝胶厚度和电泳槽散热条件。
5.2 条带拖尾
核酸拖尾多与样品盐分高、DNA/RNA降解、缓冲液老化或上样量过多有关;蛋白拖尾多与样品未充分变性、蛋白降解、盐分过高或凝胶体系不匹配有关。优化时先处理样品质量,再调整缓冲液体系。
5.3 分辨率不足
分辨率不足不一定是电泳时间不够。小片段DNA应用TBE或PAGE,小蛋白应用Tricine或MES体系,大片段DNA应降低凝胶浓度并降低电压。缓冲液、凝胶浓度和目标分子大小必须同时匹配。
5.4 发热明显
发热与电流、电压、缓冲液浓度和运行时间有关。TBE、高浓度蛋白运行液或长时间PAGE更容易升温。若胶温明显升高,应降低电压、缩短运行时间、检查缓冲液稀释倍数,并避免反复使用老化工作液。
表5 电泳异常结果与调整方向
异常现象 | 可能原因 | 优先调整 |
条带弯曲 | 过热、电压高、缓冲液过浓 | 降低电压,更换新鲜工作液 |
条带拖尾 | 样品盐分高、缓冲液老化、样品降解 | 降低盐分,检查样品质量 |
小片段DNA分不开 | 缓冲体系或凝胶浓度不合适 | 使用TBE或PAGE,提高凝胶浓度 |
小蛋白跑不清 | Tris-Glycine体系分辨率不足 | 改用Tris-Tricine或Bis-Tris/MES |
RNA条带降解 | RNase污染或样品降解 | 使用RNase-free体系并检查RNA质量 |
蛋白迁移异常 | 样品未充分变性或缓冲体系不匹配 | 重新处理样品并匹配运行液 |
电泳发热 | 电流过大、缓冲液浓度高 | 降低电压,确认稀释倍数 |
6 相关产品与材料选型
表6 电泳缓冲液相关产品筛选
缓冲液类别 | 货号 | 名称 | 级别和纯度 | 选择要点 |
核酸电泳缓冲液 | BPTE电泳缓冲液 (10×, RNase Free) | BioReagent,分子生物学级,无RNA酶,用于核酸电泳,10× | 适合RNA相关核酸电泳 | |
核酸电泳缓冲液 | 快速核酸电泳缓冲液速溶颗粒 | 1 L/pouch | 适合快速筛查型核酸电泳 | |
核酸电泳缓冲液 | 碱性琼脂糖凝胶电泳缓冲液 | 10X | 适合碱性变性琼脂糖凝胶电泳 | |
核酸电泳缓冲液 | TPE缓冲液 (10×) | BioReagent, 用于核酸电泳, 10× | 可作为TAE、TBE以外的核酸电泳体系 | |
TAE核酸电泳缓冲液 | TAE缓冲液 | 10×,PH:8.2-8.4(1×) | 适合常规DNA电泳和胶回收 | |
TAE核酸电泳缓冲液 | TAE缓冲液 | 50× | 适合长期配制1×工作液 | |
TAE核酸电泳缓冲液 | TAE缓冲液 | 10×,PH:8.45-8.55(1×) | 适合常规DNA电泳 | |
TAE核酸电泳缓冲液 | TAE缓冲液 | 1× | 即用型 | |
TAE核酸电泳缓冲液 | TAE缓冲液 | 50×,无菌,DEPC处理 | 适合低核酸酶背景实验 | |
TAE核酸电泳缓冲液 | TAE缓冲液 | 1×,无菌,DEPC处理 | 即用型,适合低核酸酶背景实验 | |
TAE核酸电泳缓冲液 | TAE缓冲液 (50×, RNase Free) | BioReagent,分子生物学级,用于核酸电泳,无RNA酶,50× | 适合RNA相关样品电泳 | |
TAE核酸电泳缓冲液 | TAE缓冲液 (50×, 粉剂) | BioReagent,分子生物学级,用于核酸电泳,50× | 粉剂形式,便于储存和配制 | |
TAE核酸电泳缓冲液 | TRIS 醋酸盐-EDTA 缓冲液 | BioReagent, 分子生物学级, 10×, non-sterile; 0.2 μm filtered | 适合TAE体系DNA电泳 | |
TAE核酸电泳缓冲液 | TRIS 醋酸盐-EDTA 缓冲液 |
| 适合TAE体系DNA电泳 | |
TAE核酸电泳缓冲液 | TRIS 醋酸盐-EDTA 缓冲液 | BioReagent, 用于电泳 | 适合TAE体系DNA电泳 | |
TAE核酸电泳缓冲液 | TRIS 醋酸盐-EDTA 缓冲液 | 生物试剂,10倍浓缩物,用于分子生物学,DNase和RNase,未检测到,粉末混合,适用于电泳 | 适合低核酸酶背景TAE体系 | |
TAE核酸电泳缓冲液 | TRIS 醋酸盐-EDTA 缓冲液 50X 浓缩液 | PharmPure™ | 适合高规格TAE体系 | |
TAE核酸电泳缓冲液 | TRIS醋酸盐-EDTA缓冲液 | BioReagent, 用于电泳 | 适合TAE体系DNA电泳 | |
TAE核酸电泳缓冲液 | 盒装缓冲液,预混 TAE 缓冲液,10x | 用于电泳, pH range 8.4 | 预混体系,适合批量使用 | |
TBE核酸电泳缓冲液 | TBE缓冲液 | 1× | 即用型 | |
TBE核酸电泳缓冲液 | TBE缓冲液 | 10×,无菌,DEPC处理 | 适合低核酸酶背景实验 | |
TBE核酸电泳缓冲液 | TBE缓冲液 | 1×,无菌,DEPC处理 | 即用型,适合低核酸酶背景实验 | |
TBE核酸电泳缓冲液 | TBE缓冲液 | 10× | 适合小片段核酸分离 | |
TBE核酸电泳缓冲液 | TBE缓冲液 | 5× | 适合高分辨率核酸电泳 | |
TBE核酸电泳缓冲液 | TBE缓冲液 (5×, RNase Free) | BioReagent,分子生物学级,无RNA酶,用于核酸电泳,5× | 适合RNA相关PAGE或低RNase背景实验 | |
TBE核酸电泳缓冲液 | TRIS 硼酸盐-EDTA 缓冲液浓缩物,长期 | for Northern and Southern blotting, solution | 适合印迹前核酸分离 | |
TBE核酸电泳缓冲液 | TRIS-硼酸盐 EDTA 缓冲液,10X 浓缩液 | PharmPure™ | 适合高规格TBE体系 | |
TBE核酸电泳缓冲液 | TRIS-硼酸盐-EDTA 缓冲液 |
| 适合TBE体系核酸电泳 | |
TBE核酸电泳缓冲液 | TRIS-硼酸盐-EDTA缓冲液 | 5×浓缩物、粉末混合物 | 粉末混合物,便于储存和配制 | |
TBE核酸电泳缓冲液 | TRIS-硼酸盐-EDTA缓冲液 | 5倍浓缩 | 适合TBE体系核酸电泳 | |
TBE核酸电泳缓冲液 | TRIS-硼酸盐-EDTA缓冲液 | BioReagent, 用于电泳, 10× | 适合常规TBE体系 | |
TBE核酸电泳缓冲液 | TRIS-硼酸盐-EDTA缓冲液 | 生物试剂,用于分子生物学,5x浓缩物,DNase和RNase,未检测到,粉末混合物,适用于电泳 | 适合低核酸酶背景TBE体系 | |
TBE核酸电泳缓冲液 | TRIS-硼酸盐-EDTA缓冲液 | 工作溶液 | 即用型 | |
TBE核酸电泳缓冲液 | 盒装缓冲液,预混 TBE 缓冲液,10x | 溶液,透明无色,每包4升 | 预混体系,适合批量使用 | |
RNA电泳缓冲液 | MOPS-Sodium Acetate电泳缓冲液 | 10× | 适合RNA变性电泳 | |
RNA电泳缓冲液 | MOPS-Sodium Acetate电泳缓冲液 |
| 适合RNA变性电泳 | |
RNA电泳缓冲液 | MOPS-Sodium Acetate电泳缓冲液 | 1× | 即用型 | |
RNA电泳缓冲液 | MOPS-Sodium Acetate电泳缓冲液 | 10×,无菌,DEPC处理 | 适合低RNase背景RNA电泳 | |
RNA电泳缓冲液 | MOPS-Sodium Acetate电泳缓冲液 | 1×,无菌,DEPC处理 | 即用型,适合低RNase背景RNA电泳 | |
蛋白SDS-PAGE运行缓冲液 | SDS电泳缓冲液 | 10× | 适合常规SDS-PAGE | |
蛋白SDS-PAGE运行缓冲液 | 速泳SDS-PAGE电泳缓冲液 | 10× | 适合快速SDS-PAGE | |
蛋白SDS-PAGE运行缓冲液 | 三甘氨酸SDS缓冲液(pH8.3, 10×) |
| 适合Tris-Glycine-SDS体系 | |
蛋白SDS-PAGE运行缓冲液 | TRIS 甘氨酸缓冲液 | UltraBio™, 超纯级, 10× | 适合Tris-Glycine体系 | |
蛋白SDS-PAGE运行缓冲液 | TRIS-甘氨酸-SDS缓冲液10×浓缩液 |
| 适合常规SDS-PAGE | |
蛋白SDS-PAGE运行缓冲液 | TRIS-甘氨酸缓冲液 10× 浓缩液 |
| 适合Tris-Glycine体系 | |
蛋白SDS-PAGE运行缓冲液 | Tris-甘氨酸-SDS缓冲液 | 5× | 适合常规SDS-PAGE | |
蛋白SDS-PAGE运行缓冲液 | Tris-甘氨酸缓冲液 | 5×,pH 8.5 | 适合Tris-Glycine体系 | |
蛋白SDS-PAGE运行缓冲液 | Tris-甘氨酸-SDS快速电泳缓冲液 (10×) | BioReagent, for western blot, 用于聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 适合快速SDS-PAGE | |
蛋白SDS-PAGE运行缓冲液 | Tris-甘氨酸-SDS电泳缓冲液(粉末) | for western blot, BioReagent, 适用于电泳, 用于聚丙烯酰胺凝胶电泳, 1L/袋 | 粉末形式,适合标准化配制 | |
Tricine蛋白电泳缓冲液 | TEA-Tricine SDS电泳缓冲液 | 20×,pH8.3 | 适合低分子量蛋白和多肽 | |
Tricine蛋白电泳缓冲液 | TRIS-三cine-SDS 缓冲液 10× 浓缩液 |
| 适合低分子量蛋白和多肽 | |
Tricine蛋白电泳缓冲液 | Tris-Tricine-SDS 电泳缓冲液速溶颗粒 | BioReagent, for western blot, 用于聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 速溶颗粒,适合标准化配制 | |
Tricine蛋白电泳缓冲液 | Tris/Tricine/SDS电泳缓冲液(10×) | BioReagent, 用于聚丙烯酰胺凝胶电泳, for western blot, 适用于电泳, 10× | 适合低分子量蛋白和多肽 | |
Tricine蛋白电泳缓冲液 | Tricine-SDS阳极电泳缓冲液 (10X) | BioReagent, for western blot, 用于聚丙烯酰胺凝胶电泳, 10X | 需与阴极缓冲液配套使用 | |
Tricine蛋白电泳缓冲液 | Tricine-SDS阴极电泳缓冲液 (10X) | BioReagent, for western blot, 用于聚丙烯酰胺凝胶电泳, 10X | 需与阳极缓冲液配套使用 | |
Bis-Tris/MES蛋白电泳缓冲液 | MES-SDS电泳缓冲液 | 10× | 适合中低分子量蛋白 | |
Bis-Tris/MES蛋白电泳缓冲液 | Tris-MES-Native电泳缓冲液(粉末) | BioReagent, 适用于电泳, 用于聚丙烯酰胺凝胶电泳, 用于蛋白分析, 1L/袋 | 适合Native PAGE | |
Bis-Tris/MES蛋白电泳缓冲液 | Tris-MES-SDS 电泳缓冲液(粉末) | BioReagent, 适用于电泳, 用于聚丙烯酰胺凝胶电泳, for western blot, 1L/袋 | 适合MES-SDS体系 | |
Bis-Tris/MOPS蛋白电泳缓冲液 | MOPS-SDS电泳缓冲液 | 10× | 适合中高分子量蛋白 | |
Bis-Tris/MOPS蛋白电泳缓冲液 | Tris/MOPS/SDS电泳缓冲液速溶颗粒 | BioReagent, 用于聚丙烯酰胺凝胶电泳, for western blot | 速溶颗粒,适合标准化配制 | |
Bis-Tris/MOPS蛋白电泳缓冲液 | Tris/MOPS/SDS电泳缓冲液(20×) | BioReagent, 用于聚丙烯酰胺凝胶电泳, for western blot, 适用于电泳, 20× | 适合MOPS-SDS体系 | |
Bis-Tris/MOPS蛋白电泳缓冲液 | TruPAGE™ TRIS-MOPS SDS Express 运行缓冲液 | 20× | 适合TruPAGE体系 | |
Bis-Tris/MOPS蛋白电泳缓冲液 | Tris-MOPS-Native电泳缓冲液(粉末) | BioReagent, for western blot, 适用于电泳, 用于聚丙烯酰胺凝胶电泳, 1L/袋 | 适合Native PAGE | |
Bis-Tris/MOPS蛋白电泳缓冲液 | Tris-MOPS-SDS电泳缓冲液(粉末) | BioReagent, 适用于电泳, 用于聚丙烯酰胺凝胶电泳, for western blot, 1L/袋 | 适合MOPS-SDS体系 | |
Tris-Acetate蛋白电泳缓冲液 | Tris-Acetate-Native 电泳缓冲液(粉末) | BioReagent, for western blot, 适用于电泳, 用于聚丙烯酰胺凝胶电泳, 500mL/袋 | 适合Native PAGE | |
Tris-Acetate蛋白电泳缓冲液 | Tris-Acetate-SDS 电泳缓冲液(粉末) | BioReagent, 适用于电泳, 用于聚丙烯酰胺凝胶电泳, for western blot, 500mL/袋 | 适合高分子量蛋白或Tris-Acetate体系 | |
Tris-Acetate蛋白电泳缓冲液 | Tris-乙酸SDS电泳缓冲液 (20X) | BioReagent, for western blot, 用于聚丙烯酰胺凝胶电泳, 20X | 适合Tris-Acetate SDS体系 | |
Tris-Hepes蛋白电泳缓冲液 | Tris-Hepes-Native 电泳缓冲液(粉末) | 用于显微镜, 用于聚丙烯酰胺凝胶电泳, 适用于电泳, BioReagent, 500mL/袋 | 适合Native PAGE | |
Tris-Hepes蛋白电泳缓冲液 | Tris-Hepes-SDS电泳缓冲液(粉末) | BioReagent, 适用于电泳, 用于聚丙烯酰胺凝胶电泳, for western blot, 500mL/袋 | 适合Tris-Hepes SDS体系 | |
Native PAGE缓冲液 | Tris-甘氨酸-Native电泳缓冲液(粉末) | BioReagent, for western blot, 适用于电泳, 用于聚丙烯酰胺凝胶电泳, 1L/袋 | 适合天然蛋白或复合物分离 | |
Blue Native PAGE缓冲液 | UltraBio™ Blue Native PAGE阳极电泳缓冲液 | 5X | 需与Blue Native PAGE阴极缓冲液配套使用 | |
Blue Native PAGE缓冲液 | UltraBio™ Blue Native PAGE阴极电泳缓冲液I | 5X | 适合Blue Native PAGE | |
Blue Native PAGE缓冲液 | UltraBio™ Blue Native PAGE阴极电泳缓冲液II | 5X | 适合Blue Native PAGE |
7 常见问题
7.1 TAE和TBE怎么选?
常规DNA检测和胶回收优先选TAE;小片段DNA、高分辨率分析或长时间电泳优先选TBE。若只是确认PCR是否扩增成功,两者都可使用;若后续要连接、克隆或酶切,TAE更稳妥。
7.2 为什么同样的DNA样品在TAE和TBE中迁移不同?
TAE和TBE的离子强度、缓冲容量和电导率不同,会改变DNA迁移速度和条带形态。TAE中DNA通常迁移较快,TBE中小片段分辨率更好,但凝胶浓度、电压和运行时间也会共同影响结果。
7.3 RNA电泳能不能直接用TAE或TBE?
不建议用于准确评价RNA完整性。RNA容易形成二级结构,也容易被RNase降解,应使用MOPS变性体系或尿素-PAGE,并配合RNase-free水、缓冲液和耗材。
7.4 SDS-PAGE运行缓冲液能否换成普通Tris缓冲液?
不能。SDS-PAGE运行缓冲液参与蛋白堆积和分离过程,普通Tris缓冲液不能替代Tris-Glycine-SDS或对应预制胶运行体系,否则容易出现条带扩散、迁移异常和分辨率下降。
7.5 小蛋白跑不清楚应该怎么处理?
优先考虑Tris-Tricine-SDS体系或Bis-Tris/MES体系,并提高凝胶浓度。若后续要Western blot,还应防止小蛋白转膜过度穿透。
7.6 电泳缓冲液可以重复使用吗?
不建议长期重复使用。重复使用会降低缓冲容量、改变离子组成并增加污染风险。对RNA电泳、Western blot前电泳、高分辨率核酸分析和定量比较实验,应使用新鲜或规范保存的工作液。
电泳缓冲液应按样品类型和实验目的选择:DNA胶回收优先TAE,小片段核酸分辨优先TBE,RNA分析使用RNase-free变性体系,常规蛋白电泳使用Tris-Glycine-SDS,小蛋白和多肽选择Tris-Tricine或Bis-Tris/MES体系。
更多相关文章,详见下方:
[1] 用于核酸电泳
[2] 核酸电泳工作流程-5大主要步骤
[3] 核酸电泳故障排除指南
[4] 电泳缓冲液
[5] 甲醛凝胶电泳缓冲液
危险品化学品经营许可证(带存储)